异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病监测染色体核型及融合基因表达.doc

异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病监测染色体核型及融合基因表李正发刘伟杜云云杨同华赵婕史克倩唐新华 杨艳梅章印红赖洵闻艳陆志祥 云南省第一人民医院血液内科摘要：背景:有报告显示，70%的慢性髓细胞性白血病患者异基因造血干细胞移植后1-5 个月的细胞遗传学和基因标志检测阴性，但个别病例移植后1-3个月内反复变 化，移植3-12个月的阴性率可达89.5%冃的：监测异慕因造血干细胞移植治疗 慢性髓细胞性白血病后的细胞分子遗传学标志变化，探讨其预后意义方法:纳 入异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病患者17例，移植后30 d及 2, 3, 4, 6, 12, 24, 36, 4& 60, 72个月，采用骨髓细胞短期培养法和直接 法G显带分析患者染色体，双色荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因，RQ-PCR 检测骨髓原代细胞的bcr/abl基因结果与结论：17例患者中，8例为男患/男供 者异基因造血干细胞移植，7例为男患/女供者异基因造血干细胞移植（同胞姐 妹），移植后多次复查染色体核型为46XX （女性核型），未见Y染色体及其他 畸变染色体核型；1例为女患/女供者异基因造血干细胞移植（其姐妹）；1例为女 患/无亲缘男供异基因造血干细胞移植，移植后1个月时染色体核型46XY,但 bcr/ab 1阳性，4个月后持续表达46XY, bcr/abl阴性，观察超过96个月，为持 续缓解，说明疗效良好;其中1男患/男供（全相合同胞弟）异基因造血干细胞 移植后，1-12个月Ph染色体bcr/abl基因持续阳性表达，施行供者淋巴细胞输 注，48个月后染色体bcr/abl转阴性表达，为持续缓解。

结果表明，慢性髓细 胞性白血病患者实施异基因造血干细胞移植后，染色体核型、bcr/abl融合基因 监测对后续治疗选择、预后判断有重要参考价值关键词：干细胞;移植;异基因造血干细胞移植;染色体核型;bcr/abl融合基因;慢性 髓细胞白血病;云南省自然科学基金;作者简介：李正发，男，1967年生，云南省昆明市人，主任医师，教授，主要 从事白血病药物治疗机制、干细胞移植、微小残留病检测方法研究作者简介：刘伟，硕士，云南省第一人民更院血液科，云南省昆明ill 650032收稿日期:2017-05-16基金：云南省自然科学基金Clinical monitoring of chromosome karyotype and fusion gene expression after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in chronic myelocytic leukemiaLi Zhenrfa Liu Wei Du Yun-yun Yang Tong-hua ZhaoJie Shi Ke-qian Tang Xin-hua Yang Yan-mei ZhangYin-hong Lai Xun Wen Yan Lu Zhi-xiangDepartment of Hematology, First PeoplesHospital of Yunnan Province;Abstract：BACKGROUND: Tt has been reported that 70% of patients wi th chronic myel oid leukemia (CML) are negative for cytogenetic and genetic markers within 1-5 months after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) , but there are still some patients who have repeatedly varied outcomes in cytogenetic and genetic marker detection. Overall, the negative rate is up to 89. 5% at 3~12 months after allo-HSCT. OBJECTIVE: To monitor the changes in cytogenetic and genetic marker expression and to explore the prognostic significance in CML patients undergoing allo-HSCT. METHODS: Seventeen CML patients who had undergone allo-HSCT were enrolled. Chromosome G banding patt巳rn of the bone marrow from these pat ients were anal yzed using shor t-t erm culture met hod and direct method at 30 days, 2, 3, 4, 6, 12, 24, 36, 4& 60, 72 months after allo-HSCT. Dual-color fluorescence in situ hybridization was used to detect bcr-abl fusion gene; bcr-abl expressions in primary bone marrow cells from CML patients were detected using RQ-PCR. Results and conclusion: There were 8/17 cases of male patient/male donor and 7/17 cases of malepatient/female donor (compatTiots) . 46 XX karyotype (women) was detected by multiple reexaminations after transplantation, and there was no Y chromosome or other aberration of chromosome karyotype in their karyotype. Among the 17 cases, 1 case of female patient/female donor (compatriots) and 1 case of female patient/male donor (unrelated) manifested 46 XY chromosome karyotype and bcr-abl positive at 1 month after transplantation; after 4 months, these two cases still maintained 46 XY chromosome karyotype but bcr~abl negative; after 4~96 months, the karyotype continued to remain as 46 XY, and bcr-abl (-) • Among the 17 cases, 1 case of male patient/male donor of full-matched compatriot (brother) manifested that Ph chromosomal bcr-abl gene continuously expressed within 1-12 months after allo-HSCT; then the cases was given donor lymphocyte infusion, and the bcr~abl expression returned to be negative at 48 months after transplantation. To conclude, chromosomal karyotype analysis and bcr-abl fusion gene monitoring provide important reference value for subsequent treatment options and prognosis judgment for CML patients with allo-HSCT.Received： 2017-05-16文章快速阅读：文题释义: 异基因造血干细胞移植:按造血干细胞的来源部位可分为骨髓移植、外周血干细 胞移植和脐血干细胞移植。

