DNA倍体分析联合腹水-血清CEA比值测定对腹水性质鉴别诊断价值-2016年最新医学论文.doc

精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询DNA 倍体分析联合腹水/血清 CEA 比值测定对腹水性质鉴别诊断价值【摘要】 目的 探讨应用流式细胞仪(FCM)进行腹水细胞 DNA 倍体分析，以及联合检测腹水/血清癌胚抗原（CEA）比值对良、恶性腹水的鉴别诊断价值方法 应用流式细胞术对 106 例腹水病人（良性腹水 50 例，恶性腹水 56 例）进行腹水细胞 DNA 倍体分析，以腹水细胞中发现异倍体为阳性；同时采用 ELISA 法进行腹水及血清 CEA测定，以血清或腹水 CEA 浓度 5 μg/L、腹水 /血清 CEA 比值 1 为阳性结果 恶性腹水组病人的腹水/血清 CEA 比值阳性率及腹水中检出异倍体的阳性率均明显高于良性腹水组腹水/血清 CEA 比值阳性和腹水中检出异倍体诊断恶性腹水的灵敏度和特异度分别为51.79%、98.00%和 71.43%、86.00%腹水中检出异倍体与腹水/血清 CEA 比值阳性联合诊断恶性腹水的灵敏度和特异度分别为 92.86%和 100%结论 DNA 倍体分析、腹水/血清 CEA 比值检测对于鉴别良、恶性腹水是有价值的生物学指标，二者联合可以提高鉴别诊断良、恶性腹水的灵敏度和特异度，提高诊断效能。

【关键词】 腹水 癌胚抗原 DNA 倍体分析 诊断 鉴别 ［ABSTRACT］ Objective To investigate the differential diagnostic significance of DNA ploidy analysis and ascites/serum carcinoembryonic antigen ratio assay in malignant and benign ascites. Methods Flow cytometry (FCM) was used for DNA ploidy analysis. If a aneuploidy was J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询detected, the result of the DNA ploidy analysis was defined as positive. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect CEA in both ascites and serum. CEA value 5 μg/L and ascites/serum CEA ratio 1 was considered positive. Results The positive rates of serum CEA, ascitic CEA, ascites/serum CEA ratio and aneuploidy in malignancy were higher than those in benign ascites group. The sensitivity and specificity of ascites/serum CEA ratio in diagnosis of malignant ascites were 51.79%,98.00% and that of aneuploidy were 71.43%,84.00%. The sensitivity and specificity of combined usage of aneuploidy and ascites/serum CEA were 92.86% and 100%. Conclusion Our study confirmed the value of ascites/serum CEA ratios assay and DNA ploidy analysis in differential diagnosis of malignant ascites, and the combination of ascites/serum CEA ratios assay and the DNA ploidy analysis could increase sensitivity and specificity of differential diagnosis of malignant ascites from benign ascites. ［KEY WORDS］ Ascites; Carcinoembryonic antigen; DNA ploidy analysis; Diagnosis, differential 腹水的病因诊断是一个临床难题，恶性肿瘤引起的恶性腹水约占腹水病因的 10%，预后极差，临床上以腹水为主要表现的病人，应J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询该首先鉴别其良、恶性质。

本文以流式细胞仪检测腹水细胞的 DNA倍体，并联合基于酶联免疫吸附法（ELISA）检测的腹水和血清癌胚抗原（CEA）浓度计算出的腹水/血清 CEA 比值作为指标，探讨其在良、恶性腹水鉴别诊断中的临床意义 1 对象和方法 1.1 研究对象 选取 2005 年 1 月～2007 年 3 月期间在我院消化科住院的腹水病人共 106 例，其中男 65 例，女 41 例，平均年龄（57.2±10.1）岁经腹水常规、生化、细胞学检查、腹腔镜检查或剖腹手术等方法确诊为恶性腹水 56 例：原发性肝癌 31 例，胃癌 6 例，结直肠癌 6 例，胆管癌 3 例，胰腺癌 3 例，卵巢癌 2 例，乳癌 1 例，恶性腹膜间皮瘤 1 例，非霍奇金淋巴瘤 1 例，原发灶来源不明的腹膜转移癌 2 例，其中经腹水行细胞学检查确诊 25 例，占 44.6%良性腹水 50 例：肝硬化腹水 34 例，结核性腹膜炎 6 例，慢性心力衰竭 4 例，胰腺炎2 例，细菌性腹膜炎 1 例，肾病综合征 1 例，慢性肾衰竭 1 例，系统性红斑狼疮 1 例两组病人在性别和年龄构成上差异均无显著性另选取 10 例健康体检者的静脉全血作为流式细胞仪检测 DNA 倍体时的二倍体对照。

