
细胞活性台盼蓝染色具体步骤及方法.docx
2页细胞活性台盼蓝染色具体步骤及方法一、实验原理各种细胞操作,包括传代、冻存和原代组织的分离,均能导致细胞 死亡为了确定群体细胞中的存活细胞数,可采用台盼蓝染料排斥实 验(Phillips 1973)正常的健康细胞能排斥染料,旦细胞膜完整性丧 失后台盼蓝可弥散入细胞内染料排斥实验是一种粗糙的估计细胞活 力的方法,无法区别10%~20%的活力差异除此之外,排斥染料 的细胞有可能不贴壁或不能较长时问生存或繁殖二、实验方法1) 胰蛋白酶处理细胞(见上文“胰蛋白酶处理分离细胞”),无菌 状态下取0.5 ml细胞用PBS稀释至每毫升2X105~4X1052) 向另一管中无菌加人0.5 ml上述细胞稀释液,并加人0.5 ml 台盼蓝溶液(0.4%)3)细胞在染料中停留时间为不短于3分钟、不超过10分钟,用 毛细吸管取含染料的细胞悬液,靠毛吸作用使其进入计数器内4)至少计数总数500个细胞,蓝色细胞单独计数记录不排斥染料的蓝色细胞的出现频度5)根据不排斥染料的细胞数计数细胞的活力百分比例如:单层细胞胰蛋白酶处理后重悬于5 ml培养液中,取0.5 ml细胞与4.5 ml PBS混匀,吸取0.5 ml悬浮于PBS中的细胞 加于另一小管中,再加人0.5 ml台盼蓝溶液混匀。
上述悬液加于计 数器上,共计数540个细胞,62个细胞不排斥染料呈蓝色,活性百 分比为88.5%。
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