按造血干细胞来自患者自身与否可分为自体移植、同 基因移植和异基因移植其中同基因移植是指患者与移植供体为同卵李牛兄弟或 姐妹对急性白血病无供体者，在治疗完全缓解后，采取其自身造血干细胞用于 移植，称为“自体造血干细胞移植”因为缓解期骨髓或外周中恶性细胞极少， 可视为“正常”细胞，但一般复发率较高，因而疗效比异体移植稍差0 弓| 言 Introduction细胞遗传学、分子牛.物学标志在白血病诊断、治疗、预后判断中有着不可替代的 重要意义，许多白血病有特异性的染色体改变，而且一些亚型也表现特异性的 染色体改变，随着疾病的进程，白血病恶性克隆的演化在细胞遗传学上表现为 染色体核型变异和慕因表达的改变造血干细胞移植是当前治疗口血病最有效的 方法之一，特别是异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)可使大多数白血病患者达到基因缓解尽 管近年来酪氨酸激酶抑制剂治疗慢性髓细胞性白血病(chronic myeloid leukemia, CML)可达到持续分子学缓解，甚至有停药的可能，但allo-HSCT仍 然是目前惟一能够治愈CML的最佳方法。

近5年后中国CML治疗专家共识及诊疗 指南将酪氨酸激酶抑制剂作为治疗CML的一线药物有学者报告，70%的CML患者allo-HSCT后1-5个月细胞遗传学和基因标志检测 阴性，但个别病例移植1-3个月内反复变化，大于移植3-12个月的阴性率可达 89. 5%,在其他行allo-HSCT治疗的血液病中亦可见到残留的T细胞表达抗原， 参与移植物抗宿主病效应上01作者在2001至2008年选择部分找到全相合供者、有强烈愿望作allo-HSCT的 CML患者进行了移植治疗，观察到2014年后患者染色体核型和基因表达变化及 无进展牛存期，为以后的移植治疗选择提供参考1 对象和方法 Subjects and methods1.1设计回顾性病例分析1.2时间及地点试验于2001年1月至2008年12月在云南省第一人民|矢院血液内科完成1.3对象选择云南省第一人民医院血液内科2001年1月至2008年12月收治的CML患者, 有HLA配型全相合供者，患者有强烈愿望选择allo-HSCToallo-HSCT成功植活, 骨髓细胞培养收获可供分析的细胞分裂相，临床资料可供研究的CML患者17例, 观察到2014年12月，年龄24-46岁，中位年龄32岁。

纳入标准:全部病例凭血常规、骨髓细胞、免疫学、遗传学、融合基因检查确诊 为CML,诊断标准见张志南主编《血液诊断标准》第3版;性别不限，年龄18-60 岁；研究对象对本研究的相关内容知情同意，并签署知情同意书排除标准:非CML行allo-HSCT,接受自体造血干细胞移植的患者1.4方法所有病例采用外周血allo-HSC。