黄酮类成分分析.ppt

第二节 黄酮类成分分析,黄芩苷、黄芩素、木犀草素 抗菌消炎 银杏黄酮、葛根素、槲皮素 扩张冠状动脉 芦丁、橙皮苷、d-儿茶素 防治高血压 杜鹃素、芫花素、金丝桃素 止咳、祛痰 紫檀素、黄柏素、桑色素 抗癌,一、概述 具有多方面生理活性,含有黄酮类制剂常选此成分为检测分析对象,γ- 酮,吡喃,,二、结构特征与理化性质,2,2-苯基,（一）结构特征,色原酮,C6－C3－C6,UV吸收增强,,,黄酮类,二氢黄酮类,,甘草苷,芹菜素,,黄酮醇类,二氢黄酮醇类,二氢槲皮素,山萘素,,,双黄酮类,银杏素,,异黄酮类,二氢异黄酮类,,葛根素,,,查耳酮类,二氢查耳酮类,红花苷,,,橙酮类,花色素类,飞燕草素,,,黄烷-3-醇类,黄烷-3,4-醇类,(+)儿茶素,无色矢车菊素,,,黄酮类化合物大多以苷的形式存在,黄芩素 (苷元),汉黄芩素 （苷元）,（二）理化性质,1. 物理性质多为结晶性固体（黄酮苷为无定形粉末）,苷元 二氢类和黄烷类有旋光 苷 均有旋光性，多左旋,无交叉共轭——颜色浅,二氢黄酮 二氢黄酮醇 异黄酮,有交叉共轭——颜色稍深,花色苷及苷元,2. 溶解度,3. 酸碱性,酚羟基,（1）弱酸性,酚羟基↑，酸性↑,,,7,4’-OH> 7或4’-OH >酚羟基>5－OH,杨梅素,槲皮素,木犀草素,黄芩素,芹菜素,1,2,3,4,5,,葛根素,淫羊藿苷,O,,1,2,（2）极弱碱性,可与强酸成盐而显特殊颜色,·· ··,1-O,4. 显色反应,（1）盐酸-镁粉反应,异黄酮、查耳酮、橙酮和黄烷类 盐酸-镁粉反应为负反应,注意,红色,异黄酮、查耳酮、橙酮、黄烷类,（2）与金属盐的配位反应,,,,,芹菜素,木犀草素,,,,交叉共轭,5. 紫外光谱特征,苯甲酰基 吸收带Ⅱ 240 ~ 285nm,桂皮酰基 吸收带Ⅰ 300 ~ 400nm,A,C,B,Ⅰ带 304 ~ 350 Ⅱ带 250 ~ 270,Ⅰ带 358 ~ 385 Ⅱ带 250 ~ 270,Ⅰ带 低强峰或带Ⅱ的肩峰 Ⅱ带 245 ~ 270,三、定性鉴别,（一）显色反应,1. 盐酸-镁粉反应,还原反应,例 牛黄解毒片【鉴别】 取本品6片，研细，加乙醇10mL，温热 10分钟，滤过，取滤液5mL，加盐酸0.5mL 与少量镁粉，加热，溶液显红色。

黄芩）,中药的甲醇或乙醇粗提取物常显酱红色，在进行盐酸-镁粉反应时，可观察加盐酸后升起的泡沫颜色，如果泡沫是红色则为正反应,例 清喉咽合剂 ChP【鉴别】（1）取本品5mL，加醋酸乙酯5mL，振摇提取，分取醋酸乙酯液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，加镁粉少量及盐酸3~4滴，即显红色黄芩苷）黄芩、连翘、地黄、麦冬、玄参,例 大山楂丸中山楂的鉴别 ChP【鉴别】（2）取本品9g，切碎，加乙醇40 mL，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸 干，残渣加水10mL，加热使溶解，加正丁醇15 mL振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣 加甲醇5mL使溶解，滤过，取滤液1mL，加少 量镁粉与盐酸2~3滴，加热4~5分钟后，即显橙 红色黄酮类-槲皮素，金丝桃苷）山楂、六神曲、麦芽,2. 