花椒抗宫颈癌Cask i细胞作用及其机制的初步研究.doc

花椒抗宫颈癌Cask i细胞作用及其机制的初步研究作者：袁太宁，肖长义，汪鑒植【摘要】 冃的研究花椒挥发油抗宫颈癌Caski细胞作用及其可能的机制方法花椒挥发油按不同时间(24, 4& 72 h)及不同浓 度(0. 5~8mg/nil)分别处理Caski细胞，MTS法分析细胞的增殖速度, 用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期结果4 mg/ml花椒挥发汕处 理Caski细胞72h可显著地抑制Caski细胞增殖，1 mg/ml花椒挥发 油处理Caski细胞72 h ［1卩可导致亚凋亡峰的出现，且G0/G1期细胞增 多，S期和G2/M期细胞减少结论花椒挥发油可抑制Caski细胞增 殖并诱导细胞凋亡关键词】花椒Caski细胞细胞凋亡花椒不仅是深受民众喜爱的重要食用性香料，还是常用的中 药材，其资源在我国分布很广，具有很高的安全性花椒挥发油是花 椒主要成分之一，其含量为1%〜6%(产地不同含量也不同)油中主要 成分为棕稠酸、棕櫚油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等国内 外研究报道花椒对镇痛、镇静、抗炎、杀菌、抗病毒、抗真菌、抗氧 化等均具有较强的药理学活性［1〜4］随着对花椒提纯和药理作用的 深入研究,发现花椒还具有抗肿瘤作用,但0前对花椒抗肿瘤的研究还 不够深入，其体内外的抗肿瘤机制仍不明了。

为了认识花椒抗癌作用 的机制和特点，我们选用宫颈癌Caski细胞为研究对象，观察了花椒 对该细胞的抑制作用，以期探讨花椒抗肿瘤作用及其可能的机制1材料与仪器花椒，采于湖北省宜都县，经汗•鑒植博士鉴定为Zanthoxylum bungeanumo Caski细胞由三峡大学分子生物学研究所提供；MTS细胞 增殖分析试剂由Promega公司提供；其他化学试剂来自Sigma公司和 华美公司；EPL CSXL流式细胞分析仪为Beeman Coulter公司产品； 全波长酶标仪为为Thermo公司产品；R206D旋转蒸发器为上海申生科 技有限公司产品；超声破碎仪为北京君合华科技发展有限公司产品2方法2.1花椒挥发油制备使用旋转蒸发器提取花椒挥发油并过滤 除菌，称取适量挥发油加入5%Tween-80水溶液中，超声破碎仪处理 lOmin,用RMPI 1640无血清培养基倍比稀释成8, 4, 2, 1, 0. 5 mg/ml 的浓度2. 2 Caski细胞培养Caski细胞接种于含10%小牛血清的RMPI1640培养液，青霉素100 Ug/inl,链霉素100 u g/ml o置于37°C, 5%C02培养箱中常规培养。

2. 3细胞增殖分析将对数生长期的Caski细胞以4X 107/L； 细胞数接种于圆底96孔培养板，每扎50 u lo 37°C培养24h后，向孔 内直接加入含不同浓度花椒挥发油的RPMT 1640培养基50 ul在加 入药物后选定的吋间点(24, 48, 72 h),向每孔中加入20 u 1 MTS试 剂,37°C继续保温2 h显色，于490 nm波长下读取0D值细胞生存率(%)二0D药物/0D对照X100%；细胞生长抑制率(%) =(100-细胞生存率)X 100%2.4流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期取1X106对照细 胞或经花椒挥发油处理的细胞,用冰冷PBS洗涤1次后，再悬浮于500 U 1 低渗 DNA 染色液中(1 g/L Sodium Citrate, 0. l%TritonX 100, 100 mg/L RNase, 50 mg/L Propidium Iodode), 4°C保温 30min 后，经流式 细胞仪分析凋亡细胞及细胞周期时相分布，计算细胞增殖指数(PT)PI (%) = (S+G2/M) /(G1+S+G2/M) X100%2.5统计学处理 数据用±s表示，采用组间t检验进行统计分析。

