紫外可见分光光度计的介绍及使用电子教案.ppt

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版副标题样式*1 紫外可见分光光度计主要内容1 仪器构成及原理2 分光光度计的使用波长扫描定量测定3 注意事项物质对光的选择性吸收溶液对光的作用 溶液对光的作用示意图I0 入射光辐射强度I 透射光辐射强度T 透射比a吸光系数摩尔吸光系数光吸收遵循朗伯-比尔定律：溶液对光吸收示意图 溶液对光吸收过程偏离朗伯比尔定律的原因-化学因素v朗伯-比尔定律的假设条件一：入射光为单色光v朗伯-比尔定律的假设条件之二：吸收粒子是独立的，彼此之间无相互作用比尔定律适用于稀溶液v吸光组分的化学变化：吸光组分的缔合、离解，互变异构，络合物的逐级形成，以及与溶剂的相互作用等，都将导致偏离比耳定律组成：光源、单色器，狭缝、样品池、检测器1光源：能提供连续的辐射；光强度足够大；在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；光谱范围宽；使用寿命长，价格低钨灯可见光区3202500nm氢灯或氘灯紫外光区195375nm 组成2单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件单色器是分光光度计的心脏部分，它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长它的主要组成部件和作用是：入射狭缝限制杂散光进入。

色散元件即棱镜或光栅，是核心部件，可将混合光分解为单色光准直镜把来自入射狭缝的光束转化为平等光，并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上出射狭缝只让特定波长的光射出单色器3. 吸收池玻璃由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区；石英适用于紫外和可见光区4检测器：将光信号转变为电信号的装置v光电管v光电倍增管v二极管阵列检测器5记录装置：讯号处理和显示系统开始方法设定样品名输入将空白样品分别放入参比池和样品池进行用户基线校正将样品放入样品池开始测量开始测量打印数据二 波长扫描启动UV Solution软件1.打开仪器主机电源用鼠标点击Windows开始菜单中的HitachiApplications选项中的UVSolutions2.0选项或者直接在桌面上双击UVSolution图标2运行UV Solution软件软件将自动配置计算机的串行口（RS 232 Port）见图仪器在初始化过程中进行如下自检工作：vROM检测vRAM检测v波长步进电机运转检测v氘灯点亮检测v钨灯点亮检测v仪器波长校正3仪器主机开始初始化见图4仪器主机初始化完毕，进入工作状态测量参数设置1在Edit菜单中选择Method选项，或按按钮。

出现下列窗口General:总体设置页面vMeasurement测量:Wavelengthscan波长扫描Timescan时间扫描Photometry定波长测量vOperator操作者:输入操作者的姓名vInstrument仪器:仪器型号由软件自动从仪器主机获得vUseSampleTable使用样品表:选择是否使用样品表vComments备注:填写一些备注信息vLoad按钮:用于装载原来保存的方法文件vSave按钮:保存当前的设置参数vSaveAs按钮:将当前设置参数另存为一个方法文件Instrument仪器参数设置页面vDatamode读数显示方式，选择Abs吸光度，波长扫描的起止范围一般为190-800，狭缝值一般为2vLight一般选择“Auto”Monitor显示页面Processing数据处理页面Report报告结果页面样品名设置，备注信息及文件名输入基线校正v用户基线校正方法：可将scanspeed设小一些；进行样品扫描时，可设大一些将空白样品分别放入样品室的参比光路和样品光路按按钮v系统基线校正方法使用空气作为参比和样品按按钮出对话框见图，选择System后按OK按钮，进行系统基线校正。

测量有两种方法可以开始测量：v使用菜单方式选择Spectrophotometer菜单下Start选项开始测量v使用按钮方式：按按钮开始测量v如果要终止扫描按按钮二光度扫描开始方法设定样品名输入将空白样品分别放入参比池和样品池将样品放入样品池开始测量开始测量打印数据进行用户基线校正测量参数设置在Edit菜单中选择Method选项出现下列设置窗口.具体操作程序Method:1.general:Measurement测量方式选择Photometry（光度计测量）2.Quantitation定量参数设置页面：在measure中选择波长wavelength，在Calibration中选择“1storder”，“2storder”，“3storder”，也可以不校准在concertration中键入标准浓度单位3.Instrument4standards标准参数设置键入标系的样品浓度及名称5吸光度自动校零在开始测试前，需要进行吸光度校零在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品按按钮进行吸光度校零6在wavelength中设定扫描的最大吸收波长，7放入标样，选中第一个标样，点measure依次测定完成后自动给出标准曲线。

8选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名9关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power三 注意事项1. 开机预热15分钟左右2. 测定时应注意：v参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致v使用前后应将洗手池洗净，测量时不能用手接触窗口v已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变3. 测量条件的选择：v选择适宜波长的入射光:由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度,必须选择溶液最大吸收波长的入射光v控制吸光度A的准确的读数范围:由朗伯-比耳定律可知,吸光度只有控制在0.20.7读数范围内时,测量的准确度较高.v选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液4. 用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机 5. 正确登记，将仪器及实验台擦干净测 试 题1.分光光度计由哪几部分组成？设计其光路图2.紫外可见分光光度计对光源的要求是什么？ 一般采用哪几种光源，各光源的波长范围是什么？3.比色皿一般由什么材料制成？有哪几种规格？做实验时，你是如何选择比色杯的规格及材料的？4.为什么测定时使用参比池？参比溶液怎么选择？5.在进行波长扫描与光度测定时需要设置哪些参数？。