与金属盐的配位反应,常用下列试剂的醇溶液 硝酸铝三氯化铝二氯氧锆,C3-OH、C4=O，C5-OH、C4=O,邻二-OH可与金属离子络合显色,Al3+、Zr4+能与大多数黄酮类药物产生黄绿色荧光,例 银黄口服液 ChP【鉴别】（1）取本品1mL，加5%硝酸钠溶液和10%硝酸铝溶液各0.3mL，生成黄色沉淀；再加5%氢氧化钠溶液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。

黄酮类） （2）取本品0.1mL，加水10mL，摇匀，取溶液2mL，加5%二氯氧化锆溶液1~2滴，溶液显黄色，再加盐酸1~2滴，黄色不褪黄酮类）金银花、黄芩,,,（二）薄层色谱法,常用吸附剂,硅胶 弱极性药物 聚酰胺 含游离羟基黄酮及其苷 纤维素 多糖苷类混合物,1. 硅胶薄层色谱,在硅胶薄层板上，黄酮类化合物Rf值大小与其极性有关,在硅胶板上黄酮类Rf 值的比较,样品极性大 Rf 小 展开剂极性要大 样品极性小 Rf大 展开剂极性要小,样品极性越大，越易被硅胶吸附,含羟基越多，越容易产生拖尾现象 措施 *铺板时加碱液*展开剂加酸、水*改用聚酰胺TLC法,例 二陈丸中橙皮苷的鉴别 ChP,,100:17:13(3cm),20:10:1:1(8cm),,制备,NaOH,,2. 聚酰胺薄层色谱,黄酮类分子中的酚羟基与聚酰胺 分子中的酰胺基形成氢键,因酚羟基的数目、位置的不同使 形成氢键的能力有差异而得到分离,聚酰胺 属于氢键吸附,,,水＞有机＞碱液 展开剂极性应增强,影响聚酰胺吸附力的因素,1. 样品分子中酚羟基越多，吸附力↑ 2. 样品的共轭双键越多，吸附力↑ 3. 样品能形成分子内氢键，吸附力↓,4. 溶剂极性大，吸附力↓,,,例 益心酮片中总黄酮鉴别 ChP（山楂叶提取物）,四、含量测定,（一）总黄酮含量测定,例 复方芦丁片中芦丁的含量测定——UV法,（芦丁、维生素C）,（0.2mg/mL ）,稀释,用无水芦丁制备标准曲线,测定供试品,,研细,至50mL量瓶,△,,,计算,2. 比色法,与金属离子络合显色,（二）单体黄酮类成分的含量测定,1. 薄层色谱法,薄层色谱－ 分光光度法,薄层扫描法,硅胶 聚酰胺 纤维素,例 银黄注射液中黄芩苷的测定——薄层色谱-分光光度法,测定供试品,将测得供试液吸收度（A样-A空）代入回归方程，计算供试液浓度,2. HPLC法,正相色谱 固定相 硅胶（键合极性基团） 流动相 正丁醇-乙酸-水 适用于 无羟基或乙酰化黄酮类,键合相 氰基（-CN） 展开剂 乙烷-氯仿 适用于 含一个羟基或乙酰化黄酮类,键合相 氨基（-NH2） 展开剂 二氧六环-二氯甲烷 适用于 含二个以上羟基黄酮类,反相色谱,键合相 C18键合相 展开剂 甲醇-水-乙酸、乙腈-水 检测器 紫外或荧光检测器,1. 能发生盐酸-镁粉反应的药物有A. 黄芩B. 槐米C. 银杏叶D. 山楂E. 陈皮,,,,,,2. 黄酮母核上酚羟基的酸性以5-OH 为最弱的大原因是A. p-π共轭效应B. 吸电子诱导效应C. 供电子诱导效应 D. 交叉共轭体系E. 