自噬是一种非常保守的过程.docx

自噬是一种非常保守的过程，自噬过程中通过溶酶体降低细胞质成分包括大分子（如蛋白质， 糖原，脂质和核酸）和细胞器（如线粒体，过氧化物酶体，内质网）的表达［1］自噬途径 在使真核生物适应营养缺乏和其他形式的环境压力中起重要作用;在这些环境中，它产生高 分子合成，能源生产，细胞存活所需的构建块作为消除错误折叠或展开的蛋白质和细胞器 受损的细胞“处理”机制，自噬途径也保持完整的细胞器和蛋白质的质量控制自噬的营养 循环和细胞器/蛋白质的质量控制功能，可能有助于其在生理上的许多作用和防止疾病［2,3］ 事实上，自噬基因对后生动物在饥饿中的生存以及蛋白质，碳水化合物和脂质代谢;寿命延 长;和防止癌症，神经变性疾病，感染和其他疾病中有十分重要的作用自噬的另一个关键的功能是其在分化和发育中的作用［4-7］从进化角度来看，自噬可能是防 止单细胞生物饥饿和避免其他形式的环境压力（例如拥挤和极端温度）的一种机制然而， 降解细胞器的刺激可能导致其他进化优势，包括经历分化和发育的能力分化和发育都需要 细胞发生重大形态变化，因此，需要对过时的细胞成分进行降解和回收的机制因此，它可 能不是某些分化和发育事件的巧合，特别是较低的真核生物，这些分化和发育是受自噬诱导 环境应激触发或影响的;自噬可以机械地参与这些过程。

为了支持这一概念，自噬基因在饥 饿诱导分化和发育过程中，包括产抱酵母，持久发展的线虫，子实体形成粘菌，并在原生动 物寄生虫的发育转换中都必不可少［4-7］1. Mizushima N. Autophagy in protein and organelle turnover. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 2011;76:397-402. doi: 10.1101/sqb.2011.76.011023.2. Levine B, Kroemer G. Autophagy in the pathogenesis of disease. Cell. 2008;132:27-42. doi: 10.1016/j.cell.2007.12.018.3. Mizushima N, Levine B, Cuervo AM, Klionsky DJ. Autophagy fights disease through cellular self-digestion.Nature. 2008;451:1069-75. doi: 10.1038/nature06639.4. Levine B, Klionsky DJ. Development by self-digestion: molecular mechanisms and biological functions of autophagy. Dev Cell. 2004;6:463-77. doi:10.1016/S1534-5807（04）00099-1.5. Cecconi F, Levine B. The role of autophagy in mammalian development: cell makeover rather than cell death.Dev Cell. 2008;15:344-57. doi:10.1016/j.devcel.2008.08.012.6. Mizushima N, Komatsu M. Autophagy: renovation of cells and tissues. Cell. 2011;147:728-41. doi: 10.1016/j.cell.2011.10.026.7. Mizushima N, Levine B. Autophagy in mammalian development and differentiation. Nat Cell Biol.2010;12:823-30. doi: 10.1038/ncb0910-823.Western印迹是一个已经在实践中为超过三十年开始作为在复杂样品中检测的蛋白质靶的装 置的技术。

虽然已经有显著的进步在两个成像和试剂的技术，以提高灵敏度，检测的动态范 围，以及复用目标的检测的适用性，基本技术已经基本上保持不变在过去，Western印迹 被用于简单地检测特定目标蛋白质在复杂的混合物中所得到的数据一般是通过一第二，独立的方法确定，如蛋白质印迹Western印迹被Towbin 等人提出［2］在1979年，并已成为在研究实验室在全球范围使用的免疫和特异性蛋白定 量在复杂的细胞匀浆的常用技术在过去的三十年中，灵敏度，鲁棒性，以及相应的指示器 系统的灵活性已显著升高［3,4］此外，检测介质和试剂的持续发展提供了科学界与超灵敏成 像系统提供的检测使得能够从低和高表达来自同一印迹蛋白的信号精确和准确的定量的宽 动态范围虽然实验室已迅速购买最新的检测技术和试剂用于免疫印迹，相关技术用于产生 光密度数据还没有发展导致公布的数据，很难或不可能解释或再现［5-7］20世纪80年代，Mosmann发明了 3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物(MTT)法［3］目前MTT法已成为测定细胞存活力和增殖的黄金标准活细胞中线粒体中 的脱氢酶或其他细胞器例如内质网中的还原物质可以将外源性的MTT还原为不溶于水的蓝 紫色结晶甲臢(Zd)，以此来测定细胞的存活率［4 , 5］。

