植物化学保护实验指导（二）.docx

皋木原理：昆虫在取食正常食物的同时将药剂摄入消化道, 经肠壁细胞吸收进入血液，随血液循环到达作川部位而使 昆虫中毒它利川昆虫的贪食性，因此要尽量避免药剂与 昆虫体壁接触而产牛其它毒杀作用测定方法有（1）液滴 饲喂法；（2） 口腔注射法；（3）叶片夹毒法一、叶片夹毒法基本原理：在两叶片中间均匀地夹入一定量的杀虫剂，饲 喂II标昆虫，药剂随叶片被昆虫取食，然后由被吞食的叶 片面积，计算出吞食的药量优点是可以减少「I标昆虫与 杀虫剂的接触，避免发生触杀作川，操作方便，结果比较 粘确叶片夹毒法只适川于植食性的，取食量人的咀嚼口 器II标昆虫，如粘虫、煌虫.玉米螟等1、 实验材料：药剂：90%敌百虫溶剂：丙酮试虫：菜青虫或斜纹夜娥幼虫：30〜50头用具：培养皿30〜50个，木塞钻（口径2cm）,微:戦射器10微升1支，浆糊或明胶生物材料：甘蓝叶、萬麻叶等2、 实验方法：用木塞钻制成直径2cm的|员I心叶片60片，把圆叶片放 在湿润的培养皿中待用夹毒叶的制备：川丙酮将敌百虫稀释成有效成分为0. 1%的 药液，用微量注射器吸敌白虫丙酮液10微升，均匀滴在叶 片上，计算出每张圆叶片药量（mg/厘米a用浆糊（或明 胶）涂在无药的圆叶片上，两相对合，即成夹毒叶片，同 时制备不夹毒叶片2〜4片作对照。

每培养皿中放一片，另 放一团湿棉花或湿水草纸一小块保湿，然后编号采冋的试虫先饥饿数小时，每头虫称重，每培养皿放一-头 虫，饲喂夹毒叶片3、 结果观察及计算：观察试虫取食情况,控制食叶量一部份虫食叶片1/3,-部 分虫食叶片1/2, 一部分食叶片3/4或全部叶片然后取出 剩余的夹毒叶片，饲喂新鲜叶片，经3-24小吋后，检查死 亡率食量的计算：将剩余的叶片放在直径2cm的方格纸上，计 数被吃去的方格数（1亳米/I格），然后按每张圆叶片上 的总药量，计算每一方格的剂量，即可求出取食药量从 而求得每头虫单位体重所取食的剂量（吨或微g/g体重）致死中量的讣算：按每头虫食剂量的大小顺序排列 将供试昆虫分为三组（1）牛存组；（2）中间组（有牛存的, 也有死亡的）；（3）死亡组;在计算LD5时只用中间组,所 以设计浓度时，生存组和死亡组反应试山数目越少越好 中间组乂分生存部分和死亡部分》（中间组活虫剂量） x仲间组死虫剂量）A二中问组活虫总数 B二中间组死虫总数A + B致死中量（LDso）二 2 （单位：mg或微g/g体重）药剂对昆虫的剂量一反应记录表实验报告：写出供试药剂对供试昆虫剂量反应的实验 报告。

实验八杀虫剂内吸作用毒力测定［皋木原理］:将药剂接触到植物的某一部分（如根、茎、 叶、种子），药剂可渗入植物体内，并随体液传导到全株或 植株的某一部分，在一定时间内，让昆由取食没有直接用 药的植物组织，观察其致潯反应木实验采川包扎法和药 液培养法，忖的是通过实验了解药剂的内吸性能并初步掌 握内吸杀虫剂的测定原理及方法［实验材料］:供试昆虫：花牛妈虫：供试植物：花牛苗供试药剂：50%乐果EC, 25%螟蛉畏EC, 50%杀螟松 EC用具:烧坏（250ml）,试管（2X180）,移液管，试管 架、药棉、塑料布、剪刀、纸套等［实验方法］:药剂配制:将三种供试药剂配成有效含量为0. 5%的乳 液各50ml o内吸测定方法：1、 涂抹包扎法：挑选生长发育一致，叶片带蜗量较一致（20-25头）的花生 苗12株，每株在颈部包扎一圈脱脂棉，用移液管吸取上述 药液0.2ml滴于脱脂棉上外部用塑料布缠绕后,用线结 扎，防止药剂蒸汽挥发，每一药剂重复三次，每处理一株， 对照用淸水、垂复三次，将已就药的花牛苗用纸袋套住， 插在盛有清水的试管中，排列在试管架上，各处理间不要 接触，24小时后解开纸袋，统计呀虫平均死亡率，比较各 药剂的内吸每效。

