根际分泌物收集方法及测定.pdf

一、文献总结：根际分泌物收集方法： 土壤溶液原位取样法 优于根际土壤收集法 、溶液培法萃取剂： 二氯甲烷 优于乙酸乙酯、乙醚衍生化所用试剂：吡啶、BSTFA-TMCS （99:1）（N,O-双(三甲基硅烷基 ) 三氟乙酰胺 ,含 1% 三甲基氯硅烷）二、实验方法土壤处理：采集土壤（ 0-20cm）在室温下风干——研磨过40目筛（ 60 目），称取 3g 于（50ml 离心管）具塞三角瓶中，以1:10 比例加入蒸馏水， 30℃ 200r/min 震荡 1h，过滤即为根际分泌物粗提物，然后用30ml 二氯甲烷提取 2 次，再将二氯 甲烷提取液过 0.45 微米滤膜，取 1ml 于样品中，减压浓缩至干，加入吡啶和 （BSTFA-TMCS（99:1））各 100 微升在 70℃衍生化 30min6 小时 GC-MS 上机测定Detailed Procedures: 1. 采集 0-20cm土壤在室温下风干，研磨过40 目筛子2. 称取 2g 于 50ml 离心管中，以 1:10 比例加入蒸馏水 3. 在 30℃转速 200r/min 震荡 1h 4. 静置过滤，滤液即为根际分泌物粗提物，然后再过0.45μm 滤膜 5. 20mlCH2Cl2提取 2 次，提取液 旋转蒸发浓缩至 1ml，转移至1.5ml 样品瓶中，再旋转蒸发至干6. 加入吡啶 100μl进行溶解，再加BSTFA-TMC （99:1）100μl盖紧 盖子，在 70℃衍生化 30min。

7. 6 小时内 GC-MS上机测定原位收集：采用 Rhizon 土壤溶液采样器收集水稻根际分泌物，用30ml 二氯甲烷萃取根际分 泌物 30ml 二次，再将二氯甲烷提取液过0.45 微米滤膜，取 1ml 于样品中减压浓缩 至干，加入吡啶 100 微升进行溶解，再加（ BSTFA-TMCS（99:1 ））100 微升在 70℃ 衍生化 30min6 小时内 GC-MS 上机测定Detailed Procedures: 1. 取 20ml 根际土壤溶液于50ml 离心管中，过 0.45μm 滤膜2. 20mlCH2Cl2提取 2 次 3. 提取液过 旋转蒸发浓缩至 1ml 4. 转移至 1.5ml 样品瓶中，再旋转蒸发至干5. 加入吡啶 100μl进行溶解，再加BSTFA-TMCS（99:1）100μl拧紧 盖子，在 70℃衍生化 30min6. 6 小时内 GC-MS上机测定References Yu J Q, Matsui Y. Phytotoxic substances in root exudates of cucumber (Cucumissativus L.).[J]. Journal of Chemical Ecology, 1994, 20(1):21-31. 阮奕平 . 蔬菜连作障碍中自毒作用及其缓解措施研究[D]. 浙江大学 , 2013.杨先国 , 刘塔斯 , 陈斌 ,等. 丹参根际土壤浸提物的GC-MS分析 [J]. 中国农学通报, 2013, 29(10):173-177. 张汝民 , 张丹 , 陈宏伟 ,等. 梭梭幼苗根系分泌物提取方法的研究[J]. 干旱区资源与环境, 2007, 21(3):153-157. 姜海燕 , 袁秀英 , 樊石磊 . 胡杨根际土壤化感物质成分分析[J]. 内蒙古农业大学学报：自然科学版, 2011, 32(2):48-51. 赵瑞林 , 蔡立群 . 紫花苜蓿根系分泌物的鉴定及羟基苯甲酸的化感效应研究[J]. 中国农学通报, 2013(35):34-41. 吴蕾 . 大豆根系分泌物的鉴定及其化感作用的研究[D]. 东北农业大学, 2010. Tang C S, Young C C. Collection and Identification of Allelopathic Compounds from the Undisturbed Root System of BigaltaLimpograss (Hemarthriaaltissima).[J]. Plant Physiology, 1982, 69(1):155-160. 程智慧 , 徐鹏 . 百合根系分泌物的GC-MS 鉴定 [J]. 西北农林科技大学学报：自然科学版, 2012(9):202-208. 黄小芳 . 人参根系分泌物及其自毒活性研究[D]. 中国协和医科大学, 2009. 段剑 . 马尾松根系分泌物的化学组成及其化感作用研究[D]. 江西农业大学, 2014. 三、所需衍生化试剂资源试剂一： Sigma N,O-双(三甲基硅 )三氟乙酰胺 (含三甲基氯硅烷 ) （N,O- Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide）CAS 号： 25561-30-2 货号与规格： 5238-100ML 试剂二：Sigma吡啶（ pyridine ）CAS号 ：110-86-1 货号与规格： 33553-500ML 试剂三： 阿拉丁二氯甲烷（ Dichloromethane ）色谱纯CAS号: 75-09-2 货号与规格： D116146-4×4L梨型分液漏斗： 100ml X 9 个BSTFA-TMCS （99:1）别名 ( 英文 ) N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide with 1% Trimethylchlorosilane 中文名BSTFA-TMCS(99:1) [用于 GC 的衍生化试剂 ] 中文别名N,O-双( 三甲基硅烷基 ) 三氟乙酰胺 ,含 1% 三甲基氯硅烷。