色素测定指导原则.docx

色素测定指导原则 9303色素测定法指导原则 色素在药品辅料中一般为着色剂,部分药品根据剂型需要使用适宜的着色剂;但中药(包括中药材和中药饮片,下同)为天然物质,无需使用色素三辅料和制剂(标示使用着色剂)中应对其着色剂的种类及用量进行合理控制,保证辅料和药品的质量和安全三中药应防止使用色素,保证其安全性三 色素一般分为天然色素和人工合成色素三人工合成色素又可分为无机类色素和有机类色素三进行色素检测时应综合考虑色素的种类二理化性质及基质等情况,采用适宜的方法进行测定三 色素一般分为天然色素和人工合成色素三药品生产中色素的使用应符合国家药品管理部门的有关规定三中药(中药材和中药饮片,下同)不应使用色素三本指导原则为药品(中药二化药二辅料)中色素的检测提供指导三 基本原则 对于可以使用色素的辅料和制剂,应针对性地采用适宜的定性二定量方法进行质量控制三 辅料二化药二中药等的基质情况各不相同,色素测定时如需检测色素时应注意基质的影响,对不同基质应分别采用针对性的前处理方法三对于中药应对与其性状颜色相近的色素进行筛选,并准确地定性二定量三 色谱法可用于基质相对简单的样品,避免引起结果的假阳性和假阴性三中药本身常含有天然色素,且成分复杂,当色谱法有基质干扰时,应采用色谱-质谱联用法进行结果确认三 基本内容 一、定性测定方法 常用的定性测定方法包括薄层色谱法二高效液相色谱法二高效液相质谱联用法等三当薄层色谱法或高效液相色谱法结果有干扰时,应采用高效液相色谱-质谱联用法进行确认三 1.薄层色谱法 (1)对照品溶液的制备 应根据色素的理化性质,保持色素良好的溶解性和稳定性为原则,选择合适的溶剂并配制成合适的浓度三多种色素配制混合对照品溶液时,应注意合理分组,避免色素分解或相互发生反应三 如苏丹红Ⅰ二苏丹红Ⅱ二苏丹红Ⅲ二苏丹红Ⅳ二苏丹红G二分散红9二808猩红等脂溶性色素,可选用乙腈等作为溶剂三孔雀石绿二新品红二金胺O二罗丹明B二金橙Ⅰ二酸性黑Ⅰ二亮蓝G二亮蓝二羊毛绿二柠檬黄二日落黄二亮黄二金橙Ⅱ二酸性橙10二赤藓红二酸性红73二苋菜红二酸性红18二诱惑红二曙红等水溶性色素,可选用水作为溶剂三 (2)供试品溶液的制备 应考虑测定对象的基质情况和测定色素的理化特点,参考对照品溶液配制溶剂选用合适的溶剂,采用快速二简单二高效的前处理技术进行提取,必要时可进行净化处理,避免基质干扰三 如测定孔雀石绿二新品红二金胺O二罗丹明B等偏碱性水溶性色素,可采用0.1%甲酸甲醇溶液提取;测定金橙Ⅱ二赤藓红二酸性红73二苋菜红等偏酸性水溶性色素,可采用0.1%甲酸-甲醇(2?3)溶液提取三通过超声处理30分钟,离心后的上清液作为供试品溶液三 (3)薄层板和展开剂 可根据测定色素的数量和展开后的色谱效果,选择合适的普通或高效薄层板三应根据色素展开后,合理的R f值和与相邻斑点的分离度,选择合适的展开剂三 如苏丹红Ⅰ等脂溶性色素,采用环己烷-乙酸乙酯-氨水(80?20?1)的上层溶液为展开剂;孔雀石绿二金橙Ⅱ等水溶性色素,采用以乙酸乙酯-乙醇-水-氨水(6?4?2?0.5)的上层溶液为展开剂三 (4)检视方法 大多数色素可在日光下检视,必要时可在紫外光下进行检视三 (5)注意事项 在色素量较低或基质较为复杂的情况下,对薄层色谱法的定性,可能会出现假阴性或假阳性结果,对薄层色谱法的定性检测结果,应采用色谱-质谱联用法等方法进行确认三检测结果应注意排除假阴性或假阳性三 2.高效液相色谱法 (1)色谱条件与系统适用性试验 应根据色素的理化性质选择适宜的固定相和流动相,多种色素测定时可适当采用流动相梯度洗脱,达到良好分离效果三固定相常用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,可根据情况选择小粒径或柱长较长的色谱柱以提高分离度三 如测定苏丹红Ⅰ等脂溶性色素时,以甲醇为流动相A, 0.1%甲酸溶液为流动相B,以下列梯度洗脱:0~12分钟, A:80%?101%;12~20分钟,A:101%三测定孔雀石绿等偏碱性水溶性色素时,以下列梯度洗脱:0~27分钟,A: 40%?73%;27~27.1分钟,A:73%?95%;27.1~32分钟,A:95%三测定金橙Ⅱ等偏酸性水溶性色素时,以甲醇为流动相A,20m m o l/L乙酸铵为流动相B,以下列梯度洗脱:0~7分钟,A:5%?45%;7~17分钟,A:45%?50%;17~20分钟,A:50%?65%;20~30分钟,A: 65%?95%;30~32分钟,A:95%三 应根据各色素在紫外-可见光区的最大吸收波长选择适合的检测波长三如黄二橙二红二蓝绿色素系列建议分别选在400n m二440n m二520n m二610n m波长附近作为检测波长三为增加定性结果的可靠性,应根据色素具体情况同时采集对照品与供试品不同波段的紫外-可见吸收光谱进行比较其是否一致三 