2、 药液培养法：先将供试药配成lOppm水溶液，分别注入试管内，每管 20ml,对照用清水，重复三次，挑収生长发育一致，叶片 带虫牙暈较一致（20〜25头）的花牛苗12株，插入液血10cm 处，精确计算苗上呀山的数目后，用纸套住，24小时后统 计平均死亡率［实验报告］:将实验结杲整理成表，并比较儿种药剂的内吸作用，判断哪 种药剂不是内吸剂［基本原理］:在适当气温下，利川有毒的气体、液体或固体 挥发产牛的蒸气毒杀害虫(或病菌)，称为熏蒸熏蒸时， 毒剂主要以气态从昆虫的气门进入气管，再分布到全身的 气管，然后到达神经作用部位.因此测定熏蒸毒力的装置 都必须棊于同一原则，即试虫在一密闭容器中不能和固态 或液态的毒剂直接接触毒剂只能以气态和试虫接触常见熏蒸作用的测定方法有二重皿法、干燥器法、广口瓶 法、药纸熏蒸法和三角瓶法：［实验材料］:供试药剂;(1) 50%敌敌畏EC、(2) 50%马拉硫磷EC,(3) 90%敌白虫结品试应；赤拟谷盗用具:培养皿12个,干燥器4个,移液管0. 2mll3支, 滤纸、量筒、烧杯、纱布等［实验方法］:1、二重皿熏蒸法：处理；在培养川L底内加入5ml供试药液,药剂配制：每组实验药剂稀释成有 效成分含量0.5%一药液，各20ml (用水 稀释)。

J 药 HII口盖纱布或纱网盖1张，将试虫20〜 下皿 30头放在纱布或纱网上，再盖相同口径 的培养皿底，使其密闭对合(如图)，各 药剂垂复3次，对照用清水，半小时、1小时、5小时后， 观察计算平均死亡率2、 干燥器熏蒸法：取供试虫60头分放三个小烧杯中，杯口用纱布扎紧(三 个重复)放在干燥器磁板上，再将供试药剂稀释成有成分 含量为0. 1%药液20ml,放入干燥器底部，对照川清水， 盖好干燥器盖，一定时间后，在通风处迅速取出试虫，统 计死亡率3、 广口瓶法：用两个广口瓶(250ml),在一个广口瓶中 放入一定数量的目标昆虫，另一个广口瓶中放入定量药剂, 川橡皮塞和多个玻璃管把广口瓶连接，震荡，使药剂挥发, 气体均匀分散，作川一定时间后，将目标昆虫移入干净器 皿中，放入新鲜饲料，盖上纱布，规定时间内观察目标昆 虫的中毒死亡情况4、 药纸熏蒸法：在三角瓶（500-1000ml）的瓶塞上，用大 头针固定0.5-1.0cm的滤纸片，在滤纸片上滴加l・2ul的敌 敌畏原油或其他熏蒸剂，然后将麻醉的家蝇放入瓶内，盖 上瓶塞，25C温度下，一定时间后，观察试虫的击倒中毒 反应5、 三角瓶法：在三角瓶底部放入含有一定量熏蒸剂的滤纸 片（4X4cm）,用纱布袋包一定数量的试虫，然后，把布袋 固定在瓶塞上，让布袋悬挂在三角瓶中，25C温度下，一 定时间后，观察试虫的中毒和死亡情况。

［实验报告］:列表记录试验结果，比较各种药剂的毒力并分析哪种供试 药剂没有熏蒸作用第四部分除草剂生物测定除草剂的牛物测定技术是指利用牛物体（主要指有害牛物） 对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及效果的棊本方法, 是发展除草剂生产和使用不可缺少的工作，是研究除草剂 特性的重要手段，也是水中、土壤中残留除草剂分析的有川 工具实验十九种子萌发鉴定指示植物的种子（常用黄瓜、高粱、燕麦）在秋J剂处 理过的砂土内萌发，一般不以萌发率作为评判指标，而是 在萌发后一定时间内测定根和茎的长度，并以此作评判标 准激素型除草剂，如2, 4-D类，一燉采用这种方法在 -定范围内，根和茎的仲长和除草剂的浓度呈相关性，因 而可用作除草剂的定量测定，灵敏度较高属于这类的测 定方法如下：1、除草剂培养皿法培养皿法简单易行国内大多采用琼脂、土、砂、滤纸为 培养基质，川敏感植物的根长抑制率或芽长抑制率与药剂 浓度进行冋归，从而测出药剂的EC5（）o试验中发现培养皿 测定土壤处理剂钱为合适，但对茎叶处理剂的测定结果与 田间试验结果有较大的差异本试验通过用培养川I•法测定 土壤处理剂的活性［实验材料］培养川L、滤纸、稗草种子、保鲜膜、光照培养箱、乙 草胺［实验方法］1、 将稗草种子催芽3〜4d ,待稗草种子露白后备用。

