特定蛋白的免疫测定及临床意义.ppt

特定蛋白的免疫测定及临床意义卫生部临床检验中心 李金明特定蛋白的免疫测定方法n基本原理：免疫沉淀反应免疫透射比浊免疫散射比浊免疫沉淀反应的发展历史n1897年，Kraus发现细菌培养液与其相应抗血清混合后出 现肉眼可见的沉淀反应 n1902年Ascoli建立了环状沉淀试验n1905年Bechhold将抗体混溶在明胶中，然后再将相应特 异抗原加于其上，抗原抗体的特异结合可在明胶中出现沉 淀n1946年Oudin报道了试管单向免疫扩散试验 1965年 Mancini又提出了平板单向免疫扩散试验n Grabar和Williams在1953年报道了免疫电泳对流免 疫电泳、火箭免疫电泳和免疫固定电泳）n上述为经典免疫沉淀试验发展阶段，测定范围窄（10 ~ 100 μg/ml）、灵敏度低，繁琐费时，不能自动化免疫沉淀反应的发展历史n1959年，Schultze等报道了透射比浊法（ Transmission turbidimetry)n1967年，Ritchie等报道了散射比浊法 (nephelometry)n1977年，Sternberg等进一步发展建立了速率散射 比浊法(Rate nephelometry)。

n免疫比浊测定方法与免疫沉淀方法相比，灵敏度 高，重复性好，测定范围宽，已用于临床体液特 定蛋白含量的测定，现已有多种自动化检测仪器 应用于临床检验，尤其是免疫散射比浊测定免疫透射比浊n基本原理：一定波长光线通过抗原抗体反应混合 液时，被其中的免疫复合物（IC）反射或遮挡、 吸收而减弱在一定范围内，透射光被吸收的量 与免疫复合物的量呈正比，后者又与相应抗原和 抗体的量呈函数关系抗体量一定，即可从标准 曲线获知抗原的量n由于要求抗原抗体复合物的数量足够，并且颗粒 要足够大（35~100nm），本法的测定灵敏度和准 确度相对较低免疫散射比浊n基本原理：光线通过检测溶液时，被其中所含的 抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光 根据雷利散射公式，在一定条件下，透射光与微 粒浓度成正比，散射光与微粒浓度成反比n散射比浊可分为终点和速率散射比浊两种n光源荧光：高压汞灯发射，入射光波长（）355nm， 散射夹角（）为90℃激光：氦氖灯，=663nm，=15~35℃碘钨光：碘钨灯，=400~500nm，=70℃影响免疫比浊测定的主要因素n抗原、抗体比例与浊度 关系：抗原过量，出现 “带现象”，IC分子小， 且可发生再解离，浊度 下降，光散射减少。

抗 体过量，IC形成随抗原 量增加到抗原抗体最适 比例时达高峰抗体须 过量但又必须适量，抗 体浓度是测定关键影响免疫比浊测定的主要因素n抗体质量：特异性、效价、亲和力、R型抗体高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表位的空间构型 上非常适合，两者结合牢固，不容易解离反之 ，低亲和性抗体与抗原形成的复合物较易解离 R型抗体以家兔免疫血清为代表，具有较宽的抗原 抗体合适比例范围，只在抗原过量时，才易出现 溶性免疫复合物，大多数动物的免疫血均属此型 H型抗体以马免疫血清为代表，其抗原与抗体的 合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成 可溶性免疫复合物人和许多大动物的抗血清皆 属H型 影响免疫比浊测定的主要因素n反应溶液：pH6.5~8.5，适当浓度电解质（ 中和抗原抗体复合物表面电荷，促进凝聚 ）、离子强度（大，IC形成快）；一般常 用磷酸盐缓冲液n增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二醇（PEG ）、吐温-20等，以PEG6000最好，浓度一 般为3%~4%浓度过高可致非特异沉淀特定蛋白测定的质量控制n室内质量控制n室间质量评价特定蛋白测定的临床意义n血液中含有多种功能蛋白，如载体蛋白、免疫球 蛋白（抗体）、酶、凝血因子等，其含量变化通 常与多种疾病有密切关系。

