混合氨基酸的分离(纸层析)700字.docx

    混合氨基酸的分离(纸层析)700字    混合氨基酸的分离——纸层析目的：本实验的目的在于掌握纸层析的一般原理和操作技术原理：纸层析法是以滤纸为支持物的分配层析法，利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的，通常用a表示分配系数，在一定条件下，一种物质在某溶剂中的分配系数是一个常数Cs）a==溶质在静止相的浓度（溶质在流动相的浓度（Cl）移动速度一般用移动速率Rf值表示：离Rf==原点到层析点中心的距原点到溶剂前沿的距离各种化合物在恒定条件下，经层析后都有其一定的Rf值，也就是说在层析谱中有一定的位置借此可以达到定性、分离、鉴别的目的 物质的分配系数是由以下因素决定的： 1、 物质极性的大小 2、 滤纸的质地3、 溶剂的纯度、pH和含水量层析的温度和时间4、 因此，层析过程中，对以上影响Rf的因素必须严格控制 实验材料；Arg、Glu、Pro、Phe、 展层剂的配比：20mL正丁醇 ：甲醇 ：含2％茚三酮的水溶液===15 ：3 ：2 操作步骤：1、滤纸的准备：（单向层析 ）裁成15×15cm2、点样： 点样时选用毛细管分别点在每个点样处，必须待前次样液干后再点第二遍，样点的直径以2—3mm为宜。

将点好样品的滤纸卷成筒形，再上下二处用透明胶布粘接，但滤纸两边缘不能接触3、层析：将滤纸的点样端朝下直立于盛有展层液的培养皿中，样点不能浸入展层液，以免浸脱罩上层析罩，这时展层液沿纸上升一定的高度时，取出后放在60—65℃干燥箱内哄直到显出各种氨基酸的色斑4、结果与计算：显色完毕后，用铅笔将各斑点的轮廓和中心点描绘出来，量出Xi和Yi值，计算Rfi值进行比较和鉴定第二篇：实验一、氨基酸纸层析分离鉴定 1100字实验一 氨基酸的分离鉴定————纸层析法一 预习思考题1.本实中滤纸的作用是什么？2.实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？3.Rf值的含义影响因素？4.两Rf值之差为多少范围内可以确定为同一物质？5.层析滤纸和普通滤纸有什么区别？6.为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？7.用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？8.缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？9.为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？10.标记滤纸不能使用油性笔，为什么？11.查阅资料，解释纸层析分离氨基酸原理1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相。

2.以水相为固定相，展开的溶剂作流动相3.溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：展开斑点中心与原点之间的距离/溶剂前某种沿与原点之间的距离影响因素：在一定条件下某种物质的Rf值是常数Rf值的大小与物质的结构性质，溶剂系统，层析滤纸的质量，温度，样品溶液中的杂质等因素有关4.样品分离各组分一般Rf值在05~0.85之间，彼此间差值不应0.05，样品与标准差值<0.05基本确认为同一物质 5.层析滤纸，组成该滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析对于复杂的混合物，可做双向层析普通滤纸，由棉质纤维组成，按不同的用途而使用不同的方法制作由于其材质是纤维制成品，因此它的表面有无数小孔可供液体粒子通过，而体积较大的固体粒子则不能通过这种性质容许混合在一起的液态及固态物质分离 6.使分离物质在溶剂中的分配较恒定，得到的斑点较圆整 7.因为人的皮肤表面也有氨基酸，如果直接接触， 会干扰实验 8.两边缘相靠导致滤纸的厚度不均，溶剂在滤纸上的移动速度不一致，影响实验结果9.点样时点完一点应干燥后在滴，以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。

10.油性笔标记会溶与层析液，影响实验结果11.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，纸层析所用展层溶剂大多由有机溶剂和水组成其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相在层析时，将样品在距滤纸一端约2~3cm的某处，该点为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，即不同氨基酸在相同的溶剂中溶解度不同，所以利用在滤纸上迁移速度不同分离氨基酸不同，氨基酸随流动相移动的速率就不同，结果他们分布在滤纸的不同位置上而形成距原点距离不同的层析点物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用Rf值来表示＋   -全文完-。