裸鼠蛋白磷酸酶PP酶联免疫分析ELISA.docx

裸鼠蛋白磷酸酶(PP)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定裸鼠血清，血浆及相关液体样本中蛋白磷酸酶(PP)的含量试剂盒性能：1•样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上2.批内与批见应分别小于9% 和11% 检测范围：请来电咨询 保存条件及有效期： 1•试剂盒保存：;2-8C2．有效期：6 个月 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高(样本0D值 大于标准品孔第一孔的od值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数a倍)后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数(xnx5)o5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6. 底物请避光保存7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9. 本试剂不同批号组分不得混用10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准 实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中裸鼠蛋白磷酸酶(PP)水平用纯化的裸鼠蛋白磷 酸酶(PP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入蛋白磷酸酶(PP), 再与HRP标记的蛋白磷酸酶(PP)抗体结合，形成抗体-亢原■酶标抗体复合物，经过彻底洗涤 后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的 黄色颜色的深浅和样品中的蛋白磷酸酶(PP)呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸 光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中裸鼠蛋白磷酸酶(PP)浓度样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）仔细收集上清检测细胞内的成份时，用PBS （PH7.2-7.4稀释细胞悬液，细胞 浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份离心20分 钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清保存过程中如有沉淀形成，应再次离心5. 组织标本：切割标本后，称取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷冻保存备 用标本融化后仍然保持2-8C的温度加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分离心20分钟左右（2000-3000转/分）仔细收集上清分装后一份待 检测，其余冷冻备用6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上 进行试验，可将标本放于-20C保存，但应避免反复冻融.7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性 试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2 片(48)2 片(96)密封袋1个1个酶标包被板1x481x962-8C保存标准品：2700ng/L0.5ml x1 瓶0.5mlx 1 瓶2-8C保存标准品稀释液1.5mlx 1 瓶1.5mlx 1 瓶2-8C保存酶标试剂3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存样品稀释液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存显色剂A液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存显色剂B液3 mlx 1 瓶6 mlx 1 瓶2-8C保存终止液3ml x1 瓶6ml x1 瓶2-8C保存浓缩洗涤液(20mlx20 倍)x1 瓶(20mlx30 倍)x1 瓶2-8C保存操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100也然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50也混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100山分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50也 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50山弃掉，再各取50山分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50u|混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50山分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50也 混 匀后从第七、第八孔中分别取50山加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50也 混匀后从第九第十孔中各取50山弃掉。

稀释后各孔加样量都为50也 浓度分别为 1800ng/L， 1200ng/L，600ng/L，300ng/L， 150ng/L）2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40也然后再加待测样品10山（样 品最终稀释度为5 倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟4. 配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 （48T的20倍）倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干6. 加酶：每孔加入酶标试剂50也 空白孔除外7. 温育：操作同 38. 洗涤：操作同 59. 显色：每孔先加入显色剂A50 a!再加入显色剂B50 Al轻轻震荡混匀，37C避光显色 15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50 a!终止反应（此时蓝色立转黄色）11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（0D值）测定应在加终止 液后15分钟以内进行计算： 以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与0D值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。