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    输血科标准操作规程    交叉配血试验标准操作规程1目的检测供血者与受血者之间的输血相容性，包括主侧配血与次侧配血，确保输血安全2职责血库工作人员负责执行3适用范围适用于盐水介质法、手工凝聚胺法和手工微柱凝胶法交叉配血全过程4操作规程4.1原理4.1.1盐水介质法IgM类抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法可以判断供、受者间血液的相容性4.1.2凝聚胺法凝聚胺交叉配血试验就是利用多聚季胺盐类—凝聚胺携带很多正电荷，中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能解散，以此来判断供、受者间血液的相容性4.1.3手工微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部4.2 试剂与器材4.2.1试剂凝聚胺配套试剂、生理盐水、微柱凝胶卡。

4.2.2 器材血清学离心机、卡式专用离心机、光学显微镜、塑料软试管、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、玻片、移液器、一次性移液枪头4.3 标本要求4.3.1.患者样本 EDTA抗凝全血或血清，全血量3～5ml，在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血、无凝块、无明显乳糜4.3.2.供者标本枸橼酸盐抗凝全血，全血量3～5ml，在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血、无凝块、无明显乳糜4.4 操作步骤4.4.1盐水介质法4.4.1.1取两支试管，1支标明“主侧”；另一支标明“次侧”4.4.1.2按标记“主侧”管加受血者血浆1滴和供血者2%红细胞悬液1滴；“次侧”管加供血者血浆1滴和受血者2%红细胞悬液1滴混匀，以1000转/ min 离心1分钟，轻轻侧动试管，观察结果冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应影响结果判断4.4.2凝聚胺法4.4.2.1取试管2支，标明主、次侧，主侧管加受血者血浆（血清）2滴，供血者3～5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴；次侧管加供血者血浆（血清）2滴，受血者3～5%红细胞悬液（洗涤或不洗涤均可）1滴4.4.2.2 每个试管分别加LIM液0.65ml，充分混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。

4.4.2.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力)离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体4.4.2.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做；4.4.2.5 最后加入Resuspending2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果4.4.2.6结果判定如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性凝集，配血结果相合；如果凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察4.4.3手工微柱凝胶法4.4.3.1按试验所需取相应张数（反应孔数）的凝胶卡，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和主次侧4.4.3.2主侧孔先加献血者0.8%-1%红细胞盐水悬液50ul，再加受血者血浆（或血清）25ul；次侧孔先加受血者0.8%-1%红细胞盐水悬液50ul，再加献血者血浆（或血清）25ul4.4.3.3加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入专用的孵育器37℃孵育15分钟4.4.3.4放入配套的专用离心机，按要求离心10分钟，观察结果4.4.3.5结果判读若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性。

若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验4.5检验结果可报告区间相合或不相合4.6 注意事项4.6.1盐水介质法结果阴性，将原标本接着做凝聚胺法或抗人球蛋白法配血4.6.2 凝聚胺法4.6.2.1离心后，倒掉上清液，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体4.6.2.2 按照加样顺序进行结果观察，确保每一个反应结果都能在60秒内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性4.6.2.3若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，须多加4～6滴Polybrene溶液以中和肝素4.6.2.4 在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集等因素，而导致假阳性的结果出现若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果4.6.3手工微柱凝胶法4.6.31 操作时，向反应腔内要先加红细胞，后加血清（血浆）4.6.3.2 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因4.6.3.3每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。

4.6.3.4红细胞悬液的浓度严格控制在0.8%-1%之间4.6.3.5试剂卡若长期放在4℃冰箱，每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡4.7参考文献4.7.1 凝聚胺试剂使用说明书4.7.2 叶应妩、王毓三、申子瑜.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司，2006：262-2654.7.3 汪德清、于洋.输血相容性检测实验室质量控制与管理.人民军医出版社，2011：218-219不规则抗体筛查标准操作规程1目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型（不规则抗体干扰反定型）以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据2 职责血库工作人员负责执行3 适用范围适用于盐水介质法、凝聚胺法、手工微柱凝胶法不规则抗体筛查4 操作规程4.1 原理4.1.1盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体4.1.2凝聚胺法利用多聚季胺盐类—凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集解散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能解散，以此来判断受血者血液中是否存在不规则抗体。

