正交实验优选恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒炮制工艺.docx

正交实验优选恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒炮制工艺 作者：张金莲 张的凤 罗文华 【摘要】 目的筛选恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒的最佳炮制工艺方法以马兜铃酸含量为指标，采用正交实验法对恒温干燥法蜜炙马兜铃的炮制工艺进行优选结果 加蜜量对实验结果有显著影响，烘制温度和烘制时间对实验结果无显著影响，最佳炮制工艺为：加蜜量35％，烘制温度110℃，烘制时间60 min结论优选得到的工艺参数有实际应用意义 【关键词】 蜜炙马兜铃 恒温干燥 降毒炮制工艺 正交实验 马兜铃酸A 马兜铃为马兜铃科植物北马兜铃Aristolochia contarta Bge和马兜铃 Zucc.的干燥成熟果实马兜铃常用炮制品主要有马兜铃片和蜜炙马兜铃片两种马兜铃功能清肺降气，止咳平喘，清肠消痔用于肺热喘咳，痰中带血，肠热痔血，痔疮肿痛 用传统方法蜜炙马兜铃，在炮制过程中火候难以掌握，质量稳定性差为探求影响蜜炙马兜铃成分马兜铃酸的重要因素，我们采用了恒温干燥法蜜炙马兜铃本文通过L9(34)正交实验 ，以马兜铃酸A含量为指标，采用正交实验法对恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒的炮制工艺进行优选，探讨蜜炙马兜铃降毒的最佳炮制工艺。

1 仪器与材料 仪器Waters2695 高效液相色谱仪，Waters 2996 photodiode Array Detector，自动进样器，Empower pro色谱工作站Sartoriors 超纯水仪，METTLER TOLEDO AG245电子天平 材料马兜铃酸A对照品（中国药品生物制品检定所 0746-200103），乙腈（美国Tedia公司）色谱纯，乙醚、丙酮、甲酸、乙醇均为分析纯，水为超纯化水 马兜铃201702购自安微省亳州市药材市场，经江西中医学院中药系中药鉴定教研室褚小兰教授师鉴定为北马兜铃（Aristolochia ）干燥成熟果实蜂蜜由江西蜂业公司提供 　　2 含量测定的方法学研究 色谱条件色谱柱为 Kromasil C18柱 (250 mm× mm，5 μm)流动相:乙腈%乙酸(52∶48)；流速: ml／min；检测波长：315 nm；柱温:23℃理论塔板数按马兜铃酸A计算不低于3000,分离度＞马兜铃酸A，蜜炙马兜铃HPLC色谱图分别见图1～2 对照品的配制精密称取适量马兜铃酸A对照品，加甲醇制成1 ml含 7 mg的溶液。

供试品溶液的制备精密称取蜜炙马兜铃粉末(40目)约 g置索氏提取器中，加10%甲酸的丙酮150 ml，在85℃水浴中提取5 h，提取液回收至干，用5%的氢氧化钠15 ml溶解，使其完全转移到分液漏斗，调pH至10，用乙醚萃取2次(15 ml/次)萃取后的碱液，用%的硫酸溶液调pH至2，用乙醚萃取6次(15 ml/次)，合并萃取液，蒸干，用乙醇定容至10 ml，作为供试品溶液 线性关系的考察取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，（ 7 mg）加甲醇100 ml溶解并稀释至刻度，摇匀精密量取1，2，4，8，10 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按正文方法，注入液相色谱仪中，测定马兜铃酸A峰面积以进样量(μl)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=××103，r= 1 结果表明对照品浓度与峰面积平均值呈良好的线性关系，线性范围为 7～ μg 精密度实验精密吸取马兜铃酸A对照品溶液20 μl，注入色谱仪，在相同的色谱条件下，重复进样6次，以马兜铃酸A的峰面积计算，其RSD=%结果表明该方法具有良好的精密度结果见表1表1 精密度实验结果（略） 重现性试验精密称取蜜炙马兜铃粉末(40目)约 g，共6份,按 项下操作，在相同的色谱条件下，各吸取20 μl进样测定，RSD=%。

结果表明该方法重现性良好结果见表2表2 重现性实验结果（略） 稳定性实验精密称取蜜炙马兜铃粉末(40目)约 g，共5份，按项下操作，在相同的色谱条件下，于 0，2，4，6，8h各进样20 μl，以马兜铃酸A的峰面积计算，其RSD=％，表明8 h内供试品稳定性良好结果见表3表3 稳定性实验结果（略） 回收率实验采取加样回收法，精密称取 g蜜炙马兜铃样品，加入一定量的对照品，按 项下操作并测定含量，马兜铃酸A平均回收率 ％ 样品含量测定取蜜炙马兜铃的样品，按 操作，进样20 μl，按上述色谱条件测定，计算马兜铃酸A含量 3 恒温干燥法蜜炙马兜铃的工艺优选 影响炮制主要因素的确定以炮制温度、时间、加蜜量为考察因素，每个因素拟定 3个水平表4 蜜灸马兜铃因素水平（略） 正交试验安排及结果选用L9(34 )正交表安排试验，选除净杂质后的马兜铃，精密等量称取10 g共 9 份，按L9(34 )正交表安排的9种工艺，加入相应量的炼蜜，闷润透心后 ，单层铺于不锈钢托盘上，依照条件分别置恒温干燥箱烘制，取出，晾凉以蜜炙马兜铃中马兜铃酸A(测定方法见，n=3)作为指标，利用马兜铃酸A含量确定最佳的炮制方法。

正交试验安排及结果见表5，方差分析结果见表6表5 L9（34）正交实验设计及结果（略）表6 方差分析（略） 研究结果表明，A因素温度、B因素时间对试验结果无显著影响，C因素加蜜量有显著影响，比较 R值可直观分析，影响程度为 C>B>A，综合考虑饮片的干燥及成品水分含量等因素，恒温干燥法蜜炙马兜铃降毒的最佳工艺组合确定为 A2B2C3，即100 kg马兜铃加蜜量35 kg，烘制温度 110℃，烘制时间60 min 　　4 讨论 目前，蜜炙马兜铃多采用传统方法，在操作中火候难以掌握，太过易焦，不及则不能达到炮制要求，质量稳定性差而通过恒温干燥法代替手工炒制甘草，正好填补传统方法的不足，新法生产温度和时间可控，干燥速度快，质量稳定性好，无污染，操作方便 在2017版《中国药典》中没有记载马兜铃的含量测定方法［1］采用文献报道［2］ 流动相:甲醇水乙酸(70∶29∶1),检测波长315 nm，流速 ml/min的条件下色谱峰的分离效果不是特别理想,本试验采用流动相为乙腈%乙酸(52∶48)，柱温:23℃，检测波长315 nm，流速 ml/min时，峰形良好并可达到完全分离。

在本试验中，运用正交表，选出具有代表性的进行试验，以求得最优的工艺由于正交表"均衡搭配"的特点，不仅减少了试验次数，分析后结果也更加科学可靠我们还以马兜铃降毒的最佳工艺组合 A2B2C3，即100 kg马兜铃加蜜量35 kg，烘制温度 110℃，烘制时间60 min炮制了3批样品进行验证试验，结果表明此工艺是合理的 【参考文献】 　　［1］国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2017：35． ［2］孙文基,谢世昌,孙曾培，等.天然药物成分定量分析［J］.北京：中国医药科技出版社，2017：36. 1 / 1。