nC反应蛋白 (CRP) 、免疫球蛋白及亚类、补体C3 和C4、抗链球溶血素O (ASO) 、类风湿因子 (RF) 、前白蛋白 (Prealbumin) 、白蛋白 (Albumin) 、微 白蛋白 (Microalbumin) β2微球蛋白 (β2Microglobulin) 、 α1抗胰蛋白酶 (α1AT) 、铜蓝 蛋白 (Caeruloplasmin) 、结合珠蛋白 (Haptoglobin) 、转铁蛋白 (Transferrin) 、载脂蛋白A （APO-A1 ） 、载脂蛋白B （APO-B）等 C反应蛋白 (CRP)n是一种由肝细胞合成的急性时相反应蛋白，是在炎症和组织坏死疾病的急性 期出现于病人血清中的一种糖蛋白，它能与肺炎双球菌的荚膜成分C-多糖蛋 白质起反应，故称为C-反应蛋白具有激活补体和促进粒细胞及巨噬细胞吞 噬作用n正常值为：800-8000μg/LnCRP是急性时相反应的一个极为灵敏的指标，血浆中CRP浓度在急性心肌梗 死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著地增高，可达正常 水平的2000倍结合临床病史，有助于随访病程n特别在炎症过程中，CRP可作为风湿病、系统性红斑狼疮、白血病等的随访 指标。

n细菌和病毒感染鉴别，细菌感染急性期一般均增高，病毒感染多数不变n国外有研究认为，CRP是引发心脏病的最强烈的危险因素，其危险程度是血 液中过量胆固醇的2倍CRP含量高的人患高血压的危险率比胆固醇高的人 大1倍如果炎症和过高的胆固醇同时出现的话，那么患心脏病和中风的危险 率比正常的人要高出9倍由此可见，CRP含量高和患心脏病呈正相关n此外，最近一项研究发现，血中高浓度的CRP是结肠癌发病的危险因素，并 认为CRP可能是结肠癌的一个早期标志物 免疫球蛋白及亚类n其浓度在不同年龄段有所差异，在某些疾病情况下，这些 指标的浓度将出现升高或降低，从而具有疾病诊断价值nIgG：正常情况下，脐血7.6～17g／L， 新生儿7.0～ 14.8g／L， 0.5～6月3～10.0g／L ，6月～2岁5～12g／L ，2～6岁5～13g／L， 6～12岁7～16.5g／L ，12～16岁 7～15.5g／L ，成人6～16g／Ln在慢性肝病，亚急性或慢性感染，结缔组织疾病，ＩｇＧ 骨髓瘤，无症状性单克隆ＩｇＧ病等，出现增高；在遗传 性或获得性抗体缺乏症，混合性免疫缺陷综合症，选择性 ＩｇＧ缺乏症，蛋白丢失性肠病，肾病综合症，强直性肌 营养不良，免疫抑制剂治疗等降低。

免疫球蛋白及亚类nIgA：正常情况下，脐血0～50mg／L，新生儿0～22mg ／L，0.5～6月3～820mg／L，7月～2岁140～1080mg／ L，2～6岁230～1900mg／L，6～12岁290～2700mg／L ，12～16岁810～2320mg／L，成人760～3900mg／Ln在慢性肝病，亚急性或慢性感染性疾病（如结核、真菌感 染等），自身免疫性疾病（如ＳＬＥ、类风湿性关节炎） ，囊性纤维化，家族性嗜中性粒细胞减少症，乳腺癌，Ｉ ｇＡ肾病，ＩｇＡ骨髓瘤等情况下增高；在遗传性或获得 性抗体缺乏症，免疫缺陷病，选择性ＩｇＡ缺乏症，无γ －球蛋白血症，蛋白丢失性肠病，烧伤等抗ＩｇＡ抗体 现象，免疫抑制剂治疗，妊娠后期等情况下降低 免疫球蛋白及亚类nIgM：正常情况下，脐血40～240mg／L，新生儿50～ 300mg／L，0.5～6月150～1090mg／L，6月～2岁430～ 2390mg／L，2～6岁500～1990mg／L，6～12岁500～ 2600mg／L，12～16岁450～2400mg／L，成人400～ 3450mg／Ln在胎儿宫内感染，新生儿ＴＯＲＣＨ症群，慢性或亚急性 感染，疟疾，传染性单核细胞增多症，支原体肺炎，肝病 ，结缔组织疾病，巨球蛋白血症，无症状性单克隆ＩｇＭ 病等情况下增高。