4.1.3微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部4.2 试剂与器材4.2.1 试剂 3系1%抗筛细胞（由3%抗筛细胞经专用稀释液稀释获得），抗人球蛋白凝胶微柱卡，生理盐水4.2.2器材卡式专用离心机、孵育器、记号笔、移液器、一次性移液枪头、试管架4.3 样本要求EDTA-K3或EDTA-K2抗凝静脉血≥3ml，在1760g条件下离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜4.4 操作步骤4.4.1盐水介质法4.4.1.1取4支洁净试管分别做好标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、自身对照4.4.1.2每支试管中分别加入患者血浆2滴，再加入相应3%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀4.4.1.3使用血清学专用离心机在1000g条件下离心15秒4.4.1.4结果判定：一系或多系红细胞发生凝集，自身对照不凝集的判断为阳性，提示存在IgM类不规则抗体。

4.4.2凝聚胺法4.4.2.1取3支洁净试管分别做好标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ4.4.2.2每支试管中分别加入患者血浆2滴，再加入相应3%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀4.4.2.3在每支试管中加入低离子液（LIM）0.65ml及凝聚胺（Polybrene）试剂2滴混匀，血清学专用离心机在1000g条件下，离心15秒4.4.2.4离心后弃上清，不要沥干，观察细胞扣，轻轻振摇，如果有凝集现象则加入重悬液2滴，拖拉辗转，1分钟内观察结果：3管中任意1管或多管出现凝集者为抗体筛选阳性，应进一步使用10系或16系谱细胞鉴定抗体的特异性，操作方法与筛查试验相同，同时应加自身对照3管均无凝集为阴性4.4.2手工微柱凝胶法4.4.2.1按试验所需取相应张数（反应孔数）的凝胶卡，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别4.4.2.2先将3系1%抗筛细胞各50ul分别加入相应的反应孔中，再将患者血清（或血浆）25ul依次加入相应反应孔内4.4.2.3加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入专用的孵育器37℃孵育15分钟4.4.2.4放入配套的专用离心机，按要求离心10分钟。

4.4.2.5目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入抗体鉴定试验4.4.2.6结果判读若对照管细胞沉淀在管底，检测管凝集块在胶上或胶中判读为阳性若对照管和检测管的细胞沉淀均在管底判读为阴性若对照管细胞在胶上或胶中说明试验失败，应重新试验4.5检验结果可报告区间阴性或阳性4.6 注意事项4.6.1 凝聚胺法离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1毫升液体；按照加样顺序进行结果观察，确保第一个反应结果都能在1分钟内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性；此法可能造成某些低效价或低反应活性的IgG类不规则抗体漏检4.6.2 标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验4.6.3 微柱凝胶法操作时，向反应腔内要先加红细胞，后加血清（血浆）或抗体4.6.4 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因4.6.5 每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温4.6.6 筛检细胞或谱细胞悬液的浓度严格控制在0.8%-1%之间4.6.7 试剂卡若长期放在4℃冰箱，每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。

4.7 参考文献4.7.1 叶应妩、王毓三、申子瑜.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司，2006：2654.7.2 汪德清、于洋.输血相容性检测实验室质量控制与管理.人民军医出版社，2011：214～217ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程1目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清（或血浆）中抗A、抗B 抗体，确定受检者ABO及RhD血型2职责血库工作人员负责执行3适用范围适用于手工ABO血型及RhD血型鉴定试验4.操作规程4.1原理4.1.1手工试管法、玻片法或纸板法根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型所谓正定型，是指用标准抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B抗原；所谓反定型，是指用标准A型细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗A和（或）抗B综合正反定型结果确定受检标本ABO血型利用标准IgM。