毕业论文肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的药效及机理研究.doc

摘要 I-II1前言 12实验材料 12. 1试剂 12. 2仪器 12. 3动物 23实验方法 23. 1豚鼠变应性接触性皮炎模型的建立 23. 2实验分组及给药 23. 3观察及检测指标 33. 4统计方法 34结果 44.1豚鼠皮肤变化 44. 2生化指标 54. 3组织病理学观察 55结论 66讨论 77参考文献 9综述 10致谢 19肤悦康熏洗液对变应性接触性皮炎的药效及机理研究摘要：目的本实验通过建立豚鼠变应性接触性皮炎模型，观察肤悦康熏 洗液对变应性接触性皮炎的治疗作用及探讨其作用机制方法本实验以2,4- 二硝基氯苯(DNCB)诱发建立豚鼠变应性接触性皮炎(ACD)模型，外用肤悦 康熏洗液及外用泼尼松作对照，观察分组给药后豚鼠背部皮肤红肿程度及组织病 理变化，同时用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测各组豚鼠血清中白介素-2 (IL-2)、白介素・6 (IL-6)及白介素JO (IL-10)表达水平结果 ACD模型 的豚鼠不同程度地出现皮肤红肿结痂，血清中IL-2及IL-10浓度下降，而IL-6 则上升，镜下观察未见正常对照组豚鼠皮肤有炎症细胞，DNCB激发后豚鼠皮肤 则见不同程度的表皮细胞变性，说明实验造模成功。

给药治疗后，与模型对照组 比较，各浓度的肤悦康熏洗液对豚鼠变应性接触性皮炎治疗效果有显著性的的差 界，主要表现在豚鼠皮肤的红肿程度减弱，不同程度地改善了表皮细胞炎性，上 调了模型动物血清中IL-2及IL-10水平，而抑制了上升的IL-6水平结论 肤 悦康熏洗液对变应性接触性皮炎有治疗作用，其作用机制可能与抑制IL・6及促 进IL-2> IL-10等细胞因子的释放有关关键词：肤悦康熏洗液；变应性接触性皮炎；药效研究；作用机理注：本论文题目来源于教师的中山市卫生局医学科研立项项目，项目编号为：2013J103Effects and mechanisms of Fuyuekang lotionOn guinea-pig allergic contact dermatitisAbstract： Objective To observe the Fuyuekang lotion effects and the mechanism of it on guinea-pig allergic contact dermatitis by establishing allergic contact dematits model. Methods The guinea-pig model of ACD induced by 2,4-dinithochor-benzere (DNCB) was established. Guinea-pig were randomly divided into 5 groups-blank group, DNCB model group, low-level and high doses of Fuyuekang lotion and prednisone group. Guinea-pig skin swelling and histopathologies were observed・ The serum level of interleakin-2, interleakin-6, interleakin-10 and expression of IL-2, IL-6, IL-10 were detected by the method of ELISA・ Results The ACD guinea-pigs had swelling symptoms in varying degrees・ The levels of IL・2 and IL-6 were declined, but the level of IL-10 was rose. Inflaminatory cells were not visibled under a microscope in the normal control group. The ACD guinea-pigs showed epidermal cell degeneration in different degrees・ The results showed the guinea-pig model of ACD were succeed・ After drug administration, there was difference of the effcets between DNCB model group, low-level and high doses of Fuyuekang lotion and prednisone group・ Fuyuekang lotion reduced the swelling degreeimproved the inflammatory cells and declined the level of IL-6 in the serum of the ACD guinea-pig, but rose the levels of IL-2 and IL-10・ Conclusion Fuyuekang lotion could relieve the inflammation of ACD. The mechanism of its action may be related with inhibiting the release of IL-2, IL-6 and 1L-10.Keywords： Fuyuekang lotion, allergic contact dermatitis, pharmacodynamics, mechanism1前言变应性接触性皮炎（ACD）是迟发型变态反应引起的炎症皮肤病，是T细 胞介导的针对皮肤接触致敏原的免疫反应，属于IV型超敏反应。

目前用于控制 急性变应性接触性皮炎炎症的药物主要使用抗组胺药物、糖皮质激素、保湿剂外 用以及控制反复感染等为主，以达到镇静、止痒和抗炎抗感染的作用但是以上 药物均有副作用，长期使用会降低皮肤的抵抗能力，而中药治疗变应性接触性皮 炎有着独特的优势，能通过多种途径，达到祛风利湿、清热润燥、抗过敏的功效, 注重整体平衡，副作用小，刺激性较小，从而在根木上治愈变应性接触性皮炎本文探讨的肤悦康熏洗液为中山市中医院制剂室配制，主要由苦参、芦荟、 荆芥、地肤子等中药煎煮而成本文初步探讨了肤悦康熏洗液对于变应性接触性 皮炎的治疗效果，为肤悦康熏洗液的临床应用提供依据，现将研究的实验结果报 告如下2实验材料2. 1试剂肤悦康熏洗剂（批号：20140924,由中山市中医院制剂室提供）醋酸泼尼松龙注射液（生产厂家：华中药业股份有限公司，生产批号： 20140510）TNF-a> IL・2、IL・6、IL・1（）、IL・18、TXB2、PGE2 ELISA 试剂盒（Cloud-Clone Corp.）2,4■二硝基氯苯（2,4-dinitroehloro-benzol, DNCB）（厂家：上海远慕生物 科技有限公司，实验时用丙酮配成5%和0.5%的DNCB丙酮溶液）丙酮和甲醛均为AR纯，蒸憎水由中山市中医院制剂室提供2. 2仪器Multiscan FC 型酶标仪（美国 Thermo）Wcllwash 洗板机（美国 Thermo）BX-50型显微镜（日本Olympus）T2000型电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）MDF-382E （N）超低温冰箱（日本三洋）2・3动物2.3.1实验动物普通级豚鼠，白色短毛，4〜5周龄，250〜300g,共60只，雌雄各半。

