
中人氟安对裸鼠腹腔化疗安全性的实验研究.doc
7页中人氟安对裸鼠腹腔化疗安全性的实验研究1.新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科乌兽木齐830011; 2.新疆医科大学附 属肿瘤医院肺内一科乌魯木齐830011【摘要】目的:探讨不同剂量氟尿嘧啶楨入剂(中人氟安,Sinofuan)治疗 裸鼠恶性腹腔积液的有效性及安全性方法:采用人胃癌MKN-45细胞株建立裸 鼠腹膜移植瘤模型,32只成瘤裸鼠随机分为4组,即赋型剂对照组、氟尿嘧啶 植入剂低剂量组(2mg/只)、中剂量组(4mg/只)和高剂量组(6mg/只)严密 观察各组裸鼠的一般状态、体重变化和生存期,测量腹水体积,显微镜下计数每 毫升腹水中的肿瘤细胞数结果:与对照组相比,氟尿啼啶植入剂低剂量组(2mg/ 只)状态良好,体重增长缓慢,全身症状出现较晚,生存期延长(26天vs 19 天,P = 0.020);中剂量组于给药第2天死亡一只,高剂量组于给药后6天内全 部死亡氟尿嘧啶植入剂低剂量组的腹水体积少于对照组〔(5.961.26) ml vs (10.961.21) ml), P =0.000);每毫升腹水中的肿瘤细胞数也少于 对照组〔(2.750.57) ×108•ml-l vs (4.210.75) ×108•ml-l,P =0.034)。
结论:低剂量(2mg/只)的氟尿喃卩定植入剂 对于裸鼠MKN-45腹膜移植瘤的形成具有良好的抑制作用,可以延长腹膜移植瘤 裸鼠的生存期,且安全性好裸鼠对中剂量(4mg/只)和高剂量(6mg/只)的 氟尿嘧啶植入剂耐受性差因此,氟尿嘧啶植入剂用于裸鼠腹腔化疗的安全剂量 推荐给予低剂量即2mg/只关键词】氟尿嘧啶植入剂/中人氟安;胃癌;裸鼠;腹水[Abstract] Objective To investigate the effect of sustained-release fluorouracil(Sinofuan) injected in MKN-45 ascitic tumor of nude mice.Methods 32 nude mice peritoneal transplanted with MKN-45 cells were randomly divided into 4 groups: control group, low-dose (2mg/nude mouse), medium-dose (4mg/nude mouse) and high-dose(6mg/nude mouse) sustained-release fluorouracil groups.The general state of the nude mice,body mass changes and survival was observed.Ascitesvolume was measured.The number of tumor cells per milliliter of ascites wascounted.Results Compared with the control group, the general state of nude mice from low-dose (2mg/nude mouse) fluorouracil injection group were better with slower weight gain,delayed systemic symptoms and prolonged survival (median survival: 26 days vs 17 days,P <0.05),one nude mouse from medium-dose group died on the second day after intraperitoneal chemotherapy,all nude mice from medium-dose group died within 6 days of the intraperitoneal chemotherapy.Ascitesvolume and ascetic tumor cells per milliliter of the low-dose sustained-release fluorouracil group were less than the control group[ (5.961.26) ml vs(10.961.21) ml], P=0.000; (2.750.57) ×108•ml-l vs (4.210.75) ×108•ml-l, P =0.034].Conclusion Low dose(2mg/nude mouse) sustained-release fluorouracil in intraperitoneal chemotherapy shows a good effect and safety in the treatment of MKN-45 ascitic tumor of nude mice.lt suggests that only low dose i.e.2mg/nude mouse should be applied when intraperitoneal chemotherapy is undergone in nude mice.[Key Words] Sustained-release fluorouracil/Sinofuan; Gastric cancer; Nude mice; Malignant ascites腹腔播散、癌性腹水是消化系统肿瘤常见的转移方式,往往预后差,且 严重的影响着患者的生活质量。