四873四 9303色素测定法指导原则 色素在药品辅料中一般为着色剂,部分药品根据剂型需要使用适宜的着色剂;但中药(包括中药材和中药饮片,下同)为天然物质,无需使用色素三辅料和制剂(标示使用着色剂)中应对其着色剂的种类及用量进行合理控制,保证辅料和药品的质量和安全三中药应防止使用色素,保证其安全性三 色素一般分为天然色素和人工合成色素三人工合成色素又可分为无机类色素和有机类色素三进行色素检测时应综合考虑色素的种类二理化性质及基质等情况,采用适宜的方法进行测定三 色素一般分为天然色素和人工合成色素三药品生产中色素的使用应符合国家药品管理部门的有关规定三中药(中药材和中药饮片,下同)不应使用色素三本指导原则为药品(中药二化药二辅料)中色素的检测提供指导三 基本原则 对于可以使用色素的辅料和制剂,应针对性地采用适宜的定性二定量方法进行质量控制三 辅料二化药二中药等的基质情况各不相同,色素测定时如需检测色素时应注意基质的影响,对不同基质应分别采用针对性的前处理方法三对于中药应对与其性状颜色相近的色素进行筛选,并准确地定性二定量三 色谱法可用于基质相对简单的样品,避免引起结果的假阳性和假阴性三中药本身常含有天然色素,且成分复杂,当色谱法有基质干扰时,应采用色谱-质谱联用法进行结果确认三 基本内容 一、定性测定方法 常用的定性测定方法包括薄层色谱法二高效液相色谱法二高效液相质谱联用法等三当薄层色谱法或高效液相色谱法结果有干扰时,应采用高效液相色谱-质谱联用法进行确认三 1.薄层色谱法 (1)对照品溶液的制备 应根据色素的理化性质,保持色素良好的溶解性和稳定性为原则,选择合适的溶剂并配制成合适的浓度三多种色素配制混合对照品溶液时,应注意合理分组,避免色素分解或相互发生反应三 如苏丹红Ⅰ二苏丹红Ⅱ二苏丹红Ⅲ二苏丹红Ⅳ二苏丹红G二分散红9二808猩红等脂溶性色素,可选用乙腈等作为溶剂三孔雀石绿二新品红二金胺O二罗丹明B二金橙Ⅰ二酸性黑Ⅰ二亮蓝G二亮蓝二羊毛绿二柠檬黄二日落黄二亮黄二金橙Ⅱ二酸性橙10二赤藓红二酸性红73二苋菜红二酸性红18二诱惑红二曙红等水溶性色素,可选用水作为溶剂三 (2)供试品溶液的制备 应考虑测定对象的基质情况和测定色素的理化特点,参考对照品溶液配制溶剂选用合适的溶剂,采用快速二简单二高效的前处理技术进行提取,必要时可进行净化处理,避免基质干扰三 如测定孔雀石绿二新品红二金胺O二罗丹明B等偏碱性水溶性色素,可采用0.1%甲酸甲醇溶液提取;测定金橙Ⅱ二赤藓红二酸性红73二苋菜红等偏酸性水溶性色素,可采用0.1%甲酸-甲醇(2?3)溶液提取三通过超声处理30分钟,离心后的上清液作为供试品溶液三 (3)薄层板和展开剂 可根据测定色素的数量和展开后的色谱效果,选择合适的普通或高效薄层板三应根据色素展开后,合理的R f值和与相邻斑点的分离度,选择合适的展开剂三 如苏丹红Ⅰ等脂溶性色素,采用环己烷-乙酸乙酯-氨水(80?20?1)的上层溶液为展开剂;孔雀石绿二金橙Ⅱ等水溶性色素,采用以乙酸乙酯-乙醇-水-氨水(6?4?2?0.5)的上层溶液为展开剂三 (4)检视方法 大多数色素可在日光下检视,必要时可在紫外光下进行检视三 (5)注意事项 在色素量较低或基质较为复杂的情况下,对薄层色谱法的定性,可能会出现假阴性或假阳性结果,对薄层色谱法的定性检测结果,应采用色谱-质谱联用法等方法进行确认三检测结果应注意排除假阴性或假阳性三 2.高效液相色谱法 (1)色谱条件与系统适用性试验 应根据色素的理化性质选择适宜的固定相和流动相,多种色素测定时可适当采用流动相梯度洗脱,达到良好分离效果三固定相常用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,可根据情况选择小粒径或柱长较长的色谱柱以提高分离度三 如测定苏丹红Ⅰ等脂溶性色素时,以甲醇为流动相A, 0.1%甲酸溶液为流动相B,以下列梯度洗脱:0~12分钟, A:80%?101%;12~20分钟,A:101%三测定孔雀石绿等偏碱性水溶性色素时,以下列梯度洗脱:0~27分钟,A: 40%?73%;27~27.1分钟,A:73%?95%;27.1~32分钟,A:95%三测定金橙Ⅱ等偏酸性水溶性色素时,以甲醇为流动相A,20m m o l/L乙酸铵为流动相B,以下列梯度洗脱:0~7分钟,A:5%?45%;7~17分钟,A:45%?50%;17~20分钟,A:50%?65%;20~30分钟,A: 65%?95%;30~32分钟,A:95%三 应根据各色素在紫外-可见光区的最大吸收波长选择适合的检测波长三如黄二橙二红二蓝绿色素系列建议分别选在400n m二440n m二520n m二610n m波长附近作为检测波长三为增加定性结果的可靠性,应根据色素具体情况同时采集对照品与供试品不同波段的紫外-可见吸收光谱进行比较其是否一致三 四873四 。