脑脊液有形成分检查.doc

脑脊液有形成分检查（显微镜检查法）1. 实验原理在显微镜下对脑脊液有形成分进行计数和分类检查2. 标本采集：2.1标本种类：脑脊液，由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池 或侧脑室穿刺获得2.2标本要求：将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二 管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查每管收集1-2毫 升2.3遇《蛋白标本时可采用EDTAK2抗凝3. 标本储存：立即送检4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：污染，久置标本6. 实验材料：细胞计数板；红细胞稀释液；瑞氏血细胞染色液，生产厂家：（台资）珠海贝索生物技术有限公司7. 实验仪器：7.1仪器名称：OLYMPUS显微镜7.2仪器厂家：OLYMPUS7.3 仪器型号：OLYMPUS CH308. 操作步骤8.1细胞总数8.1.1对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数, 其总和即为每ul的细胞数再换算成每升脑脊液中的细胞数如细胞较多，可计数一大格 內的细胞X 10,即得每ul脑脊液中细胞总数如用升表示，则再乘以106也可用生理盐 水或红细胞稀释液稀释后再用人工计数，或直接用血细胞分析仪进行计数。

8.1.2浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20 M 1，加入含红细胞稀释液 0.38ml的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以 50,即为每ul脑脊液的细胞总数8.2白细胞数8.2.1非血性标本：小试管内放入冰乙酸1-2滴，转动试管，使A壁沾有冰乙酸后倾去之， 然后滴加混匀的脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白 细胞计数法计数8.2.2血性标本：将混匀的脑脊液用1%冰乙酸溶液稀释后进行计数为剔除因出血而來的 白细胞数，用下式进行校正每Pl脑脊液內白细胞校正数每Pl脑脊液内红细胞数X每pi脑脊液内白细胞数=每111脑脊液内白细胞米校正数一每Ml血液内红细胞数例示：血液内红细胞4 000 000/ul;脑脊液内红细胞20 000/ u 1；血液内白细胞10 000/Ml；脑脊液内白细胞60/Pl 20 000x10 000则:60-=60-50= 104 000 000即该患者脑脊液内白细胞之校正数为108.3细胞分类8.3.1直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形 态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞，应数100个白细胞，并 以百分率表示。

若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字8.3.2染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加 正常血清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37C温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分 类如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时8.4寄生虫学检查：经沉淀涂片认真寻找虫卵、幼虫等9. 正常参考区间9.1成人脑脊液内无红细胞，白细胞极少，其参考范围：腰池中为(0-10) X106/L；脑室内为(0-5) X 106/L；儿童为(0-15) X106/L,新生儿为(0-30) X106/L如白细胞达(10-50) X106/L为轻度增加，(50-100) X106/L为中度增加，200X106/L以 上显著增加9.2正常脑脊液中白细胞主要为单个核细胞，多为淋巴细胞及大单核细胞，两者 之比约为7: 3,偶见内皮细胞：软脑膜和蛛网膜细胞、室管膜细胞、脉络膜细胞 等10. 临床意义10.1中枢祌经系统感染性疾病时脑脊液根据细胞病理学变化分三个不同时期：①急性炎性渗山期，呈粒细胞反应；②亚急性增殖期，呈激活淋巴细胞或单核-巨噬 细胞反应；③修复期呈淋巴细胞反应。

化脓性脑膜炎的急性期变化最突出，持续 时间最长；此期脑竹液细胞数每微升可高达数千，以中性粒细胞为主，当用抗生 素治疗后，脑脊液细胞数迅速下降梅毒性脑炎亚急性期出现较早，持续时间较 长，脑脊液中细胞数轻度增加，以淋巴细胞为主，在单纯疱疹病毒性脑炎的脑脊 液淋巴样细胞中可发现胞质内包涵体，结核性脑膜炎吋其脑脊液细胞数可增加，但超过500XI06/L者较为罕见，在发病初期以中性粒细胞力主，但很快下降，由 于患者多在发病数天后才来诊治，因此首次腰穿时，脑竹液中中性粒细胞己趋丁 降而淋巴细胞为多粒细胞、淋巴及浆细胞同时存在是结核性脑膜炎的特点新 型隐球飽性脑膜炎可在脑脊液中直接发现隐球飽，必要时用印度墨汁染色予以确 诊10.2中枢神经系统肿瘤脑脊液细胞总数可正常或稍高，以淋巴细胞为主脑脊液 中能否找到肿瘤细胞取决于肿瘤位置及恶性程度、穿刺部位和采集标本的多少同时也与检查者技术水平有关，采用细胞正玻片离心沉淀仪可提商检出率脑脊液找到白血 病细胞是白血病脑膜转移的证据10.3脑血管病脑脊液细胞学检查有助于鉴别脑山血或腰穿损伤性出血前者在早期病后数 小时可见大量红细胞和明显巾性粒细胞增多，2-3天内达高峰，在脑脊液巾可发现吞噬细胞, 出血后数小时至第3天付出现含有红细胞的吞噬细胞，5天后可见含铁血黄素吞噬细胞。

如为穿刺损伤性出血则不会有上述反应10.4脑寄生虫病不仅脑脊液细胞数升高，并可见嗜酸性粒细胞增多，约占白细胞的60%或 更高浆细胞增多为另一特点如将脑脊液离心沉淀物全倾倒在玻片上，在显微镜下检查可 发现血吸虫卵、阿米巴原虫、弓形体、旋毛虫的幼虫等，甚至还可找至细粒棘球绦虫的头节 或头钩10.5红斑狼疮有时可在脑脊液中找到红斑狼疮细胞11. 方法学评价细胞计数为手工法，存在人为误差细胞较少时应增加计数池计数面积当穿刺损伤血管导 致血性脑竹液或出血性脑血管病时，计数细胞总数己无意义，白细胞数亦须经校正细胞分 类检查一般用脑脊液离心沉渣涂片，经瑞特染色后用油镜分类，但细胞形态常受影响为了 尽可能多地收集细胞和保持完好的细胞结构，国A—些单位已将细胞玻片离心沉淀仪运用于 脑脊液细胞学检查，提高了癌细胞的检出率，在细胞染色技术上也采用这种方法0前常用 染色方法为MayGnimwaldGiemsa染色法其客观存在如吖啶橙荧光染色法适川于对瘤细胞 的辨认；非特异性酯酶染色法适用脑脊液中T细胞辨认；高碘酸雪夫染色法用以鉴别腺癌 细胞和原淋巴细胞；过氧化物酶染色用以鉴别形态相似的幼稚细胞；脂类染色法用于鉴别脂 类吞噬细胞；硝基四氮唑染色法用于鉴定成熟和幼稚的中性粒细胞等。

12. 操作注意事项：12.1脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过久将影响检验结果，使细胞破坏、变性、或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等12.2细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别前者不溶于乙酸，加优质 墨汁后可见不着色的夹膜12.3计数池用后，应用75%乙醇消毒60min忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻 度13. 参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编全国临床检验操作规程（第二 版）145-147 页ABCD人民医院检验科临检室作业指导文件编号：ABCD-3-LJ-29版本/修订号：A/0主题内容尿亚硝酸盐定性测定生效日期：20060808第79页共143页。