核苷酸切除修复交叉互补基因1在结直肠癌中表达及其意义.doc

核昔酸切除修复交叉互补基因1在结直肠癌中表达及其意义作者：朱娟，肖菊香，张彦兵，王妍华，常浩，吴俊 兰，张磊，王乐【摘要】目的：探讨核昔酸切除修复交错互补基因l(ERCCl)在人结直肠癌中的表达水平，分析其与钳类药物 化疗敏感性及生存时间的关系.方法：以西安交通大学第一 附属医院行结直肠癌根治术患者45例和剖腹探查术患者18 例的标本为材料，采用免疫组织化学Elivision法检测其 ERCC1表达水平.其中40例复发、转移及晚期患者行草酸铀 为基础方案化疗.所有入组患者随访6年.结果：肿瘤组织 中ERCC1的阳性率为52.08%，低于对照组.病理分级与 ERCC1的阳性率之间有关(P=0.040),病理分级越高，ERCC1 阳性率越低，表达强度越弱.ERCC1阴性者钳类药物化疗有 效率为60. 00%(12/20),而阳性者则为25. 00%(5/20),二者 之间具有统计学差异(P=0. 025)； Cox回归分析显示ERCC1 表达为结直肠癌患者独立预后因子(P=0.048).结论： ERCC1表达可作为预测结直肠癌患者对钳类药物敏感性及预 后判断的指标之一.【关键词】结直肠肿瘤；核昔酸切除修复交叉互补基因1;免疫组织化学；耐药；草酸餡[Abstract】 AIM： To explore the excision repair cross complementing 1 (ERCC1) expression level in human colorectai carcinoma, and analyze its relationship with the sensitivity of the platinum drugs and its prognosis・ METHODS： Sixty three archived samples of the patients with colorectai carcinoma were detected by immunohistochemical staining (Elivision). Forty five patients underwent radical surgical treatment and 18 patients exploratory laparotomy. All patients were followed up for 6 years after the operation・ Forty advanced cases with recurrence and metastasis received oxaliplatin based chemotherapy. RESULTS： In these 63 patients, the positive expression rate of ERCClwas 52. 08%, significantly lower than that in the control group・ The positivity rate was correlated with colorectai cancer histologic grade (P=0.040). The histologic grade higher, the positive rate of ERCC1 lower, the expression intensity weaker・ In using oxaliplatin cases, the response rate of the ERCC1 negative group was 60. 00% (12/20), that of the ERCC1 positive group was 25.00% (5/20). There was significant correlation between the expression of ERCC1 and the efficacy of chemotherapy (P=0.025)・ The ERCC1 was an independent prognostic factor of colorectal cancer by the COX regression analysis (P=0.048). CONCLUSION： ERCC1 expression might be one of the prediction markers of the drug sensitivity of the platinum drugs and of prognosis in colorectai cancer.【Keywords ］ colorectal neoplasms； ERCC1； immunohistoche mistry； resistance； oxaliplatin0引言DNA修复异常与肿瘤发生、肿瘤多药耐药性［1］均有 密切联系.其中核昔酸切除修复系统(nucleotide excision repair, NER)是机体抵抗致癌效应的主要防御机制，也是修 复化疗药物所致DNA损伤的主要机制.核昔酸切除修复交错 互补基因 1 (excision repair cross complementing 1, ERCCl)是NER的限速酶，起着损伤部位的识别和DNA链 5, -3,核酸内切酶的作用，与多种肿瘤发生及钳类药物耐 药有关系.以铀类药物为基础的联合化疗是结直肠癌综合 治疗的重要手段之一，耐药是导致患者治疗失败的主要原因. 我们通过检测结直肠癌石蜡包埋组织中ERCC1的表达，分析 其与临床生物学特点及钳类药物化疗效果的关系，探讨 ERCC1在结直肠癌发生中的意义，并提供一个可逆转耐药的 指标.1对象和方法1. 