该测定的敏感性增加和它作为 小型化的高通量测定法的潜能使其在细胞计数技术上得到了突破，细胞计数技术在3 H-胸 苷掺入法的基础上通过更换放射性同位素实现最初，该方法不涉及洗涤步骤，但需要甲臜 晶体在酸-异丙醇中增溶，这是一个相当耗时的过程［3］然而经过若干修改后，包括加入 DMF以溶解水性介质中的甲臢［6］,或者温和抽吸去除过量的染料并在甲臢在DMSO中增溶 后用PBS冲洗［7］这样可以降低该测定法的难度和提高灵敏度几个四唑鎓系测定法如XTT ［8］，MTS ［9］和WST ［10］测定法，其中产生的水溶性甲臢产物，省去了洗涤和溶剂增溶步骤， 已经开发出来，但还没有取代行之有效的MTT测定3. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983;65:55-63. doi: 10.1016/0022-1759(83)90303-4.4. Lu L, Zhang L, Wai MSM, Yew DTW, Xu J. Exocytosis of MTT formazan could exacerbate cell injury.Toxicol in Vitro. 2012;26:636-44. doi: 10.1016/j.tiv.2012.02.006.5. Stockert JC, Blazquez-Casto A, Canete M, Horobin RW, Villanueva A. MTT assay for cell viability: intracellular localisation of the formazan product is in lipid droplets. Acta Histochem. 2012;114:785-96. doi: 10.1016/j.acthis.2012.01.006.6. Hansen MB, Nielsen SE, Berg K. Re-examination and further development of a precise and rapid dye method for measuring cell growth/cell kill. J Immunol Methods. 1989;119(2):203-10. doi: 10.1016/0022-1759(89)90397-9.7. Van Rensburg CEJ, Anderson R, Joone G, Myer MS, O'Sullivan JF. Novel tetramethylpiperidine-substituted phenazines are potent inhibitors of P-glycoprotein activity in a multi drug resistant cancer cell line. Anti-Cancer Drug. 1997;8:708-13. doi: 10.1097/00001813-199708000-00010.8. Scudiero DA, Shoemaker RH, Paull KD, Monks A, Tierney S, Nofziger TH, et al. Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lines.CancerRes. 1988;8(48):4827-33.溴脱氧尿苷(5-溴-2'-脱氧尿苷，BrdU)是低毒性的卤化核苷酸，通常用于监视DNA 的复制，以此检测细胞的增殖情况。

它可以用于体外和体内的研究，其中包括检测骨髓间质 干细胞的增殖情况的宝贵工具我们的意见强烈建议在更多的BrdU谨慎使用干细胞的研究 我们亦建议尿嘧啶及其相关物质也打开了新的机遇分化治疗肿瘤尽管BrdU被广泛用于胶质瘤增殖[10]的评估，它的毒性副作用也是已知的早在20世纪 60年代，在白细胞培养物中就证明BrdU会引起染色体收缩（非常密集的染色质位点，类似 于着丝粒区）[11,12]目前，BrdU在肿瘤学中作为无线电增敏剂，因此导致在施加电离辐 射后产生抗增殖的DNA交联现象[13]据报道，BrdU既不影响癌细胞的生长，也不会影响 它们的生存能力[14,15]BrdU作为遗传毒性剂是已知的，但它仍然是广泛用于神经生物学 研究，是由其明显的低毒性决定的[16]10. Hoshino T, Nagashima T, Cho KG, Davis RL, Donegan J, Slusarz M, Wilson CB. Variability in the proliferative potential of human gliomas. J.Neuro-Oncol. 1989;7:137-143. [PubMed]11. Palmer CG. 5-bromodeoxyuridine-induced constrictions in human chromosomes. Can. J. Genet. Cytol.1970;12:816-830. [PubMed]12. Kaback MM, Saksela E, Mellman WJ. The effect of 5-bromodeoxyuridine on human chromosomes. Exp. Cell Res. 1964;34:182-186. [PubMed]13. Berry SE, Kinsella TJ. Targeting DNA mismatch repair for radiosensitization. Semin. Radiat. Oncol.2001;11:300-315. [PubMed]14. Masterson JC, O'Dea S. 5-Bromo-2-deoxyuridine act。