由 广东省实验动物中心提供，实验动物生产许可证：SCXK （粤）2013-0020o2. 3. 2饲养环境均饲养于广东省中山市中医院中药药理实验室环境温度18〜22°C,相对 湿度40〜60%,通风良好、环境安静，室内保持明10小吋、暗14小吋动物 购进后观察1周，实验分组时，每组动物体重差异不超过平均体重的20%o3实验方法3.1豚鼠变应性接触性皮炎模型的建立取豚鼠60只,参照文献I凹受试豚鼠于实验前一天腹部剃毛，而积3cmx3cm, 作为致敏区，实验当天以5%DNCB丙酮液50uL外涂剃毛区致敏，一天一次2 周后，除正常组外其余豚鼠在背部脊柱两侧剃毛，按需要设1块3cmX3cm并作 好标记作为激发区，以0.5%DNCB丙酮液100uL涂满激发区激发，正常组涂以 相同体积的丙酮g],每周1次，连续3次记录激发后背部皮肤变化最后一 次激发后48小时内如有红斑、鳞屑、水肿、抓痕等则表示造模成功3. 2实验分组及给药末次激发后24小时，将豚鼠分为①肤悦康洗剂高剂量组（2.4g牛药/ml）； ②肤悦康洗剂低剂量组（1.2g生药/ml）；③泼尼松龙注射液组（5ml:0.125g）； ④模型对照组；⑤正常对照组。

每组10〜13只每日上午和下午分别于激发区 外涂相应的药物1次，每次1分钟，直至药物吸收；模型对照组、正常对照组外 涂生理盐水，连续给药5天3. 3观察及检测指标3. 3. 1背部皮肤肿胀度分别观察治疗前（分组后给药前），治疗5天后停药1天的皮损评分情况评分标准：0■无可见红斑及水肿；1 ■勉强可见红斑及轻度水肿；2■粉红色红 斑及中度水肿；3■鲜红色红斑及重度水肿；4■菲常明显及带痂的红斑及强烈水肿根据评分结果计算疗效指数治疗前积分减治疗后的积分，再除以治疗前的 积分即为疗效指数3. 3. 2采血及组织病理观察治疗5天后停药1天，麻醉，腹主动脉取血6ml, 1500r*min-1离心20min, 取出血清置于微量离心管内，・80度冰箱保存备用采用双抗夹心法（ABC-ELISA 法）测定 TNF-a> IL・2、IL・6、IL・10、IL-18> TXB2、PGE2 表达水平剪下皮损皮肤，采用10%中性缓冲福尔马林固定液固定，编号备检在光镜 下观察炎症细胞浸润情况，主要指标为：真皮炎性细胞计数：取小块（15mmxl〜 2mm）皮损组织，于10%福尔马林液中固定，石蜡包埋切片，苏木精■伊红（HE） 染色，分别计数10个高倍视野（HPF）真皮炎性细胞数，取其平均值。

镜下评分：0■无改变或有少数散在炎症细胞；1 ■轻度改变，在儿个视野可见 到少数炎症细胞；2■中度改变，所有视野都可见到少或多的炎症细胞；3■重度改 变，几乎全部视野都有大量的炎症细胞；4■严重和强烈的改变，所有视野都可见 密集成团的、大量的炎症细胞3. 4统计方法采用SPSS 19.0 for Windows软件处理，计量资料用（！T±s ）表示，组间比 较采用单因素方差分析，方差齐性者采用Dunnet-t检验，方差不齐者进行 Dunnet-f检验病理改变计数资料采用Ridit分析4结果4. 1豚鼠皮肤变化2,4■二硝基氯苯（DNCB）诱发建立豚鼠变应性接触性皮炎模型之后，变应 性接触性皮炎模型的豚鼠均不同程度地出现皮肤红肿结痂皮炎豚鼠皮损见图 1在给药治疗之后，变应性接触性皮炎模型的豚鼠背部皮肤的红肿程度均不同 程度地减弱，说明肤悦康熏洗液能够减轻变应性接触性皮炎引起的皮肤红肿结痂 症状泼尼松组作为阳性对照组，其疗效指数高于模型对照组，且与正常对照组比 较有显著性差异与模型对照组比较，肤悦康熏洗液高、低剂量组的疗效指数较 之提高，且肤悦康熏洗液高、低剂量组与模型对照组对比有显著性差界，说明肤 悦康熏洗液对皮炎豚鼠皮损有修复和改善的治疗效果，既是对变应性接触性皮炎 有明显治疗的作用。

见表1表1肤悦康熏洗液。