油脂中的苯并a芘测定(正己烷).doc

Add: 6th Floor, Incubator Centre, No.12 Taihua Road, 5th Street, TEDA,Tianjin 300457, China.Tel: +8622-25321032/7023*203 Fax: +8622-25321033地址：中国天津开发区第 5 大街泰华路 12 号创业中心 6 层，300457 ：022-25321032/7023 ：022- /Service Hotline: 400-606-8099/service@油脂中苯并（a）芘的高效液相色谱法检测本方法参考 GBT 22509-2008 国标方法：动植物油脂 苯并（a）芘的测定 反相高效液相色谱法相关技术差异为：①对仪器设备作了改动；②氧化铝层析柱采用商品化 Cleanert BaP 固相萃取柱；③将洗脱溶剂改为采用色谱纯的正己烷；④待测液定容体积改为 300µL，采用仪器自动进样，进样量为 20µL；⑤采用外标法定量计算一、实验原理用正己烷溶解油脂样品，上样到 CleanertBaP 固相萃取柱，去除脂肪酸等，再用正己烷洗脱苯并（a）芘，采用反相高效液相色谱法分离，荧光检测器检测。

二、试剂与材料2.1CleanertBaP 固相萃取柱，22g/60mL（P/N: BaP2260）：100-200 目，brockmann 活度 Ⅳ级，在室温下避光保存，天津博纳艾杰尔科技有限公司；Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm×5.0µm（P/N：VS952505-0）2.2 色谱纯正己烷；2.3 苯并（ a）芘标准储备液：称取 10mg 标准品于 10mL 容量瓶中，用正己烷定容，配制的标准储备液浓度为 1000mg/L；3.4 标准工作液：用正己烷稀释标准储备液，稀释的浓度为 10µg/L三、仪器和设备3.1 旋转蒸发仪，大于 150mL 的鸡心瓶或圆底旋蒸瓶；3.2 氮吹仪；3.3 涡旋混合器；3.4 2ml 进样瓶；Add: 6th Floor, Incubator Centre, No.12 Taihua Road, 5th Street, TEDA,Tianjin 300457, China.Tel: +8622-25321032/7023*203 Fax: +8622-25321033地址：中国天津开发区第 5 大街泰华路 12 号创业中心 6 层，300457 ：022-25321032/7023 ：022- /Service Hotline: 400-606-8099/service@3.5 250µL 进样瓶玻璃内插管；3.6 高效液相色谱仪，配自动进样器，荧光检测器。

四、样品前处理4.1 称取约 0.300g 的油样，用 5mL 正己烷溶解涡旋混合器上充分混匀4.2 活化：用约 30mL 正己烷将氧化铝柱预先活化，活化过程直到氧化铝柱末端正己烷自然滴下约 5mL 为止在正己烷滴出的过程中，柱体上部要不断添加正己烷，千万注意不能让正己烷低于柱子的上筛板，避免空气进入柱子！将滴出的约 5mL 正己烷去除，不予收集4.3 上样：将溶解好的油样添加到预活化好的氧化铝柱子中，注意操作过程中上筛板不能干涸4.4 洗脱：添加 80mL 正己烷，用 150mL 的旋蒸瓶接收，直到 80mL 的正己烷完全自然滴出如果苯并芘回收率不高，可以增加正己烷的洗脱体积，最多可至 120mL操作过程中不需要加压或抽真空加快流速，让正己烷在重力作用下自然洗脱4.5 将洗脱液在 45℃水浴中旋转蒸发至干，如果仍然有油滴无法蒸干，说明净化不完全，需要向油滴中添加 80mL 的正己烷制得新样，取一根新柱重复上述净化过程；4.6 用总计 10mL 的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮气吹干添加 300µL 的正己烷到氮吹管中，在涡旋混合器上充分混匀注意氮吹过程避免气流过大，造成液体溅出；涡旋过程避免正己烷蒸发。

