基因重排引物设计.pdf
2页
内参：Globin-F：GATCTGTCCACTCCTGATGCTG Globin-R：ATCAAGCGTCCCATAGACTCAC GATCTGTCCACTCCTGATGCTGttatgggcaaccctaaggtgaaggctcatggcaagaaagtgctcggt gcctttagtgatggcctggctcacctggacaacctcaagggcacctttgccacactgagtgagctgcac tgtgacaagctgcacgtggatcctgagaacttcaggGTGAGTCTATGGGACGCTTGAT TCR 引物： （237bp）TVG: AGGGTTGTGTTGGAATCAGG TJX （J1/2） ：CCTGTGACAACAAGTGTTGT ccaattcctc ttttttctaa acattattac attattccag tttaatcatt 38292929 tcctgccttc cctctattac cttggaaatg ttgtattctt ccgatactta 38292979 CCTGTGACAACAAGTGTTGT tccactgcca aagagtttct tataataatt 38293029 ccacagtgat tcagtccata tcaaaaactc taattcagtt tccctgagtt 38293079 cttcaaattc tggtggtctg 反应体系（总体积 25μl） ：引物0.2μl DNA模板4μl Premix Taq 酶0.2μl 加去离子水至 25μl；反应条件：采用降落式 PCR 。
95℃预变性 3min，94℃30 s、60℃30 s、72℃40 s，连续 5个循环，退火温度每次降低 1℃直至55℃，94℃30 s、55℃30 s、72℃40 S，共30次循环， 72℃延伸 10 min成份体系终浓度25mM MgCl2 3.0ul 1.5 mMol/L 0.2 mMol/L 1×1.0 uMol/L 1.0 uMol/L 0.03 u/ul 3.0 ul Up to 50.0 ul 10mM dNTPs 1.0 ul 10×RNA PCR Buffer 5.0ul Sence Primer 0.5ul Anti S primer 0.5ul TaqE 0.5ul DNA H2O PCR反应反应条件Per-denature 94℃3min 94℃ 30sec 55℃ 30sec 72℃ 60sec 30 cycle 72℃ 5min 4℃Denature Anneal Elongation Cycle number Last elongation Store 。
