蒽酮比色法3页.doc

蒽酮比色法，具体步骤 一、仪器、试剂和材料 1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 g/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中当日配制使用3.材料：甜高粱，甘草 二.操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（mL） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（mL） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（g） 0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值以标准葡萄糖含量（g）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 C烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。

3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液以下操作同标准曲线制作根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（g） 三、结果处理： C V总 D样品含糖量（%）= ————————————— 100% W V测 106其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（g），V总——提取液总体积（mL），V测——测定时取用体积（mL），D——稀释倍数，W——样品重量（g），106——样品重量单位由g换算成g的倍数。