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细胞活性台盼蓝染色具体步骤及方法.docx

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细胞活性台盼蓝染色具体步骤及方法一、实验原理各种细胞操作，包括传代、冻存和原代组织的分离，均能导致细胞死亡为了确定群体细胞中的存活细胞数，可采用台盼蓝染料排斥实验（Phillips 1973）正常的健康细胞能排斥染料，旦细胞膜完整性丧失后台盼蓝可弥散入细胞内染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活力的方法，无法区别10%~20%的活力差异除此之外，排斥染料的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖二、实验方法1）胰蛋白酶处理细胞（见上文“胰蛋白酶处理分离细胞”），无菌状态下取0.5 ml细胞用PBS稀释至每毫升2X105~4X1052）向另一管中无菌加人0.5 ml上述细胞稀释液，并加人0.5 ml 台盼蓝溶液（0.4%）3）细胞在染料中停留时间为不短于3分钟、不超过10分钟，用毛细吸管取含染料的细胞悬液，靠毛吸作用使其进入计数器内4）至少计数总数500个细胞，蓝色细胞单独计数记录不排斥染料的蓝色细胞的出现频度5）根据不排斥染料的细胞数计数细胞的活力百分比例如：单层细胞胰蛋白酶处理后重悬于5 ml培养液中，取0.5 ml细胞与4.5 ml PBS混匀，吸取0.5 ml悬浮于PBS中的细胞加于另一小管中，再加人0.5 ml台盼蓝溶液混匀。

上述悬液加于计数器上，共计数540个细胞，62个细胞不排斥染料呈蓝色，活性百分比为88.5%。

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