常用兽医实验室诊断方法.pdf

附录三常用兽医实验室诊断方法对于家畜的血液、尿液、粪便等，进行物理、化学检查，或借助于显微镜，以观察其有形物质及细胞， 经常能得到关于临床诊断所需要的重要材料或数据所以， 临床检验是一种重要的辅助检查手段临床兽医师除了必须了解常用临床检验的应用时机和解释检验结果的临床意义外，还要能够亲自操作在进行检验工作时，要有严肃认真的态度，反复实践，力求准确严格遵循操作规程和注意事项，以防止差错 并将检验结果应和系统的临床检查密切结合，才能得到正确的结论一、血液检验血液常用检验项目有：红细胞沉降速率（血沉）、血红蛋白含量及红细胞压积的测定，红细胞计数、白细胞计数及其分类计数等一）血液的采取与抗凝采血的部位和方法根据检验项目、所需血量和动物种类的不同，可分为毛细血管采血法、静脉采血法和心脏采血法毛细血管采血法】常用血液检验项目中除血沉测定和红细胞压积测定需较多量的血液外，其他各项测定用血量较少，均可在耳尖、耳缘及耳静脉处按毛细血管法采血采血前，先将局部剪毛，要尽量剪短，再用酒精棉球消毒，待酒精挥发、干燥后，用消毒的干燥针头迅速刺入消毒部位约 2～3mm 深，让血液自然流出如血液不易流出时，可在刺入部的上方稍加按压，但勿用力强挤，以免混入过多的组织液。

开始流出的第1 滴血，可用于制作血片；然后用干棉球擦去局部的剩余血液， 利用重新流出的第2 滴血液作红、 白细胞计数和血红蛋白测定；若利用第3 滴血液时，仍然要将第2 滴血液的剩余部分擦干，使局部皮肤干燥，否则以后流出的血液易分散，不能形成滴状， 不易吸取 对犬、 猫等小动物耳缘采血时，可在局部剪毛、 消毒后， 涂布一层凡士林，然后在局部刺入，流出的血液易成滴状，便于吸取利用毛细血管血液时，取血动作要迅速，可做多项测定，如果操作不熟练，动作缓慢往往引起血液凝固利用毛细血管血液作多项测定时，一般应先作红细胞计数测定，后作血红蛋白或白细胞数测定静脉采血法】马、牛、羊可由颈静脉采血（具体部位和方法，见注射法部分）猪可由前腔静脉采血（详见注射法部分）鸡可由翼下静脉采血，即用细针头刺入翼下静脉后，任血液自行流出并将其接入试管中犬、猫可利用小腿外侧跖背外侧静脉或前臂内侧皮下静脉局部剪毛消毒后，用止血带扎住采血部上端或由助手握住采血部位近心端，使静脉怒张，用消毒、干燥的注射器接上针头， 针头斜面向上，先以约 30 度角穿刺静脉前2～3mm 处的皮肤， 然后再穿刺静脉壁入静脉腔， 待见有血液流入注射筒内后，将针头顺势向静脉腔内推入少许，以防动物骚动时针头滑出静脉。

用右手食指将针头固定，左手慢慢抽血，抽血时不可过分用力，以免引起溶血待抽至所需血量后，先放松止血带，再用消毒棉球按住伤口，拔出针头除去注射器上的针头，将血液沿管壁缓缓注入清洁的试管内需抗凝血液时，试管内应加抗凝剂，并立即混匀，以免凝固心脏采血法】 多用于鸡及实验动物需多量血液时鸡可由胸腔入口处向心脏刺入，刺入心脏时，由于心腔压力较静脉高，血液可自然涌入注射器，兔及鸡等亦可在左侧胸部第1、2 肋间，摸到心搏动明显处，针头与胸壁呈垂直方向缓缓刺入，针头进入心腔内时，血液可自然进入注射器血清快速分离法】如需迅速分离血清（特别对牛） ，可将盛血管放入离心机内，以 2,500r/min的速度离心3min，使红细胞与血浆分离，然后放入37℃温箱内30min 促使血块加速凝固、收缩，可迅速分离到较多的血清血液抗凝法】供检血最好采取后随即进行检验若不能立即检验，为防止血液凝固，可加入抗凝剂，并应充分混合之常用的抗凝剂有：（1）草酸钠是最常用的抗凝剂，为白色粉末状，每 1.5 ～2.0mg 可抗凝 1.0ml 血液， 可用于血液常规检验但因其对红细胞大小有影响，故不能用作红细胞压积测定，如需测定红细胞压积时，可用双草酸盐抗凝剂或乙二胺四乙酸二钠。

