实验三-粉防己生物碱的提取分离与鉴定.doc

实验三 粉防己生物碱的提取分离与鉴定1 实验目的1.1 生物碱的一般提取方法1.2 用低压柱层析分离，纯化单体的方法及薄层层析鉴定2 实验原理2.1 生物碱大都能溶于氯仿、甲醇、乙醇等有机溶剂，除季铵碱和一些分子量较低或含极性基团较多的生物碱外，一般均不溶或难溶于水，而生物碱与酸结合成盐时则易溶于水和醇基于这种特性，可用不同的溶剂将生物碱从中药中提取常用的提取方法包括有溶剂提取法、直接提取法（水溶性生物碱、季铵碱）、离子交换树脂法（如麦角新碱类、东莨菪碱、咖啡因等）和沉淀法2.2 一种植物中往往含有几种或几十种生物碱 因此，提取出来的总生物碱还需进一步分离，去除杂质、排除干扰物，保证 分析 结果的准确性 一般纯化的方法可析出结晶的生物碱用重结晶法；挥发性生物碱可用水蒸气蒸馏法；易升华的生物碱用升华法提取得到单体由不同沸点组成的液体生物碱总碱，往往可通过常压或减压分馏分离如毒芹中的毒芹碱和羟基毒芹碱，石榴皮中的伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱等都可通过减压分馏法分离出来许多生物碱的盐比游离碱更易于结晶因此，可利用其在各种溶剂中的不同溶解度进行分离，之后再转变成游离碱3 实验材料材料：汉防己 4 实验步骤4.1 生物碱的提取分离4.1.1 总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离注一：将汉防已粗粉加适量酸水液，以能将生药粉末润湿为度（约150ml），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约1.5ml/分。

注二：净砂必须事前洗净烘干，拌和量最好不要超过120g，以免索氏提取器一次装不下或装得过多提不尽生物碱注三：检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加5%HCl 0.5ml溶解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出或明显浑浊时，表明生物碱已提尽，或基本提尽反之，应继续提取注四：先将提取器内滤纸筒取出然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾出（另器贮存），再将提取玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶中乙醚于玻筒中，至烧瓶内的乙醚提取液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出4.1.2 低压柱层析分离汉防已甲素和乙素低压柱层析在低压下（0.5~3kg/cm2，一般0.3~1.2 kg/cm2）采用颗粒直径介于经典柱层析（100~200μm）和HPLC（~37μm）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或G（50~75μm）作为填充剂的一种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLC之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法适宜和于天然产物的常量制备性分离。

装柱 减压干法装法，层析柱规格：柱长30cm，内径2cm，共装硅胶约30g（高约22cm）拌样加样 取汉防已碱约150mg，加少量丙酮热溶（刚溶为度）用滴管加到1.5g硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表面平整不拌动时，上面再盖约1~2cm高的空白硅胶，再加盖一园形滤纸片，压紧洗脱 先检查从空压机至层析柱各阀门管道是否正常，关紧各个阀门，开动空压机至额定压力（5.8kg/cm2）待用用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂（环已烷-惭酸乙酯-二乙胺/6：2：0.8），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（共约250ml），迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（防加压时接头冲开），小心开启空压机阀门，再开针形阀和空气过滤减压器，（注意：压力过大玻璃柱会炸，一般2kg是安全的，必要时可戴防护面罩）调动所需压力，0.6~1.2kg/cm2，约40分钟后流出，控制流速1ml/分，每10分钟左右一管，收12~15份，洗脱全过程约3小时检查 各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过TLC检查，吸附剂：硅胶G，展开剂：环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定mp。

4.2 鉴定方法4.2.1 衍生物制备取汉防已甲素0.2g，溶于2ml（丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止，抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防已甲素苦味酸盐，mp 235~242℃（dc）4.2.2有机胺碱的TLC吸附剂：青岛海洋化工厂薄层层析硅胶G，用0.3%CMC-Na水液制板，110℃活化1小时样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③展开剂：环己烷- EtoAc-NHEt2（6：2：1）显色剂：改良碘化铋钾试剂（展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰）现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认 5 实验结果及讨论5.1实验结果5.1.1提取物产率：制得提取物质量为0. 37g，计算产率，为0.74%薄层层析鉴定结果：点板时只在薄层板的中间出现一个点，Rf值为0.4225.1.2有机胺碱的TLC效果 5.2 讨论分析 在刚开始实验时加石灰乳的作用：既能达到碱溶解提取生物碱的目的，还可以除去汉防己粗粉中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沆淀），但pH不能过高和长时间煮沸，否则会降低产品收率 过滤时，使用尼龙布过滤，速度会快一些，但是所得滤液仍会有少量沉淀，过滤效果不大理想。

使用布氏漏斗抽滤时，使用一层滤纸很容易穿透，使用两层滤纸则容易造成堵塞，过滤速度极慢，基本上都只能一滴一滴进行，过滤要持续两个小时，很浪费时问特别在重结晶后，溶液不能趁热过滤，有很多产品都在滤纸上析出，大大影响了产品收率 产品过滤时的改进方法：在使用尼龙布过滤后，可再次用尼龙布冉过滤一次，减少固体杂质，再用布氏漏斗，用双层滤纸过滤，这样溶液就会减少很多杂质，过滤速度也会得到提高，最后产品的收率也会提升。