在遗传性或获得性抗体缺乏症，混合性 免疫缺陷综合症，选择性ＩｇＭ缺乏症，蛋白丢失性肠病 ，烧伤，抗Ｉｇ抗体综合症（混合性冷球蛋白血症），免 疫抑制剂治疗等情况下降低 IgG和IgA亚类 nIgG有四种不同的亚类，IgA有两种不同的亚类 每种亚类具有不同的功能，其含量过低或过高或 者缺陷会导致相应的免疫功能低下，造成相应的 疾病的发生 儿童常见的反复呼吸道感染、经常腹泻、发育迟 缓等症状以及经常发生的许多呼吸道疾病如中耳 炎、鼻窦炎、肺炎、气管炎、慢性阻塞性肺疾病 、支气管扩张以及哮喘等疾病，往往都与IgG或 IgA亚类缺陷有关补体C3和C4n正常情况下，C3(β1C-球蛋白) 800～1550mg／L， C4(β1E-球蛋白) 130～370mg／L，血液补体含量与活度 在许多病理情况下都会发生变化所以，临床上应动态观 察补体水平的变化n补体含量下降并不一定代表免疫功能障碍或免疫缺陷，因 为在缺血、凝固性坏死和中毒性坏死时，组织能释放较多 的蛋白分解酶，导致补体溶血活度和补体组分的下降 n血补体浓度升高：见于各种炎症性疾病及阻塞性黄疸，急 性心肌梗塞，溃疡性结肠炎，糖尿病，急性痛风，急性和 急性甲状腺炎，急性风湿热，皮肌炎，多发性肌炎，混合 性结缔组织病，结节性动脉周围炎等。

抗链球溶血素O (ASO)nA群溶血性链球菌的代谢产物刺激机体产生的抗体nASO升高见于A群溶血性链球菌感染及感染后免疫反应所致 的疾病，如：感染性心内膜炎、扁桃体炎、风湿热、链球 菌感染后急性肾小球肾炎ASO在溶血性链球菌感染后一 周开始升高，4～6周达高峰，并持续数月，故ASO增高提 示曾有溶血性链球菌感染，但不一定是近期感染链球菌 感染后ASO动态升高，结合CRP升高及血沉阳性，有利于风 湿热的诊断n高胆固醇血症、巨球蛋白血症、多发行骨髓瘤患者，ASO 也可升高类风湿因子 (RF)nRF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，RF可分为IgM 、IgG、IgA、IgE四型类风湿性关节炎（RA）患者的阳 性率为70％～80％，其中尤其以病变广泛、病情严重、 病程长、活动期及有关节外病变者的阳性率高、滴度高并 长久存在n除类风湿外，ＲＦ还见于正常人和其他疾病，例如正常人 ，尤其老年人，阳性率占５％－１０％；各种感染性疾病 如乙肝、结核病、亚急性细菌性心内膜炎和慢性支气管炎 等；结缔组织病如红斑狼疮、干燥综合征、皮肌炎、血管 炎、硬皮病、预防接种后以及某些恶性疾病在这些疾病 中，ＲＦ的阳性率可达１０％－７０％。

因此，在RA的 诊断上，一般认为RF只有参考价值而无特异性诊断价值 前白蛋白 (Prealbumin)n为肝内合成的糖蛋白，血中半寿期极短，故可作为营养不 良的诊断、检测及肝病的诊断作为早期肝功能操作指示 ，比ALT特异，比白蛋白敏感n正常参考值范围：成年男女为250-----400mg/L ；儿童 125-----200mg/LnPA是负性急性时相蛋白在炎症和恶病质（如恶性肿瘤等 ）中，CRP和酸性糖蛋白升高时，PA则可见迅速降低如 果前白蛋白继续保持低水平或进一步降低，提示预后不良 n 在肠道或肾脏的耗蛋白性病变时，血清PA浓度也会相随 降低n 何杰金氏及青春发育期少年，其血清PA 浓度升高较显著 白蛋白 (Albumin)n正常值：35-55g/Ln高：脱水和血液浓缩降低：白蛋白合成 障碍：营养不良、肝脏疾病、慢性消化道 疾病白蛋白消耗或丢失过多：消耗性疾 病、恶病质、肾病综合征、急性大出血、 严重烧伤、腹水形成等其他：妊娠晚期 、遗传性无白蛋白血症 β2微球蛋白(β2Microglobulin)nβ2－微球蛋白是体内有核细胞产生的一种 小分子球蛋白正常人血液中β2－微球蛋 白浓度很低。

n血液中升高：肾小球滤过功能下降炎症 或肿瘤n尿液中升高：肾小管受损时，对β2－微球 蛋白β2－微球蛋白的重吸收减少，尿液中 β2－微球蛋白排出增加，测定时升高α1抗胰蛋白酶 (α1AT)nα1-抗胰蛋白酶是一种特异性抑制丝氨酸蛋白水解酶的蛋 白酶抑制物血液中正常值：2~3g/Ln缺陷通常有遗传原因浓度低于正。