细胞生物学实验指导(植物版).doc

细胞生物学实验实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测［实验目的］通过本实验，使学牛巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和 荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实人 小的感性认识通过本实验操作，耍求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细 胞生物学研究打好基础［实验原理］应用显微镜的成像原理（详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章笫一节），同时借助 显微镜的镜台测微尺和冃镜测微尺，两尺配合使川，进行测量和运算，观察细胞形态，得出 细胞的大小该实验完成需吋6学时［实验材料、试剂和仪器］一、 仪器普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37C温 箱、镜台测微尺、目镜测微尺等二、 材料洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上 皮细胞等三、 试剂生理盐水，10pg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4C保存）一、 暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、 取一•张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水用银子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生 理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。

2、 将上述装片置于显微镜载物台上，在10X物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像3、 换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心 位置，得到最好的暗视野图像效果4、 观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照5、 换用高倍物镜观察吋，要换用为高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤二、 相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴牛理盐水川锻子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，进生.理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分2、 将装片置于载物台上，在明视野用聚焦螺旋聚焦样品，将观察到的夹竹桃花丝毛细 胞移到视野中央3、 换上10X相差物镜和相应的相差聚光器，完全打开聚光器的孔径光阑，装上绿色滤 光片，调节光源，使视野内亮度均匀4、 拨出目镜，插入中心望远镜，找到环状光阑的亮环和相板的黑环，调节聚光器，使 二者完全重合5、 拔出望远镜，插入目镜，镜检、拍照6、 换用高倍相差物镜观察时，耍换用与Z相匹配的聚光器环状光阑，重复以上调节步 骤三、 荧光显微镜观察人口腔上皮细胞1、 用灭菌的牙签刮取口腔上皮细胞，涂于洁净的载玻片上，滴上一滴罗丹明123染液, 于37C温箱温育30mino2、 盖上盖玻片，吸去多余的液体。

3、 将装片査于载物台上，10X物镜下找到样品焦面，关闭透射光，置于激发光为蓝光、 发射绿色荧光的滤片组合块下观察线粒体必要的话，可换用40X荧光物镜进一步观察、 拍照四、 测微尺的使用操作1、 卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上，再旋上目镜的 上透镜2、 将镜台测微尺冇刻度一 1侨朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央调 焦至看清镜台测微尺的刻度3、 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺（如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进 行调焦），使两尺左边的〃0〃点一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线（图Do4、 记录两条重合线间Fl镜测微尺和镜台测微尺的格数按下式计算口镜测微尺每格的 长度等于多少口山口镜测微尺每格的长度（卩ni）二镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数*103 4 50图1目镜测微尺的标定：目镜测微尺，F：镜台测微尺五、几种不同类型细胞形态的观察及大小测量1、 观察各种装片标本，注意不同类型细胞的形态及大小差异2、 用口镜测微尺和镜台测微尺测量细胞的长、矩径或半径的长度，每类被测物测3个 数据，最后取平均值［实验结果］将上述观察及测量结果记录于下表，并计算细胞的大小。

细胞名称形态特征长、短径或半径（微米）细胞而积（平方微米）［注意事项］1、 荧光镜下观察细胞时，由于荧光易淬灭，观察时要尽量快2、 荧光探针都有一定的毒性，因此操作时要注意防止污染皮肤和环境，如弄到手上或 桌子上，应及时冲洗［实验报告］1、 完成上述表格2、 思考：不同物镜放大倍数下，冃镜测微尺每格的单位是否相同？3、 思考：不同类型显微镜的适用范围有何不同？实验二细胞膜的渗透性观察［实验目的］通过本实验，学习、掌握观察、研究细胞膜物质通透性作用的实验方法与技能了解 细胞膜对物质通透性的一般规律了解溶血现彖及其发生机制［实验原理］细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障它是一种半透膜，可选择性控制 物质进出细胞各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以 按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一•侧扩散，这种现象就是渗 透渗透作川是细胞膜的主要功能之一将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞 内，可使细胞胀破，血红蛋口释放到介质中，山不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋 白溶液，这种现象称为溶血将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的 通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。

因此，发生溶血现象所 需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标C本实验选用红细胞作为细胞膜透性 的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化当红细胞置于不同等渗溶液 中时，由于对各种溶质的通透性不同，因此有的溶质分了可透入，有的溶质分了则不能透入, 能透入的溶质分子的速度也不同当溶质分子进入红细胞使细胞内溶质浓度增加时，导致水 的摄入当红细胞吸水膨胀到一定程度时，细胞膜破裂，血红素溢出即红细胞溶血由 于溶质透入速度不同，溶血时间也不同该实验完成需时3学时［实验材料、试剂和仪器］一、 仪器普通光学显微镜、手术刀、秒表、载玻片、盖玻片、吸管、小烧杯、试管等二、 材料鸡或鸭血细胞三、 试剂1.5%氯化钠，生理盐水，0.17 mol/L氯化钠，0.17 mol / L硝酸钠,0.12mol/L硫 酸钠,0.12mol / L 草酸钠,0.32 mol / L 葡萄糖,0.32 mol / L 甘油,0.32 mol / L 乙醇,0.32mol /L丙醇［实验步骤］一、红细胞渗透压的观测1、 取一小烧杯，加入新鲜鸡血，迅速以十倍生理盐水稀释，制成鸡血细胞悬浮液2、 取5支试管，编号后依次向各试管加入1.5%氯化钠5, 3, 2.16, 1, OmL,然后分 别向各试管加入蒸馆水，使每一试管总体积达到5mL,配成一浓度梯度的氯化钠溶液。