2）双草酸盐抗凝剂：草酸钾0.8g ；草酸铵 1.2g ；蒸馏水加至100.0ml 溶解后，吸取0.5ml ，加于供采血用的试管或小瓶中，置干燥箱内（温度不能超过80℃），烘干备用（实际含双草酸盐 10mg ，可供 5ml 全血抗凝用）3）3.8 ％枸橼酸钠溶液主要用于血沉测定时的抗凝4）乙二胺四乙酸二钠（EDTA二钠）每10mg可使 5ml 全血抗凝；或配成10％溶液，每2 滴可使 5ml 全血抗凝怀疑传染病时，采血过程应防止到处流散，检后的残余血液及所用器皿亦应进行消毒处理二）红细胞沉降速率（血沉）测定血沉测定是在室温条件下观察抗凝血液内，红细胞于一定时间中的沉降速度测定血沉，常用方法有两种：1. 魏（ Westergren ）氏法【器械】（1）特制的血沉管为长30cm、内径 2.5mm的毛细玻管，管上有由0～200 的刻度，每一刻度间的距离为lmm，带刻度部分全长为20cm，其容积为1ml；并附有特制的血沉管架2）定时钟3）5ml 刻度试管（或5ml 注射器）试剂】 3.8 ％枸橼酸钠溶液方法】先用刻度试管装入3.8 ％枸橼酸钠溶液1.0ml ，再自静脉采血4.0ml （总容量至5.0ml处），充分混合后，将此枸橼酸钠血液吸入血沉管至“0”刻度处，擦去管外血液，在室温条件下，垂直放于血沉管架上并记录时间。

经 15、30、45、60min ，观察红细胞的沉降数值并记录之正常值）依本法所测得的健康家畜的血沉值，见表五：表五健康家畜血沉数值（魏氏法）家畜种类15min30min45min60min马40～60 70～90 90～120 110～1255 黄牛、奶牛、绵羊、山羊35 70 90 0.5～1.0 水牛35 70 90 110 2. “六五”型血沉管法（本法需血量较多，主要用于马的大群检疫）【器械】“六五”型血沉管，内径0.9cm ，全长 17～20cm，其容积约为l0ml的部分，刻有100个刻度方法】测定时，于血沉管中先加入抗凝剂（草酸钠0.015 ～ 0.02g ，或枸橼酸钠粉末0.04 ～0.05g ）；自颈静脉直接采血至刻度“0”处，立即充分混合；垂直放置，经15、30、45、60min各观察一次，，分别记录其红细胞沉降的数值正常值】各种健康家畜依本法测得的正常值，见表六-：表六健康家畜血沉正常值（“六五”型血沉管法）家畜种类15min 30min 45min 60min 马30～35 45～ 50 50～55 55～60 骡23 47 52 54 黄牛、奶牛、绵羊、山羊－－- 1.0 以内水牛10 30 - 65 【注意事项】（1）测定血沉时必须用新制备的抗凝血。

2）采血及盛血容器（包括血沉管），均需清洁、干燥3）采血过程宜迅速，血流应通畅4）血液与抗凝剂应充分混合，以防凝血；振荡时并应尽量防止产生气泡5）用魏氏法测定时，事先应检查血沉管架是否好用，以防漏血6）血沉管应垂直放立7）室温以20℃左右为宜临床意义】血沉加快：可见于各种类型的贫血及重度溶血性疾病，当马传染性贫血，梨形虫病时尤为明显；某些发热病、感染性疾病及广泛性炎症时，如结核、猪瘟、化脓性炎症等亦可见之；在风湿症时血沉也加快血沉减慢：常见于严重脱水（大出汗、多尿、剧烈腹泻）、马骡的某些腹痛、破伤风等时马的流行性脑脊髓炎时，血沉极为缓慢，是一个重要的特征三）血红蛋白含量测定红细胞遇酸溶解， 游离出血红蛋白， 并被酸化为褐色的酸性血红素；稀释后与标准色柱比色，即可求得血红蛋白的含量器械】国产的萨利氏血红蛋白计，通常以100ml 血液中含血红蛋白14.5g 定为 100％其测定管的两侧有刻度，从下往上，一侧为2～24 的刻度， 表示 l00ml 血液中含有血红蛋白的克数；另一侧有 20～160 的刻度，表示血液中血红蛋白的百分数但各种不同牌号的血红蛋白计颇不一致，有低至以13.8g 作为 100％者；也有以高达17.6g 作为 100％者，故如以其他牌号血红蛋白计进行测定时，应注明所用测定管之标准，或为求统一，均以“g％”表示为宜。

