裂解液配制方法.docx

裂解液配制方法The manuscript was revised on the evening of 20211、红细胞裂解液(去除红细胞)配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH (调节 pH 值用)配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml去离子水中；2. 调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml ；3. 在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年(六个月)；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF (苯甲基磺酰氟)L(100Rg/ml)Pepstatin (胃蛋白酶抑制剂)1 |jmol/L^g/ml)Leupeptin (亮抑制肽)mlAprotinin (抑蛋白酶肽)|jmol/L(1^g/ml)(注：PMSF贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml 溶于 LHEPES ；Leupeptin贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20C。

保存)3x^胞裂解液 (Tris-HCL)1 . 1M Tris溶液的配置取 Tris242.2g，加 ddH2O 至 1600ml，加热溶解2 . 1M Tris - HCL Ph=溶液的配置取1M Tris溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=(需浓盐酸约)，加ddH2O定容 至200ml，高压灭菌备用3. 0.5M EDTA溶液的配置称 EDTA - Na2 37.2g 先用 140ml ddH2O 溶解，加入 14ml NaOH (10M)使EDTA - Na2溶解，再用NaOH (10M)溶液调至Ph=,加 ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用4. 细胞裂解液的配制称 15gCTAB (Hexadecyltrimethylammonium bromide)(先用约 600ml ddH2O 加热溶解)放入烧杯中，加入75ml 1M Tris - HCL (Ph=), 58.5g NaCL (先用 少量ddH2O溶解)，30ml 0.5M EDTA，定容至1000ml，混合均匀备用4、组织裂解液配方：'7M Urea(60. 06)4.2042 g2M thiourea g 100mM DTT? g4% CHAPSg0.5mM EDTA? 0.00146 g40Mm Tris? g2%(v/v) NP-40ml1%（v/v） Triton X-100ml5mM PMSF用前加0.00871 g2% pharmalyte共10ml分装成400 m每管（可应用于30-80毫克组织裂解）蛋白质的定位与蛋白质裂解液的选择：全细胞：NP-40或RIPA细胞质（可溶）：Tris-HCl细胞质（细胞骨架）：Tris-Triton细胞膜：NP-40或RIPA细胞核：RIPA 线粒体：RIPA。