1.2 主要实验试剂与仪器 CEA 酶联免疫反应试剂盒由瑞典 CanAg 公司提供；细胞DNA Prep 检测试剂盒由美国 BECKMAN COULTER 公司提供全自动酶标分析仪（伯乐 680 型，美国） ，流式细胞仪（EPICS XL MCL 型，J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询美国） ，低温高速离心机（Contifuge Stratos 型，德国） 1.3 标本制备 按腹膜腔常规穿刺方法进行腹腔穿刺，抽取腹水 100 mL 行 DNA倍体分析及 ELISA 法检测腹水 CEA 浓度；同时常规静脉穿刺取血 2 mL, 离心分离血清，ELISA 法检测血清 CEA 浓度 1.4 腹水 DNA 倍体分析 由我院中心实验室按试剂盒说明书对腹水脱落细胞进行 DNA 倍体分析，以正常人新鲜淋巴细胞的 DNA 荧光信号主峰值作为二倍体细胞 DNA 含量的参考值，以腹水中二倍体细胞 DNA 含量作为内标，由仪器自带程序对样品细胞的 DNA 指数、增殖指数、S 期细胞百分率等指标进行分析，并绘出直方图若直方图上出现与二倍体细胞G0/1 峰完全分离的荧光信号峰（DI≠1） ，即判断受检标本含有 DNA异倍体细胞，为阳性。

1.5 血清及腹水 CEA 浓度测定 按试剂盒说明书操作，将 25 μL 血清或腹水标本、标准液、控制液及 100 μL 抗体加入反应微孔中，室温下反应 1 h；用稀释的洗液反复冲洗 6 次，再加入 100 μL 染色剂，37 ℃孵化 30 min；然后加入 100 μL 反应终止液，在 15 min 内于 405 nm 波长处读出吸光度（A）值，以吸光度值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线根据血清或腹水样品的吸光度值可在标准曲线上查出其浓度，结果由全自动酶标分析仪自动产生按照试剂盒说明书，血清和腹水的 CEA 阳性界值为 5 μg/L若血清或腹水 CEA 阳性，J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询则计算腹水/血清 CEA 比值，以比值 1 为阳性 1.6 统计学处理 计量资料以±s 表示，组间比较采用 t 检验；计数资料以率或构成比表示，应用 χ2 检验 2 结 果 2.1 腹水细胞 DNA 倍体分析 本文 56 例恶性腹水病人中有 40 例（71.43%）检出异倍体，明显高于良性腹水病人异倍体检出率（16.00%） ，差异有显著性（χ2=32.75，P 0.01） 。

异倍体区别良性、恶性腹水的灵敏度为71.43%（40/56） ，特异度为 84.00%(42/50)见表 1 2.2 腹水/血清 CEA 比值检测 恶性腹水病人腹水/血清 CEA 比值阳性率为 51.79%（29/56） ，明显高于良性腹水病人的阳性率（2.00%） ，差异有显著性（χ2=32.27，P 0.01） 腹水/血清 CEA 比值区别良、恶性腹水的灵敏度为 51.8%（29/56） ，特异度为 98.0%(49/50)见表 1表 1 良、恶性腹水细胞 DNA 倍体分析与腹水/血清 CEA 比值检测结果的关系（略） 2.3 腹水细胞 DNA 倍体分析联合腹水/血清 CEA 比值检测 恶性腹水组 DNA 倍体分析与腹水/血清 CEA 比值同时阳性占30.36%(17/56),良性腹水组则为 0,DNA 倍体分析联合腹水/血清 CEA比值检测可使恶性腹水的诊断率由 DNA 倍体分析的 71.43%、腹水/血清 CEA 比值的 51.79%升高到 92.86%(52/56)DNA 倍体分析联合J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询腹水/血清 CEA 比值检测鉴别腹水良、恶性病变的灵敏度为92.86%(52/56)，特异度为 100%(50/50)。

3 讨 论 临床上引起腹水的常见病因有肝硬化、充血性心力衰竭、肾病、结核杆菌感染、胰腺炎、其他病原微生物感染、恶性肿瘤、结缔组织病等，其中由恶性肿瘤引起者称为恶性腹水，通常是恶性肿瘤腹腔内侵犯的第一个体征GARRISON 等[1]报道，52%的恶性肿瘤病人在原发癌诊断时已有明显腹水腹腔穿刺抽取腹水进行常规、生化、细胞学等方面的检查，可较准确地鉴别腹水的性质，尤其是腹水细胞病理学检查，阳性者有确诊意义，至今仍被作为“金标准” 但其阳性率仅有 50%左右，限制了其在临床上的应用[2]腹腔镜检查对于不明原因腹水的病因诊断有很高的准确性[3]，但也有在恶性腹水病人中导致肿瘤沿腹壁创孔播散的担忧[4]近年来随着对恶性腹水病因研究的不断进展，恶性腹水的治疗发生了令人鼓舞的变化，在经过选择的小规模人群的治疗试验已经取得了很大进展，但是这些方法大多存在一定的危险性，不适合作为各种腹水治疗的共同选择，这就迫切要求人们寻找一种有效的方法，来准确鉴别良性腹水和恶性腹水 CEA 是一种结构复杂的可溶性糖蛋白，具有二级以上结构胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏，出生后逐渐消失或仅存留微量当细胞癌变时，CEA 可重新合成，并表达于肿瘤细胞表面，也可分泌到血流中，具有促进转移的作用，可能与干扰原发灶内肿J精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询瘤细胞间连接有关。

血清 CEA 升高最常见于消化道肿瘤，但在乳癌、肺癌、胰腺癌、泌尿系肿瘤等多种肿瘤中也有表达，其在良、恶性腹水的鉴别诊断中有一定价值，但特异性不高[5]一些非肿瘤疾病如肝衰竭、大量吸烟者、慢性溃疡性结肠炎、Crohn 病等亦有血CEA 低水平升高，设想提高界值可望提高特异度，但灵敏度也会随之降。