1对象选取2000 03/2001 03在西安交通大学第一附属医院行结直肠癌根治术患者45例和剖腹探察并减瘤术者18 例，共63（男36,女27）例，年龄205（平均54. 56）岁.部 位：结肠27例,直肠36例.TNM分期：I期4例，II期20 例，III期21例，IV期18例.II期及以上期别临床资料完整 的患者59例术后均给予化疗.辅助化疗患者41例均采用含 5 Fu/CF 方案（5 Fu 425 mg/m2, iv,第 1 〜5 日+CF 200 mg/m2, iv,第「5日），其中有24例复发转移后进行了含草酸钳的 FULF0X4 方案治疗（Oxaliplatin 85 mg/m2 静脉滴注，2 h, 第 1 日；CF 200 mg/m2, iv, 2 h,第 1, 2 日；5 Fu 400 mg/m2 推注，然后600 mg/m2持续静脉滴注22 h,第1,2日）.18 例晚期患者采用上述FULFOX4方案化疗16例，5 Fu/CF方 案2例.疗程3〜6周期，平均疗程4. 75周期.对有可测量 病灶者采用WHO统一标准进行疗效评价，观察生存期，若末 次随访仍然存活则定为截尾值.随访至2007 05,随访率为 98%,其中死亡42例.收集同期行肠镜检查病理诊断为正常 的结直肠黏膜标本10例，作为正常对照；结直肠癌标本中 非癌组织的部分10例，作为癌旁组织对照.1. 2方法1.2. 1免疫组化检测ERCC1的表达取上述库存蜡块切 成5 um厚切片，常规脱蜡至水，用免疫染色Elivision法, DAB显色进行ERCC1相关抗原的免疫组化染色.试验中一抗 为1 ： 100稀释的小鼠抗ERCC1单克隆抗体，二抗为即用型 第二代免疫组化Elivision TM加光谱试剂盒，均购自福州 迈新生物技术开发公司.以福州迈新生物技术开发公司提 供的阳性对照片作为阳性对照；以PBS缓冲液代替一抗作为 阴性对照.1. 2. 2结果判定本实验结果判断标准参照Fromowitz等［2］综合计分法，由阳性着色细胞所占百分数与细胞着 色强度二者结合起来计算.阳性细胞百分数为10个视野阳 性细胞的平均数占这10个视野中细胞数的百分比：<；5% 计0分；5%~25%计1分；26%~50%计2分；51%〜75%计3分；>；75%计4分.细胞着色强度：不着色计0分；淡黄色计1 分；棕黄色计2分；棕褐色计3分.二者积分相加：0~1分 为阴性，2分为阳性.统计学处理：用SPSS 13.0统计软件包行 Chi Square检验，Kaplan Meier比较生存曲线，并经 log rank检验，P<； 0. 05为差异有统计学意义.2结果2. 1ERCC1的表达ERCC1主要分布于肿瘤细胞胞核中， 色黄，分布均匀，颗粒细（图1）;某些细胞质中也有表达（图 2）,集中于核膜周围.人结直肠癌组织中ERCC1阳性率为 52. 38%；癌旁组织中阳性率为80. 00%；正常结直肠粘膜组织 中阳性率为90. 00%.经统计学分析，癌组织与癌旁组织、正 常组织中ERCC1的阳性率有差异（P值分别为0. 017, 0. 014）； 正常组织与癌旁组织无显著性差异（P=0.523）.癌组织中 ERCC1低水平表达.2. 2ERCC1与结直肠癌患者生物学特点的关系63例结直肠癌标本中，病理学分级为I级者11例， 阳性率81.81%； II级者34例,阳性率52.94%； III级者18 例，阳性率33. 33%.经统计学分析，病理分级与ERCC1表 达之间有关（P=o. 040）.病理分级越高，ERCC1阳性率越低, 表达强度越弱.ERCC1表达与性别、年龄、部位、分期无关 （表1）.表1ERCC1表达与结直肠癌生物学特点的关系（）2. 3ERCC1的表达与化疗疗效之间的关系59例化疗患者中可评价疗效者42例.其中草酸铠组 40例，总有效率为42. 50% （17/40）； ERCC1阴性者化疗有 效率为60. 00%（12/20）,阳性者有效率为25. 00%（5/20）.二 者之间具有统计学差异（x 2=5. 013, P二0.025）, ERCC1阴性 者化疗有效率高于阳性者.2. 4ERCC1表达水平与预后的关系ERCC1表达阳性与阴性患者的生存曲线分析显示 ERCC1阴性患者5 a生存率为53. 33%, ERCC1阳性患者为 27.27%,具有统计学差异（x 2=4. 459, P=0. 035）. Cox 回归 分析显示ERCC1表达（P二0.048）为结直肠癌患者独立的预 后因子（图3）.3讨论NER系统是DNA最主要的修复机制，其功能异常在多 种肿瘤的发生、发展过程中起重要作用［3］ . ERCC1在NER 系统中起着损伤识别和核酸内切酶的双重功能，其表达水平 可以代表NER系统的活性.ERCC1基因是利用对紫外线敏感 的中国仓鼠细胞（CH0）和人类瘤细胞株进行细胞融合和互 补试验而克隆出的一种与紫外线敏感的突变型鼠细胞互补 的人类修复基因，定位于染色体19ql3. 2,共有四种分子量 的mRNA,但只有111 kb的mRNA表达出Mr为33 000~36 000 的蛋白时，才表现其功能.根据Ted等［4］的文献报道， ERCC1基因属于肿瘤抑制基因中的看家（caretakers）基因 的一种.文献报道在卵巢癌的研究中发现恶性程度更高的透 明细胞癌中ERCC1表达比其他病理类型表达更加低下，说明 7 ERCC1的表达与细胞分化程度有关系，分化程度越差，修 复功能越低下［5］ . Saeb等［6］对156例结肠癌患者组 织和399例正常者进行对照后发现，二者之间ERCC1的表达 存在差异（P=0. Oil） . Kwon等［7］通过免疫组化法检测 64例进展期胃癌患者组织中ERCC1, TS和GSTP1的表达，发 现ERCC1阳性对FULFOX方案化疗的敏感性显著低于阴性患 者（P=0. 045）.逮晓波等［8］通过构建。