5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil, 5-FU)是最主要的 消化系统肿瘤的腹腔化疗药物,但其半衰期短,毒副作用较大,中人氟安为5- 氟尿嘧啶的缓释剂型,腹腔给药后药代动力学优势明显[1]本文通过建立胃癌 腹腔播散的动物实验模型,并在此模型中给予不同剂量的氟尿嘧啶植入剂(中人 氟安,Sinofuan),观察其对MKN-45裸鼠腹膜移植瘤的作用,并探讨中人氟安用 于裸鼠腹膜移植瘤腹腔化疗的最佳剂量,为进一步开展中人氟安在裸鼠肿瘤模型 中的研究提供实验基础1材料与方法 1.1细胞株和实验动物BALB/c (nu/nu)裸鼠 32 只,鼠龄 4〜5 周,体重(192) g, 雌性,购自斯莱克实验动物公司,饲养于SPF级环境中MKN-45细胞株由新疆 肿瘤防治研宄所提供1.2主要药物和试剂及仪器氟尿嘧啶植入剂(商品名:中人氟安,每粒约含2mg5-FU)及赋形剂 对照品(芜湖先声中人药业有限公司)、胎牛血清(以色列Biological Industries 公司)、胰蛋白酶(以色列 Biological Industries 公司)、RPMI-1640C 以色列 Biological Industries 公司)。
1.3低分化高转移性人胃腺癌细胞系MKN-45裸鼠腹膜移植瘤模型的 建立MKN-45细胞复苏后,以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养,胰酶消化传 代后,取对数生长期的细胞,经胰酶消化后,SOOrpm, 3min离心后,以0.9%氯 化钠注射液重悬,SOOrpm, 3min离心洗涤两次后,以0.9%氯化钠注射液调整活 细胞浓度为4×106•mL-l,每只裸鼠腹腔注身寸0.5ml (含2×106 个)MKN-45细胞悬液,以此作为实验第1天1.4实验分组和给药方法于MKN-45细胞腹腔接种第4天开始给予干预措施裸鼠按体重由小至 大编号1-32,随机数字法分为4组:即赋型剂对照组、氟尿嘧啶植入剂低剂量组 (2mg/只)、中剂量组(4mg/只)和高剂量组(6mg/只)每组8只(3只用于 检测,另5只用于生存期观察)氟尿嘧啶植入剂及赋形剂以植入针给药对照 组每只裸鼠植入赋形剂1粒氟尿嘧啶植入剂低剂量组:每只裸鼠腹腔植入中人 氟安1粒(含5-氟尿嘧陡约2mg);相应地,低剂量组:2粒/只;高剂量组:3 粒川1.5检湖指标和检测方法1.5.1裸鼠腹水体积和肿瘤细胞数的计数中剂量组裸鼠于给药第2 天(实验第6天)死亡一只,且腹泻、纳差、消瘦等不良反应明显,至实验第 13天时仅余3只存活;高剂量组于给药后6天内(实验第10天)全部死亡,故中剂量组及高剂量组未进行此步骤实验。
对照组及低剂量组裸鼠于接种后第13 天以断髓法随机处死各组中的3只无菌条件下开腹,收集腹水,计算体积每 份标本取200ul用4CPBS稀释10倍,按血细胞计数法记录每毫升腹水中的肿瘤 细胞数1.5.2 —般情况及生存期观察对照组及低剂量组另5只裸鼠及中、高剂 量组全部8 H裸鼠在实验期间,每日观察裸鼠饮食、化疗毒副反应,隔日记录体 重、腹围变化至化疗组全部裸鼠死亡,绘制小鼠体重变化曲线记录各组小鼠的 生存吋间1.6统计学方法采用SPSS 20.0软件计量资料正态分布用±s表示,组间比较 采用t检验;用Kaplan-Meier法比较生存率的差异检验水准α=0.05,以P <0.05为差异冇统计学意义2结果2.1各组裸鼠的生活状态、体重变化和生存期接种后第1〜4天四组 裸鼠的体重随腹水的增多呈快速增加,但一般状态尚可,与对照组相比,给药后 氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠体重增加较平缓,中剂量组因严重腹泻体重下降明 显对照组裸鼠于第6天后逐渐表现为精神萎靡不振、活动减少,进食 进水减少,晚期腹部膨隆明显,并呈恶液质状态,至第14天对照组裸鼠开始死 亡,第21天全部死亡与对照组相比,氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠的一般状 态良好,腹水生长缓慢,全身症状出现较晚,第17天开始死亡,直至第29天全 部死亡。
中剂量组于第6天死亡一只,至第16天全部死亡,且腹泻、纳差、消 瘦等不良反应明显,高剂量组于10天内全部死亡,腹泻、纳差、消瘦等不良反 应更为明显,四组裸鼠的生存曲线见图2与氟尿嘧啶植入剂低剂量组相比,中剂量组和高剂量组裸鼠出现化疗相 关毒副反应(主要观察指标为腹泻、体重减轻)更为明显,腹泻持续吋间长,且 大多数裸鼠不能耐受中高剂量的氟尿嘧啶植入剂对照组和氟尿嘧啶植入剂低剂量组裸鼠的中位生存期分别为18和26天P=0.000)o 见表 1注:与对照组比较,a t=14.68 P =0.000; bt=3.18, P=0.0343讨论消化系统肿瘤如胃癌、肝癌、结直肠癌是全世界最常见的恶性肿瘤[2], 严重威胁着人们的健康和生命在我国,胃癌、肝癌、结直肠癌的发病率和死亡 率也高居恶性肿瘤之前列[3】,且我国新发的消化系统恶性肿瘤患者中,早期者 比例较低[4],人多数患者就诊吋病期较晚晚期消化系统恶性肿瘤患者中,腹 腔种植转移并不少见,很多患者出现癌性腹水,其预后往往较不伴腹膜转移的IV 期患者更差[5, 6】,且因常合并消化道、泌尿系或胆道梗阻,患者生活质量很差 对于腹膜转移或伴癌性腹水的IV期患者,0前常用的治疗包括全身化疗、热疗、 免疫治疗、手术等治疗方式效果均欠理想[5】。
而腹腔化疗因药物浓度局部高, 血药浓度低,从而全身副反应轻,在临床中应用较多,是0前消化系统恶性肿瘤 腹膜转移及恶性腹水的重要治疗方法5-氟尿嘧啶是最常用的尿嘧啶抗代谢药,是胃肠道肿瘤化疗中最为经典 且研宄得最多的化疗药物,包括术中腹腔局部化疗及癌性腹水的腹腔内化疗但 5-氟尿嘧啶半衰期短,在血浆。












