胰蛋白酶的分离纯化.pptx

胰蛋白酶的分离纯化,主要内容,胰蛋白酶的结构、理化性质 胰蛋白酶功效 分离纯化路线,胰蛋白酶结构及理化性质,胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，纯化获得的结晶，再制成的冻干制剂易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂在pH1.8时，短时间煮沸几乎不失活；在碱溶液中加热则变性沉淀，Ca2+有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1 牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成，含6对二硫键，其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明在肠激酶活自身催化下，酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解，释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽，生成有活性的胰蛋白酶牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个，分子量23800 猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸残基排列顺序中，只有41个氨基酸残基不同，但分子构型有很大区别沉降系数S20W为2.77S pI=10.8，热稳定性较牛胰蛋白酶稳定，Ca2+对酶的保护作用不及牛羊的明显，无螯合Ca2+的中心部位有6对二硫键，断裂1~2个键，均不至于破坏酶分子的完整结构而保护了酶的活性酶的活力分别相当于牛的72%及羊的61% 羊胰蛋白酶与牛、猪的相似，但其活力略高于牛和猪的。

胰蛋白酶的功效,为蛋白质水解酶，能选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，能消化溶解变性蛋质，对未变性的蛋白质无作用，因此，能使脓、痰液、血凝块等分解、变稀，易于引流排除，加速创面净化，促进肉芽组织新生，此外还有抗炎症作用 临床上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、瘘管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等喷雾吸入，用于呼吸道疾病也可用于治疗毒蛇咬伤还常用于动物细胞培养前对组织的处理胰蛋白酶分离纯化路线,胰蛋白酶粗提液的获取,,1.将胰脏绞碎成胰浆，在5~10℃存放24h以上，使胰酶自身活化 2.3500r/min 下离心20min，取上清液用二层纱布过滤，然后根据等电点沉淀的原理用稀硫酸将提取液的pH值调至酸性（pH3.0左右），使大量的酸性蛋白沉淀出来 3.采用透析袋透析，然后用硫酸铵盐析法将胰蛋白酶从粗提液中沉淀出来，使其得到浓缩，并除去部分杂质（透析袋透析原理：由于膜两侧的溶质浓度不同，在浓度差的作用下，高分子溶液中的小分子溶质透向透析液一侧，同时透析液中的缓冲液渗入蛋白溶液一侧，经过透析液反复换液后，即可达到脱盐和置换缓冲液的目的胰蛋白酶分离纯化路线,胰蛋白酶纯化,,采用离子交换层析 原理：蛋白质在其等电点以下时带正电荷，可以被阳离子交换树脂所吸附；而蛋白质在等电点以上，带负电荷，可以被阴离子交换树脂所吸附。

因为胰蛋白酶等电点为10.1且在酸性条件下稳定，所以功能基团考虑使用阳离子 此外，遵循大分子物质分离一般采用弱性，因此使用弱酸性阳离子，骨架材料选择凝胶，因为其孔度大，亲水性好 离子交换剂的离子形式考虑用盐型恒流泵,部分收集器,,离子交换柱,,,离子交换流程简图,离子交换层析法纯化胰蛋白酶,胰蛋白酶分离纯化路线,胰蛋白酶分离纯化路线,工艺流程：粗提液的获取,胰蛋白酶分离纯化路线,工艺流程：纯化,。