生物化学实验课件：AKTA PRIME PLUS 系统.ppt

AKTA PRIME PLUS 系统*1目录一、色谱层析原理二、AKTA Prime 硬件配置三、面板操作按钮四、AKTA Prime 数据采集Prime View五、入门指南六、AKTA PRIME PLUS日常保养2一、色谱层析原理凝胶过滤层析离子交换层析疏水层析亲和层析 31.凝胶过滤1. 凝胶柱，凝胶颗粒2.加样3.样品和缓冲液进入凝胶柱， 分子扩散4.大分子蛋白首先流出，根据分子量大小依次流出 42.离子交换层析 (IEX)加样和冲洗平衡洗脱再生阴离子交换柱电导率根据电荷差异进行分离5二、AKTA Prime 配置AKTA Prime + RecorderAKTA Prime + Prime ViewFlow rate range 0.150 ml/min in steps of 0.1 ml/minOperating pressure range 01.0 MPa61、AKTA Prime 主机组分收集器控制面板系统泵7缓冲液阀三通梯度配比阀2、AKTA Prime 主要硬件组成82、AKTA Prime 主要硬件组成泵头压力感应器梯度混合器92、AKTA Prime 主要硬件组成上样阀层析柱检测流动池：紫外、电导收集切换阀收集出口柱夹槽口103、AKTA Prime 流程图114、AKTA Prime 阀梯度通过梯度阀交替泵A/B液实现梯度125、AKTA Prime 泵自动清洗如何手动抽气136.七通进样阀原理三种工作状态：1) LOAD2) INJECT3) WASTE141）LOAD缓冲液：泵71柱子泵柱子样品环注射器样 品：注射器3264缓冲液152）INJECT样品：泵7621泵柱子样品环注射器163）WASTE缓冲液：泵75泵柱子样品环注射器17三、面板操作按钮181、进入菜单按上下箭头，可选择菜单命令、调整参数等。

按OK进入子菜单；按ESC退到上级菜单；192、快捷键分布收集器前进一管停止程序或方法运行梯度运行过程中，按此键，系统将保持当前浓度运行，而流速和分步收集继续，再按一下，继续梯度运行按此键，系统暂停运行，包括泵和收集，再按一下，继续203、操作命令简介主菜单预编好的方法模板运行保存的方法手动运行编辑方法将方法拷入电脑或拷回设定系统参数检查系统状态213、操作命令简介子菜单：以Manual Run为例22设置横坐标单位是ml或min设置B起始浓度%B梯度（长度ml/目标浓度%B）流速ml/min收集单位ml、min、drop收集数量（每管）限压（保护层析柱）MPa缓冲阀位1-8样品阀位waste、load、inject开始23四、AKTA Prime 数据采集Prime View电脑+软件（含数据线）+Recorder记录仪Prime View 软件241、Prime View数据采集数据处理251）Prime View数据采集26运行曲线图谱（Curve）：记录系统采集到的全部数据，系统开始运行后，自动开始记录，结束后，自动保存运行日志（Logbook）：记录系统收到的所有指令2728Prime View数据采集选择浏览曲线及设定曲线颜色设定X，Y轴的坐标范围292）Prime View数据处理303132输出报告内容可按自己的要求编辑报告格式3334积分结果图谱及积分表3536浏览属性浏览曲线X、Y轴积分表37五、入门指南n-准备 (缓冲液 0.45u, 超声脱气75功率1015min , 样品 0.45u, 柱子)n-先打开 AKTA ，再开电脑，打开软件Prime Viewn-水冲系统 (抽气)n-连接柱子 n-水冲柱子至少2倍柱子体积n-缓冲液A冲洗，打开紫外灯平衡柱子5倍柱子体积或紫外检测线稳定n-样品打入上样环n-上样阀切换到Inject 模式将样品打入柱子n-峰收集n-结束，重命名并转移结果，用Prime View evaluation编辑结果n-水冲洗2倍体积置换缓冲液n-20% EtOH 冲洗柱子5倍体积，保存柱子。

n-关闭 AKTA和Prime View38延迟体积39六、AKTA PRIME PLUS日常保养n-所有样品、试剂必须过膜（0.45u）；n-缓冲液温度平衡n-染菌缓冲液必须倒掉；n-保证泵、柱前没有气泡；n-密闭冲洗：每周更换 20% EtOH （5 ml/min，1h）；n-系统总是保存在 20% EtOH中，不是缓冲液、盐溶液、有机溶剂；n-清洗管路时关闭 UVn-高压报警检查压力限制40。