其血红蛋白吸管上常有容积为10 及 20mm3的两个刻度试剂】 0.1mol/L（或 1～2％）盐酸溶液方法】（1）于测定管内加入0.1mol/L （或 1％）盐酸溶液至百分数刻度的“20”处（约5～6 滴）2）用血红蛋白吸管吸取供检血液至20（或 10）mm3 处；用清洁脱脂棉或纱布拭净血红蛋白吸管尖端外壁附着的血液；迅速将血红蛋白吸管插入测定管底部的盐酸溶液中，缓缓压出血液，并以此盐酸溶液反复洗净管内所附着的血液3）以玻棒充分搅拌，使供检血与盐酸溶液充分混合，静置l0min 4）沿管壁向测定管内逐滴加入蒸馏水（或0.1mol/L盐酸溶液亦可），随加随以玻棒搅拌，并与两侧的标准色柱相比较，直至管内液体的颜色与标准色柱一致为止5）读取测定管内液体凹面的刻度数，即为l00ml 血液中所含血红蛋白的克数或百分数如检血用量为血红蛋白吸管的刻度“10”处时，应将读数2 倍之注意事项】（1）吸血量应准确，血红蛋白吸管中的血柱不应混有气泡2）供检血液及稀释用盐酸溶液均应沿测定管壁加入，勿使直接冲向管底而产生大量气泡3）搅拌要均匀，防止血液发生凝块4）稀释时蒸馏水应分次、逐滴加入，勿使液体颜色淡于标准色柱而无法比色。

5）混合完毕；应于l0min后， 30min 内进行比色因在室温下，lmin 后约有 75％的血红蛋白可与盐酸作用而呈褐色；5min 后有 88％，至 l0min 时， 95％的血红蛋白才能转化为褐色的酸性血红素6） 如测定管系由有机玻璃制成者，禁用有机溶剂 （如酒精） 洗涤；烘干时温度也不应高于60℃正常值】健康家畜血红蛋白含量值见表七：表七健康家畜血红蛋白含量值家畜种类血红蛋白值（ g/100ml）家畜种类血红蛋白值（ g/100ml）马、骡牛水牛11.0（9.0～13）10.0（9.0～11.0）8.3（8.0～9.0）羊猪鸡9.8（7.8～11.6）10.5（9.5～12）12.5（10.0～14.5）【临床意义】血红蛋白含量增多：见于各种原因引起的血液浓缩，如腹泻、呕吐、大出汗及某些中毒等血红蛋白含量降低：是各型贫血的特征，如马传染性贫血、牛血红蛋白尿病、梨形虫病及仔猪贫血等；亦可见于各种慢性消耗性疾病，如马鼻疽、牛结核、牛及羊的肝片形吸虫病、仔猪蛔虫病等如用“六五”型血沉管测血沉时，经放置2h 以上（最好经一昼夜）后，可读取由20～125的一侧刻度的血柱高的刻度数，而概略地表示出血红蛋白的百分单位数。

由于不甚精确， 只可供为参考为准确目的，应用血红蛋白计法测定之四）红细胞计数红细胞计数是将一定量供检血经一定倍数稀释后，计算其一定容积内的红细胞数，并换算为每立方毫米血液内的含量红细胞计数时血液的稀释方法有试管法和吸管法两种目前临床上因使用和洗涤方便，多采用试管法图 3. 血细胞计数板构造图 4. 计数室的刻划线区【器材】（1）血红蛋白吸管吸血用，与测定血红蛋白者通用2）血细胞计数板不仅用于红细胞计数，亦可作白细胞、血小板等计数用计数板种类甚多，目前一般常用者为牛鲍氏和改良牛鲍氏计数板为特制的厚玻片，上面刻划有计数室两个每个计数室分9 个大方格，大方格每边长度为lmm，每 1 大方格的面积为lmm2加盖片后的深度为1/10mm计数室四角的大方格，每格又等分为16 个中方格，用于白细胞计数中央大方格用双线划分为25 个中方格， 每个中方格又等分为16 个小方格， 共计 400 个小方格， 用于红细胞计数3）血盖片为血细胞计数板专用盖玻片，呈长方形，厚度为0.4mm 4）5ml 管（5）小试管（ 75mm ×l0mm）【稀释液】（1）0.9 ％氯化钠溶液2）台（ Dacie ）氏液： 3％枸橼酸钠液99ml；36％中性甲醛lml （3）复方氯化钠稀释液（海姆氏液）：氯化钠1.0g ；结晶硫酸钠5.0g ；氯化汞0.5g ；蒸馏水200.0ml ；石炭酸品红。