预习报告-实验13-缺氧动物模型复制及中枢神经系统功能抑制.docx

实验21 缺氧动物模型复制及中枢神经系统功能抑制和低温对缺氧的影响实验日期：9月25日 时间： 温度： 组员： 受试对象：小鼠 性别： 【实验目的】本实验学习复制乏氧性缺氧和血液性缺氧的动物模型方法，观察缺氧过程中呼吸的反应及血液色泽和全身一般情况的变化，并了解温度和中枢神经系统机能状态对缺氧耐受的影响以及对照实验和控制实验条件重要性实验原理】当供应组织的氧不足，或组织利用氧障碍时，机体的机能和代谢可发生异常变化，这种病理过程称为缺氧缺氧是多种疾病共有的病理过程许多原因都能使机体发生缺氧不同类型的缺氧，其机体的代偿适应性反应和症状表现有所不同根据缺氧的原因不同可将缺氧分为乏氧性缺氧、血液性缺氧、循环性缺氧和组织中毒性缺氧四种类型将动物放置于密闭的容器内，使其吸入气中的氧分压逐步降低以复制乏氧性缺氧模型乏氧性缺氧（又称低张性缺氧），主要表现为动脉血氧分压降低，氧含量减少，组织供氧不足正常毛细血管血液中氧离血红蛋白浓度约为26g /L乏氧性缺氧时，动、静脉血中的氧离血红蛋白浓度增高。

当毛细血管血液中氧离血红蛋白浓度达到或超过50g/L时，可使皮肤和粘膜呈青紫色（称为紫绀）抑制动物中枢神经系统功能和降低体温，降低其代谢率可增强机体的缺氧耐受性一氧化碳（CO）与血红蛋白的亲和力比氧与血红蛋白的亲和力高2l0倍．当吸入气中含有0.1%的CO时，血液中的血红蛋白可能有50%为碳氧血红蛋白（HbCO）HbCO不能与O2结合，同时还可抑制红细胞的糖酵解使2,3-二磷酸甘油酸（2,3-DPG）生成减少，氧离曲线左移，HbO2中的O2不易释放，从而加重组织缺氧当血液中的HbCO增至50％时，动物可迅速出现痉挛、呼吸困难、昏迷，甚至死亡此时，动物的动脉血含过多的HbCO，其皮肤、粘膜呈HbCO的樱桃红亚硝酸盐可使血红素中二价铁氧化成三价铁，形成高铁血红蛋白(HbFe3＋OH)，导致高铁血红蛋白血症高铁血红蛋白中的三价铁因与羟基结合牢固，失去结合氧的能力，或者血红蛋白分子中的四个二价铁中有部分氧化成三价铁，剩余的二价铁虽能结合氧，但不易解离，导致氧离曲线左移，使组织缺氧低浓度美兰为还原剂，可抑制氧化剂的中毒反应亚硝酸盐等氧化剂中毒时，如高铁血红蛋白含量超过血红蛋白总量的10%，就可出现缺氧表现，当血液中HbFe3＋OH达到15g/L，皮肤、粘膜可出现青紫颜色。

达到30%~50%，则发生严重缺氧 【受试对象】 小鼠【实验仪器】125、500ml广口瓶和测耗氧装置【实验药物】50g/L亚硝酸钠溶液，10g/L美兰溶液、2.5g/L氯丙嗪溶液(新鲜配制)、生理盐水，CO气体（甲酸加浓硫酸制取），钠石灰 一、中枢神经系统功能抑制和低温对动物耐受缺氧的影响【方法】 1．装置原理 量筒充以一定量的水，移液管用胶管与缺氧瓶塞上的一个管子相连并构成一密闭的空间(图6-21-1)小鼠在这密闭的缺氧瓶中，不断消耗氧气，产生的CO2 被钠石灰吸收，瓶内气压逐渐降低而产生负压，移液管内液面因瓶内负压而上升，而量筒内的液面却下降，量筒内液面下降的毫升数即为小鼠的耗氧量鼠死后从量筒上读出液面下降的毫升数，即为小鼠的总耗氧量(A) 2．取性别相同，体重相近的小鼠20只，并准确称取体重按随机分配的原则，将其中10只鼠作为实验组，另一只作为对照组实验组鼠按0.1ml/10g体重腹腔内注射2.5g/L氯丙嗪，安放在冰浴的沙布上10~15分钟，使呼吸频率降为70~80次/分；对照组鼠按0.1ml/10g体重腹腔注射生理盐水，放置室温10~15分钟 3．将2组鼠分别放入125ml的广口瓶内，按图6-21-1连接测耗氧装置。

