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transwell细胞迁移迁移实验（cell migration assay）实验材料（1）Transwell小室，孔径8 Um （Corning）,细胞培养板24孔板，培养板应当与购 买的Transwell小室相配套（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10%血清培养,PBS, 2.5?S （3）固定液： 4%多聚甲醛固定液或者甲醇（4）染色液：Giemsa染液或结晶紫染色（5）其他：小镣子，棉棒1材料准备：无血清DUEM,（遇胎牛血清）DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养 基（也可加到20%血清），无菌PBS,棉签，胰酶，，结晶紫染液（0.现（g/ml） PBS结晶 紫）2步骤和流程 2. 1制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12 — 24人进一步去除血清的影响但这一 步并不是必须的②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1一2遍），用含BSA的无血 清培养基重悬调整细胞密度至5X 105/mlo 2. 2接种细胞①取细胞悬液100 P 1加入Transwell小室细胞悬液加入膜中央，尽量保证液面水 平： ②24孔板下室一般加入600 U 1含2. 5?S的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。

③ 种板，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板④培养细胞： 常规培养12 — 48h （主要依癌细胞侵袭能力而定）24h较常见，时间点的选择除了要考 虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视2. 3染色计数①取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无菌的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟, 将小室适当风干②0.1席结晶紫染色20 min,或Giemsa染色（5-10min,室温0. 5h）,用棉签轻轻 擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍③400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数感谢您的阅读，祝您生活愉快 。