常用pH缓冲溶液的配制和pH值12900字.docx

    常用pH缓冲溶液的配制和pH值12900字    （一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量 试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteed reagent，G．R．）、分析试剂（Antalytical reagent，A．R．）化学纯（Chemical pure，C．P．）和实验试剂（Laboratory reagent，L．R．）等等工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等2．药品称量要精确3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1 000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1 000ml）2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O 11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1 000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1 000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液附表1 磷酸盐缓冲液配制法（单位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.26.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.3 7.7 89.4 10.66.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0（三）0.15Mol/L PB液附表2 0.15Mol/LPB液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4（ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO4·2H2O分子量=175.05 0.15Mol/L溶液含26.7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含53.7g/L NaH2PO4·H2O分子量=138.00 0.15Mol/L溶液含20.7g/L NaH2PO4·2H2O分子量=156.03 0.15Mol/L溶液含23.4g/L （四）0.2Mol/L PB缓冲液附表3 0.2mol/L PB缓冲液配制法pH 0.2 Mol/L Na2HPO4（ml） 0.2Mol/L NaH2PO4（ml）5.8 8.0 92.06.0 12.3 87.76.2 18.5 81.56.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.07.8 91.5 8.58.0 94.7 5.30.2Mol/L Na2HPO4·2 H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12 H2O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2 H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/L PB缓冲液则在0.2Mol/L PB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（0.15Mol/L PH 7.2）NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物六）硼酸盐缓冲液（Borate saline buffer） 文章来自： 医药园 () 整理：zfg1．硼酸（Ｈ3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g加水至1 000ml2．硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1 000ml附表4 不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml） pH 0.05Mol/L硼砂（ml） 0.2Mol/L硼酸（ml）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0（七）巴比妥缓冲液1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液巴比妥钠 47.6g蒸馏水 3 000ml1.17N HCl 55.0ml（1.17 N HCl=193ml浓HCl加1 807ml蒸馏水）⑴ 将4.76g巴比妥钠溶于3 000ml蒸馏水。

⑵ 加1.17 N HCl 55ml⑶ 用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4 265ml2．pH8.4 0.06Mol/L巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 巴比妥钠 10.30g 加蒸馏水至 1 000.00ml3．pH8.6 0.06Mol/L巴比妥缓冲液 巴比妥 1.66g 巴比妥钠 12.76g 加蒸馏水 1 000.00ml （八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液 见表附表5 附表5 0.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法 pH 0.2Mol/LTris（ml） 0.1Mol/LHCl（ml） pH 0.2Mol/LTris（ml） 0.1Mol/LHCl（ml）23℃ 37℃ 23℃ 37℃9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.58.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.5 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液） 不同pH，0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）附表6 Tris—HCl缓冲液配制法pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml) pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml)23℃ 37℃ 23℃ 37℃9.10 8.96 25 5 8.05 7.90 25 27.58.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.58.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.08.14 8.00 25 25.0 25三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：Tris24.23g，加水至1 000ml。

0.1NHCl：取HCl8.6ml，加水至1 000ml十）0.5Mol/L pH9.5碳酸盐缓冲液NaHCO3 3.70gNa2CO3 0.60g溶于600.00ml蒸馏水中即得不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降最好小量配制十一）甘油磷酸缓冲液1．配制pH8.0磷酸缓冲液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液 用途：用于免疫荧光试验十二）Hank’s液1．贮存液NaCl 80.00gKCl 4.00gNa2HPO4·12 H2O 1.52gKH2PO4 0.60g葡萄糖 4.00g0.4％酚红液 50.00ml双馏水加至 100.00ml115℃高压灭菌15min，冰冻保存2．工作液贮存液 1份双馏水 9份115℃高压灭菌15min临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’s reagent）配方1：氯化汞 6.0g碘化钾 12.4g20％NaOH 30ml加蒸馏水至 100ml配方2：碘化汞 11.5g碘化钾 8g蒸馏水 50ml（完全溶解后）过滤，加20％NaOH 50ml。

用途：检测溶液中氨离子十四）阿氏（Alsever’s）液葡萄糖 2.05g柠檬酸钠 0.80g氯化钠 0.42g蒸馏水 100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液） 青霉素（40万U） 5支链霉素（200万μg） 1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml十六）洗液（清洁液）配方1：重铬酸钾 150g蒸馏水 300ml浓硫酸 3 000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加此为强洗液盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用配方2：浓硫酸 50%蒸馏水 50%重铬酸钾 5%此为。