3结果3. 1花椒挥发油抑制Caski细胞的增殖花椒挥发油对Caski 细胞增殖呈明显抑制作用，且这种抑制随药物浓度加大和药物作用时 间延长而增加（见图1）花椒挥发油浓度为4mg/nil吋，24 h抑制率 为20%, 48 h抑制率为46%, 72 h抑制率为78% 3. 2花椒挥发油诱导Caski细胞的程序性凋亡因发生凋亡的细胞核内，部分DNA发生 片段化降解而丢失，经Propidium Iodode染色后，这部分细胞核将出 现在G1峰之前，即亚凋亡峰的位置1 mg/ml花椒挥发油处理Caski 细胞72 h即可导致亚凋亡峰的出现所以花椒挥发油可诱导Caski 细胞的程序性凋亡3. 3花椒挥发油抑制Caski细胞周期的正常转换1 mg/ml花 椒挥发油作用72 h后G0/G1期细胞增多，S期和G2/M期细胞减少， 作用具有明显的剂量依赖性（见图2）,显示花椒挥发汕可有效抑制细 胞周期的正常转换，使细胞在G1期堆积，细胞阻滞于G2 /M期，从而 阻止细胞的有丝分裂，使细胞增殖受到抑制图1花椒对宫颈癌Cask!细胞生长的影响（略）图2花椒作用72h对宫颈癌Caski细胞周期的影响（略）4讨论前人研究表明传统中药可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤 细胞凋亡、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤血管生成、逆转肿瘤细胞多 药耐药和增强机体免疫力等多种机制发挥抗肿瘤作用[5〜8]。

本研究 分析了花椒挥发油对宫颈癌Caski细胞的影响，我们发现，花椒挥发 油可有效抑制Caski细胞周期的止常转换，从而阻止细胞的有丝分裂, 抑制细胞生长，这种抑制随药物浓度加大和药物作用时间延长而增加; 而且花椒挥发油可激发程序性细胞凋亡因此，花椒至少可以通过抑 制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等方式发挥抗肿瘤作用而进一 步的体内实验，以及明确花椒挥发油中何种成分发挥作用，其详细的 抗肿瘤机制等问题尚待深入研究参考文献】[1 ] V. Steenkamp, A. C. Fer nan des, C ・ E. J. Van Rensburg ・ Screeni ng of Venda medi cinal pl ants for anti fungal activity against Candida albicans [J]・ South African Journal of Botany, 2007, 73(2) :256.[2 ] T. K. Maji, I. Baruah, S. Dube, et al.Microencapsulation of Zanthoxylum 1imonella oi 1 (ZLO) in glutaraldehyde crosslinked gelatin for mosquito repellent application [J]・ Bioresource Technology, 2007,98(4):840.Kouassi Maximin Ahua, Jean-Robert loset, KarineNdjoko Toset, et a 1・ Anti 1 eishmanial activities associated with plants used in the Malian [J]・ traditional medicine Journal of Ethnopharmacol ogy, 2007, 110(1) :99.[4] Min g-Je n Che ng, Kuo-Hsiung Lee, Ian-Lih Tsai, et al. Two new sesquiterpenoids and anti~HTV principles from the root bark of Zanthoxylum ailanthoides [J]・ Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2005,13(21):5915.[5] 黄云虹，张胜华,甄瑞贤，等.积雪草貳诱导肿瘤细胞凋 亡及增强长春新碱的抗肿瘤作用[J] •癌症,2004, 23(12):1599.[6] 王泽剑，吴英理，林琦，等•人参快醇对HL260细胞体外诱导分化作用的研究[J] •中草药,2003, 34(8) : 736.[7] 唐小卿，曹建国，廖端芳.甲基莲心碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转[J]・癌症,2001,20(8) : 831.[8] 孟玮，刘志强,邱世翠，等.中药口花蛇舌草对小鼠免疫功能影响的初步研究[J]・现代中西医结合朵志,2005,14(2):163.。