分子内氢键形成,,3. 黄酮类化合物UV光谱的带Ⅰ是由 下列哪个结构系统所引起A. 苯甲酰基系统B. 桂皮酰基系统C. 色原酮结构 D. 邻二酚羟基结构E. C4=O，C5-OH结构,,4. 哪种基团的极性最弱 A. R-CH3B. R-HC. R-O-CH3D. R-O-糖E. R-OH,,5. 黄酮类化合物的基本碳架为A. C6－C1－C6B. C6－C2－C6C. C6－C3－C6D. C6－C4－C6 E. C6－C5－C6,,[6~10] 黄酮类药物特点 A. 聚酰胺色谱 B. 桂皮酰基C. 黄酮类 D. 异黄酮类 E. 苯甲酰基6. 具有交叉共轭体系7. 与酚羟基形成分子内氢键8. 240nm~285nm9. 无交叉共轭体系10. 300nm~400nm,C,A,E,D,B,11. 黄酮类药物常采用的鉴别反应有 A. 重氮化-偶合反应B. 盐酸-镁粉反应C. 二氯氧锆反应D. 三氯化铝反应E. 硫代乙酰胺反应,,,,12. 黄酮类药物具有哪些基团则可与金属离子反应生成有色络合物A. 邻二-OHB. C2-OH、C3=OC. C3-OH、C4=OD. C4-OH、C5=OE. C4=O、C5-OH,,,,13. 哪些黄酮类药物具有交叉共轭体系A. 二氢黄酮B. 二氢黄酮醇C. 黄酮D. 黄酮醇E. 查尔酮,,,,14. 下列哪些话是对的A. 黄酮类药物的酸性强弱与酚羟基的数目和位置有关B. 黄酮苷元一般难溶于水C. 聚酰胺对黄酮类成份的吸附能力较强，因而展开剂需要有较强的极性D. 黄酮苷类应采用有机溶剂为展开剂E. 金属离子能与黄酮类成份络合产生荧光,,,,,15. 哪种基团在硅胶板上Rf值最小 A. R-CH3B. R-HC. R-O-CH3 D. R-O-糖E. R-OH,,16. 属于黄酮类药物的紫外吸收特征是A. 吸收带Ⅰ在300 ~ 400nmB. 桂皮酰基C. 吸收带Ⅱ在240 ~ 280nm D. 吸收带Ⅲ分别在205、250、300nm附近E. 苯甲酰基,,,,,17. 黄酮类化合物可与强无机酸形成烊盐是因为其分子中含有A. 羟基B. 羰基C. 双键D. 氧原子E. 苯环,,18. 可用于区别C3-羟基黄酮和C5-羟基黄酮的显色反应是A. 盐酸-镁粉反应B. 醋酸镁C. 二氯氧锆-枸橼酸反应D. 氨性氯化锶反应E. 四氢硼钠反应,,19. 黄酮类化合物加二氯氧锆甲醇液显黄色，再加入枸橼酸甲醇液，黄色显著消褪，该化合物含有A. C3-OHB. C4′、C7-二OHC. C5-OHD. C4′、C7-二OHE. C7-OH,,[21~25]黄酮类药物特点A. C5-OH B. 桂皮酰基 C. 苯甲酰基D. C3-OH、C4=O E. C6－C3－C621. 可与金属离子络合显色22. 比其它位置上相同基团的酸性弱23. 吸收带Ⅰ24. 吸收带Ⅱ25. 黄酮类药物的基本碳架,D,A,B,C,E,26. 黄酮类化合物UV光谱的带Ⅱ是由 下列哪个结构系统所引起A. 苯甲酰基系统B. 桂皮酰基系统C. 色原酮结构 D. 邻二酚羟基结构E. C4=O，C5-OH结构,,27. 下列哪些黄酮类化合物能与金属离子形成有色络合物？为什么？,葛根素,芹菜素,木犀草素,苦参醇,。