脂肪酶(lps)活性试剂盒使用说明.pdf

脂肪酶（脂肪酶（LPSLPS）活性试剂盒使用说明）活性试剂盒使用说明微量法微量法注意：正式测定之前选择注意：正式测定之前选择 2-32-3 个预期差异大的样个预期差异大的样 本做预测定本做预测定货号货号：BC2345规格规格：100/96S产品内容：产品内容：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存试剂二：液体×1 瓶，室温保存试剂三：液体×1 瓶，4℃保存标准品：液体×1 瓶，10 µmol/mL 的标准溶液，室温保存临用前加入 3.1683.168 mLmL 甲苯，充分溶解产品说明：产品说明：LPS 又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯） LPS广泛的存在于各种生物中血清中 LPS 的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算 LPS 活性自备仪器和用品：自备仪器和用品：研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、冰和蒸馏水操作步骤：操作步骤：一、粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g） ：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL 试剂一）进行冰浴匀浆。

16000rpm，4℃离心 40min，取上清置冰上待测2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个） ：试剂一体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一） ， 冰浴超声波破碎细胞 （功率 300w， 超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min） ；然后 16000rpm，4℃离心 40min，取上清置冰上待测3. 血清等液体：直接检测二、LPS 测定操作：1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min，调节波长到 710 nm，蒸馏水调零2. 试剂一和试剂二置于 37℃水浴预热 30min 以上3. 空白管： 取 1.5mL 离心管， 依次加入 130μL 试剂一 50μL 试剂二和 2020μμL L 蒸馏水，置于 37℃震荡反应 10 min；加入 300μL 甲苯，反复震荡混匀 10min，25℃，4000rpm 离心 10min；小心吸取上层溶液 200μL，加入 1.5mL 离心管中，再加 50 μL 试剂三，反复震荡 5min；25℃，4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 150μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值。

记为 A 空白管4. 测定管： 取 1.5mL 离心管， 依次加入 130μL 试剂一 50μL 试剂二和 2020μμL L 上清液，置于 37℃震荡反应 10 min；加入 300μL 甲苯，反复震荡混匀 10min，25℃，4000rpm 离心 10min；小心吸取上层溶液 200μL，加入 1.5mL 离心管中，再加50 μL 试剂三，反复震荡 5min；25℃，4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 200μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值记为 A 测定管5. 标准管：取标准品 200 μL，加入 1.5mL 离心管中，再加 50 μL 试剂三，反复震荡 5min；25℃，4000rpm 离心 10 min，小心吸取上层溶液 150μL，加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 处测定吸光值记为 A 标准管三、LPS 活性计算公式：A.A.使用微量比色皿测定：使用微量比色皿测定：1.组织 LPS 活性（1）按照蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷ （Cpr×V 样）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷Cpr（2）按照样本质量计算活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol/min/g) =[C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷W2.细胞 LPS 活性活性单位定义：37℃中每 104个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol /min/ 104cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T =10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷细胞数量3.血清等液体 LPS 活性活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷V 样÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]C 标准品：10 µmol/mL；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min。

B.B.使用使用 9696 孔板测定孔板测定1.组织 LPS 活性（1）按照蛋白浓度计算活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol/min/mg prot) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷ （Cpr×V 样）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷Cpr（2）按照样本质量计算活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol/min/g) =[C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷W2.细胞 LPS 活性活性单位定义： 37℃中每 104个细胞每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位LPS (μmol /min/104cell) = [C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷（细胞数量×V 样÷V 样总）÷T =10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]÷细胞数量3.血清等液体 LPS 活性活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成 1μmol 脂肪酸为一个酶活单位。

LPS (μmol /min/mL) = [C 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]×V 反总÷V 样÷T=10×[(A 测定管－A 空白管)÷A 标准管]C 标准品：10 µmol/mL；V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒；W：样本质量，g；T：催化反应时间，10 min注意事项：注意事项：1、甲苯有一定毒性，实验过程中需佩戴手套和口罩2、实验过程中须远离火源。