3、 向毎-•试管加入0.5mL鸡血细胞悬液，立即轻轻摇匀4、 稍停片刻后，观察溶血情况，并记录于表一二、红细胞对不同溶质的渗透性观察1、 取8支试管编号，依次向各试管加入等渗溶液0.17 mol/L氯化钠，0」7 mol / L 硝酸钠，0.12 mol/L硫酸钠，0.12mol/L草酸钠，0.32mol/L葡萄糖,0.32 mol / L甘汕, 0.32 mol / L 乙醇,0.32mol / L 丙醇各 5mL2、 向每一试管加入0.5mL鸡血细胞悬液，立即轻轻摇匀3、 观察溶血情况，并记录于表二［实验结果］将实验结果记录于表一、二，并加以分析试管编号实验项目123451.5%氯化钠（mL）532」610蒸帑水（mL）022.8445氯化钠浓度（％）1.50.90.650.30血细胞悬液（mL）0.50.50.50.50.5细胞形态及溶血情况结果分析表一红细胞渗透压的观测试管编号是否溶血溶血时间结果分析1、0」7 mol/L氯化钠2、0」7 mol/L硝酸钠3、0.12 mol/L 硫酸钠4、0.12mol/L 草酸钠5、0.32 mol / L 葡萄糖6、0.32 mol/L 甘油7、0.32 mol/L 乙醇8、0.32mol / L 丙醇表二红细胞对不同溶质的渗透性观察［注意事项］新鲜鸡血提取后要立即稀释，否则会凝固结块，影响后续实验操作。

［实验报告］芫成表一、表二并对实验结果加以分用「实验三活体染色及不同细胞结构的观察［实验目的］通过本实验，使学生掌握活体染色的基本原理和一般方法，并通过対绿豆根根尖细胞液 泡系和洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的活体染色观察、了解液泡系和线粒体的形态及其在细胞中 的分布观察胞间连丝及叶绿体的形态及其在细胞中的分布［实验原理］活体染色是利用某些无我或毒性较小的染色剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实 性，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以至引起细胞死亡的一种染色方法 其主要特征是染料的堆积，即染料的胶粒固左、堆积在细胞内某种特殊的构造里面这种堆 积主要是受染料分子的电荷影响因为碱性染料的胶粒表面带有阳离子，酸性染料的胶粒表 面带有阴离子，它们彼此之间会发牛电吸附作用（静电吸附）活体染色的另一•特征是专一 性例如中性红只染液泡系，密纳斯绿一B只染线粒体，而细胞质和细胞核在活体染色过程 中并不被染色只有当细胞死亡或开始死亡时，细胞质和细胞核才能被染成均匀一致的颜色该实验完成需时4学时［实验材料、试剂和仪器］一、 仪器普通光学显微镜（带汕浸物镜）、荧光显微镜、D1C显微镜、相差显微镜、昭视野显微 镜、双面刀片、滴管、载玻片、盖玻片等。

二、 试剂Ringer氏溶液、1/3000浓度的中性红溶液、1/5000浓度的詹纳斯绿一B溶液三、 实验材料黄豆（或绿豆）幼根根尖，洋葱鳞片叶表皮细胞，菠菜叶，胞间连丝永久装片［实验步骤］一、 液泡系的活体染色及观察1、 用双面刀片把初牛的黄豆（或绿豆）幼根根尖（约1—2cm长）小心切一纵断面薄 片，放在预先滴有一・滴1/3000浓度的中性红溶液的载玻片中央，染色15分钟2、 用滴管吸去染液，滴加一滴Ringer氏液，盖上盖玻片，镜检二、 线粒体的活体染色及观察1、 用银子撕下一小块洋葱鳞片叶表皮，放在预先滴有一滴1/5000浓度的詹纳斯绿一B 溶液的载玻片中央，染色30分钟2、 用滴管吸去染液，滴加一滴Ringei•氏液，盖上盖玻片，镜检三、 叶绿体的观察1、取一小块波菜叶，放在预先滴有一滴Ringer氏溶液的载玻片，川银子将渡菜叶 夹碎，盖上盖玻片，镜检四、 胞间连丝的观察取一片胞间连丝永久装片，置显微镜下认真观察 ［实验结果］1、 中性红溶液染色结果：可见生长点细胞内有很多人小不等的被染成玫瑰红色的圆形 液泡若观察已分化长人的细胞，可见到较人的液泡，数目较少，有时只有一个浅红色的中 央大液泡，其中有些深红色颗粒作布朗运动。

2、 詹纳斯绿一B溶液染色结果：可见线粒体被染成兰绿色，呈颗粒状或线条状，在细 胞核周围分布得特别多［实验报告］1、 绘图示黄豆（或绿豆）幼根根尖细胞液泡系2、 绘图示洋葱表皮线粒体3、 思考：用-•种活休染色剂处理细胞，为什么不能同时看到多种细胞器被染色实验四细胞组。