2、 把甲草胺川水按系列浓度稀释法，稀释成6个不同 浓度的药液3、 在铺有一张圆滤纸、直径为9cm的培养1IIL中加入 各个浓度的待测药液5m 1 o4、 精选整齐刚厳白的稗草种子8粒于培养血中，盖好 保鲜膜每个处理重复3次5、 将培养皿放入L RH-2 50G型光照培养箱（广东省 医疗器械厂），在2 7C下培养4d6、 用空白作对照［结杲整理］用直尺测量稗草的芽氏，粕确到毫米抑制率（%）=对照组芽（根）长-处理组芽（根）长对照组芽（根）长 X［实验报告］:记录实验结果，完成实验报告求出抑制率, 并计算EC50 o2、黄瓜幼苗形态法黃瓜幼苗形态法是测定激素型除草剂和植物生长调节剂活 性的经典方法测定原理是以不同剂量的药剂所引起黄瓜 幼苗形态上的不同变化来测定样品活性该法具有操作简 单，灵敏度高（可测；1! 0.05ppm）的特点将样品配成一系列浓度的丙酮溶液，用直径11cm的滤 纸在其中浸透，取出吹干，放入直径12cm的培养皿中，再 在滤纸上铺二张同样大小的耒浸药的滤纸挑选饱满度一 致黄瓜种子，在5%的漂口粉液中消毒半小时，取出晾干， 每血排放20粒，并加入12ml蒸懈水（据该方法建立者Sudi 测定，此时血内样品的实际浓度比原来浸滤纸时降低10 倍），盖好皿盖，置25C恒温下黑賠培养6天，取出观察黄 瓜幼苗的形态。

将2, 4-D的一系列浓度下黄瓜幼苗形态画成“标准图 谱”（就彖化学分析中的标准曲线一样），然后用测定样品 的黄瓜幼苗形态去和标准图谱对比，就可确定2, 4・D类除 草剂的含量或比较待测样品的除草活性大小3、高粱法（皿内法）高粱法适合于非光合作用抑制剂的牛物测定它具有操作 简便、培养期间不用管理、周期短，测定范围广，重现性 好等优点，因而被国内外许多实验室采用先将高粱种子放在湿滤纸上，24C温度下萌发15~20h,待 长出胚芽1~2俪时取用配制一系列浓度的待测样品溶液, 将16俪某浓度的样品溶液放入124g石英砂中，仔细拌均 将此湿的石英砂装入9 cm一直径的培养皿中，刮平使为皿边 对齐选10粒准备好的萌动高粱种子，排列于砂表而，胚 部向上而幼根沿同一方向排成一行，盖上皿中，将培养皿竖 立倾斜15度放入24C温箱，黑暗中经16〜18h,将根尖的位置 用蜡笔标于皿盖上，经过24h,取出培养皿，从标记处测量根 延伸的长度,精确到毫米上海植物生理所对此法作了些改进：用直径9 cm的培养皿， 装满干燥黄砂，刮平，每皿加入30ml药液，正好使全皿干 砂浸透，然后用有10个齿的“齿板”在皿的适当位置轻轻 压出10个小坑，以便每皿能排10粒根长l~2cm （选用根 尖尚未长出根鞘者）的萌发高粱种子。

为了缩短时间，在 排种培养的询1天，让上述准备好的培养皿，置于34C保 温过夜，使砂温提高，8h后即可划道标记幼根起点，再过 14〜16小时，待对照根长30mm左右即可测量吴文君采用小麦种子代替高粱，亦収得满意结果，但对2, 4—D类除草剂来说，小麦不如高粱敏感，其灵敏度比高粱 差1个数量级4、 小麦根长法在直径为9cm的培养肌内铺满一层小玻璃球（直径为 0.5cm）,移入10ml不同浓度的待测药液，放入10粒露白 的小麦种子，重复三次，以蒸懾水为对照，在20—25C培 养箱中培养5-7 d后取出，测量根长，计算抑制率和IC5（） 值本法可用來比较杀单子叶杂草的除草剂间的活力，如 氟乐灵、除草通、绿麦隆等5、 稗草胚轴法在50ml烧杯中，加入5 ml不同浓度的除草剂溶液， 放入10粒发芽整齐、大小一致的稗草籽，在种子周围撒些 T净石英。