4.7 将上述 300µL 的正己烷转移至 2mL 进样瓶内插管中，进样分析五、色谱条件色谱柱：Venusil ASB-C18，250mm×4.6mm，5.0µm；流动相:乙腈：水 =88：12；流速：1.0mL/min；进样量：20µL；Add: 6th Floor, Incubator Centre, No.12 Taihua Road, 5th Street, TEDA,Tianjin 300457, China.Tel: +8622-25321032/7023*203 Fax: +8622-25321033地址：中国天津开发区第 5 大街泰华路 12 号创业中心 6 层，300457 ：022-25321032/7023 ：022- /Service Hotline: 400-606-8099/service@荧光检测器：发射波长 406nm，激发波长 384nm六、实验结果和讨论：6.1 结果：本方法的采用 Cleanert BaP 固相萃取柱用于某植物油苯并（a）芘的净化处理于 5ug/kg 添加水平可获得 99.49%回收率，采用 Venusil ASB-C18 所得到的图谱见图 1～3。

图 1、 5µg/L 苯并（a）芘的标准样品的色谱图图 2、某植物油的实际样品色谱图Add: 6th Floor, Incubator Centre, No.12 Taihua Road, 5th Street, TEDA,Tianjin 300457, China.Tel: +8622-25321032/7023*203 Fax: +8622-25321033地址：中国天津开发区第 5 大街泰华路 12 号创业中心 6 层，300457 ：022-25321032/7023 ：022- /Service Hotline: 400-606-8099/service@图 3、某植物油加标量为 5µg/Kg 的标准样品色谱图表 1、苯并芘的回收率5µg/L 标准品 油脂实际样品 油脂加标样品 回收率苯并（a）芘响应值242.225 238.02 479.001 99.49%6.2 讨论：6.2.1 本方法采用商品化的 Cleanert BaP 固相萃取柱，避免了原国标方法中人工处理填料和装填的繁琐过程，可大大节省工作时间，提高工作效率；同时商品化的 Cleanert BaP 固相萃取柱避免了原方法中人为装填过程的误差和由此可能导致的结果不稳定性，因此具有更佳的回收率和重现性；Cleanert BaP 固相萃取柱配合 Venusil ASB-C18 色谱柱优异的表现，可满足动植物油脂 苯并（a）芘的检测的需求，保证结果的准确性和稳定性，同时大大提高工作效率！6.2.2 由于实验者没有专用 PAH 的色谱柱，本方法采用了 Venusil ASB C18 柱来分析，该柱基本能满足分析要求。

但是若采用 Venusil PAH 专用柱，分离效果会更好将 Venusil PAH 分析的谱图补充如下Add: 6th Floor, Incubator Centre, No.12 Taihua Road, 5th Street, TEDA,Tianjin 300457, China.Tel: +8622-25321032/7023*203 Fax: +8622-25321033地址：中国天津开发区第 5 大街泰华路 12 号创业中心 6 层，300457 ：022-25321032/7023 ：022- /Service Hotline: 400-606-8099/service@min0 2 4 6 8 10 12 14 16Norm.27.427.627.82828.228.428.628.8FLD1 A, Ex=384, Em=406 (BAP\01091806.D)Area: 49.2436 1.563图四、10µg/L 的苯并 a 芘标准品在 PAH 专用柱上分析的色谱图6.2.3 油脂的取样量不宜超过 0.3g，否则容易造成净化不完全的现象。

6.2.4 最后定容体积为 300µL，避免了国标里的定容体积（ 100µL）过小，不便于操作的问题6.2.5 所用正己烷可以换成石油醚，但是试剂必须经过重蒸或者直接使用进口品牌的色谱纯试剂6.2.6 最后定容所用的溶剂可以采用国标中所用的乙腈：四氢呋喃（90：10） ，最好使标准工作溶液和样品定容溶液所用的试剂保持一致。