【观察项目】 1．从密闭测耗氧装置开始计时至鼠死亡，记录小鼠存活时间，用测耗氧装置测定总耗氧量（A）根据总耗氧量Ａ（ml），存活时间T（min），鼠体量W（g）三项指标，求出总耗氧率R（ml/g/min）： R(ml/g/min)=A(ml)÷W(g)÷T(min) 2．列各项指标的原始数据表并进行统计处理，数据以`x±S表示，对实验组和对照组的T、R作t检验表1. 氯丙嗪、冰浴对小鼠缺氧耐受性的影响二、不同原因造成不同的缺氧类型【方法】 1．CO中毒1.1 CO 处理 取性别相同、体重相近的小鼠20只，随机分为CO组和对照组，每组10只小鼠观察小鼠活动情况及耳、尾、口唇的颜色将两组小鼠分别放入500mL广口瓶内，塞紧瓶塞用10ml注射器抽取CO气体10ml，注入刚密闭的广口瓶内，形成2%CO的空间环境用10ml注射器抽取空气10ml注入对照组刚密闭的广口瓶内1.2 实验观察 记录注入CO或空气至小鼠死亡的时间解剖小鼠尸体，记录肝、肺、血液颜色变化记录呼吸频率（注入CO前，注入后每5min计1次（次/10s），观察小鼠行为（挣扎、痉挛）及耳、尾、唇的颜色2. 亚硝酸钠中毒2.1 亚硝酸钠处理 取性别相同、体重相近的小鼠20只，随机分为亚硝酸钠组和亚硝酸钠加亚甲蓝组，每组10只小鼠。

观察皮肤黏膜色泽两组小鼠每只腹腔注射10mg(50g/L溶液，0.2ml）亚硝酸钠亚硝酸钠加亚甲蓝组小鼠在注射亚硝酸钠后每只小鼠立即腹腔注射2mg(10g/L溶液，0.2mL)亚甲蓝，亚硝酸钠组小鼠在注射亚硝酸钠后每只小鼠立即腹腔注射生理盐水0.2mL2.2 实验观察 记录两鼠表现、皮肤黏膜色泽变化及死亡时间解剖小鼠尸体，记录肝、肺、血液颜色变化记录呼吸频率（注入CO前，注入后每5min计1次（次/10s），观察小鼠行为（挣扎、痉挛）及耳、尾、唇的颜色3. 数据统计处理 小鼠存活时间及耗氧率以xs表示，并进行t检验小鼠存活率用百分率表示，用卡方检验分析表2. 乏氧、CO中毒、亚硝酸钠中毒小鼠的呼吸频率（次/10秒)表3. 亚硝酸盐中毒及美兰的治疗效果表4.不同原因缺氧小鼠皮肤及肝脏颜色的特征变化结果和讨论：合并全班数据，对存活时间和耗氧率进行统计分析讨论氯丙嗪+低温提高小鼠对缺氧耐受性的机理对呼吸变化做趋势图（不算均数，每组有单独曲线），分析不同原因缺氧机体呼吸变化特点和机制；统计分析亚硝酸盐中毒实验小鼠存活时间，解释机制分析不同原因缺氧特有皮肤和肝血颜色和机理明显异常的数据可以在加以讨论后不列入最后的统计，对可能造成误差的因素进行分析。