HPLC异常问题原因及解决办法办法.docx

HPLC 异常问题原因及解决办法办法（一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法A、 没有压力显示，没有流动相流动原因解决方法1、电源问题1、接通电源，开机2、保险丝被烧坏2、更换保险丝3、控制器设定不正确或设定失败3、a、采取恰当的设定b、修理或更换控制器4、柱塞杆折断4、更换柱塞杆5、泵头内有空气5、溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足6、a、补充流动相b、更换入口滤头7、单向阀损坏7、更换单向阀8、漏液8、拧紧或更换手紧接头B、 流动相流动正常，但没有压力显示原因解决方法1、仪表损坏1、更换仪表2、压力传感器损坏2、更换压力传感器C、 压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高1、调整流速设定2、柱前筛板堵塞2、a、在允许情况下反冲色谱柱b、更换筛板C、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结3、a、使用恰当的流动相晶沉淀b、冲洗色谱柱4、色谱柱选择不当4、选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏5、清洗或更换进样阀6、柱温过低6、提高温度7、控制器失常7、修理或更换控制器8、保护柱阻塞8、清洗或更换保护柱9、过滤器阻塞9、清洗或更换过滤器D、 压力持续偏低原因解决方法1、流速设定过低1、调整流速2、系统漏液2、确定漏液位置并维修3、色谱柱选择不当3、选择恰当的色谱柱4、柱温过高4、降低温度5、控制器失常5、维修或更换控制器E、 压力不断上升原因解决方法1、见列表c1、见列表CF、 压力降为零原因解决方法1、见列表A、B1、见列表A、BG、 压力不断下降，但不回零原因解决方法1、见列表D1、见列表DH、 压力波动原因解决方法1、泵中有气体1、A、溶剂脱气b、从泵中除去气体2、单向阀损坏2、更换单向阀3、泵密封损坏3、更换泵密封4、脱气不充分4、A、溶剂脱气b、改变脱气方法（使用脱气法等）5、系统漏液5、确定漏液位置并维修6、使用梯度洗脱6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动HPLC 日常维护办法之二：漏液漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。

但值得注意 的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损如果通过稍 微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏 （例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉A、 接头处漏液原因解决方法1、接头松动1、拧紧2、接头磨损2、更换3、接头过紧3、a、拧松，再重新拧紧b、更换4、接头被污染4、a、拆下清洗b、更换5、部件不匹配5、使用同一品牌的配件B、 泵漏液原因解决方法1、单向阀松动1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧）b、更换单向阀2、接头松动2、拧紧接头（不必拧的过紧）3、混合器密封损坏3、a、更换混合器密封b、更换混合器4、泵密封损坏4、维修或更换泵密封件5、压力传感器损坏5、维修或更换压力传感器6、脉冲阻尼器损坏6、更换脉冲阻尼器7、比例阀损坏7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换b、检查手紧接头，损坏的立即更换8、放空阀的损坏8、a、拧紧放空阀b、更换放空阀C、 进样阀漏液原因解决方法1、转子密封损坏1、重新安装或更换进样阀2、定量环阻塞2、更换定量环3、进样口密封松动3、调整4、进样针头尺寸不合适4、使用恰当的进样针5、废液管中产生虹吸5、保持废液管高于废液液面6、废液管阻塞6、更换或疏通废液管D、 色谱柱漏液原因解决方法1、尾端接头松动1、拧紧接头2、卡套内有填料2、拆下、清洗卡套、重新安装3、筛板厚度不合适3、使用合适的筛板（参考下表）筛板选择指导物质粒径筛板孔径3-4u0.5u5-20u2uE、 检测器漏液原因解决方法1、流通池垫片损坏1、a、避免过大的背景压力（压力降）b、更换垫片2、流通池窗破碎2、更换窗口3、手紧接头漏液3、拧紧或更换4、废液管阻塞4、更换废液管5、流通池阻塞5、重新安装或更换HPLC 日常维护办法之三：谱图的各种问题液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。

其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键A、 峰拖尾原因解决方法1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱b、更换进口筛板C、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生5、a、加入离子对试剂或碱性挥发反应性修饰剂图b、更改色谱柱B、 峰前延原因解决方法1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见 A1、A2C、 峰分叉原因解决方法1、 保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析如果 必要更换保护柱如果分析柱阻 塞，拆下来清洗如果问题仍然 存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施如 果问题仍然存在，入口可能被阻 塞，更换筛板或更换色谱柱2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂如果可能采取 流动相作为样品溶剂D、 峰变形原因解决方法1、样品过载1、减少样品载量E、 早出的峰变形原因解决方法1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积b、运用低极性样品溶剂F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原因解决方法1、柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）b、使用小体积的流通池G、 K'增加时，脱尾更严重原因解决方法1、二级保留效应，反相模式1、a、加入二乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）C、加入盐或缓冲剂（或离子化样品）d、更换一支柱子2、二级保留效应，正相模式2、a、加入二乙胺（或碱性样品）b、加入乙酸（或酸性样品）C、加入水（或多官能团化合物）d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对3、加入二乙胺（或碱性样品）H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾原因解决方法1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、 额外的峰原因解决方法1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净b、使用流动相作为样品溶剂C、减少进样体积J、保留时间波动原因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱原因解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选择不恰当3、a、更换合适的流动相b、选择合适的混合流动相L、 基线漂移原因解决方法1、柱温波动。

即使是很小的温 度变化都会引起基线的波动通 常影响示差检测器、电导检测器、 较低灵敏度的紫外检测器或其它 光电类检测器1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀流动相条件2、使用HPLC级的溶剂，高纯度变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移的盐和添加剂流动相在使用前 进行脱气，使用中使用氦气3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗 流通池如有需要，可以用1N的 硝酸不要用盐酸）4、检测器出口阻塞高压造成 流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取出阻塞物或更换管子参考检测器手册更换流通池窗5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速为避免这个 问题可定期检查流动相组成及流 速6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗， 更改流动相时，在分析前用10-20 倍体积的新流动相对柱子进行冲 洗7、流动相污染、变质或由低品质 溶剂配成7、检查流动相的组成使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（咼K' 值）以馒头峰样被洗脱出，从而 表现出个逐步升咼的基线8、使用保护柱，如有必要，在进 样之间或在分析过程中，定期用 强溶剂冲洗柱子。

9、使用循环溶剂，但检测器未调 整9、重新设定基线当检测器动力 学范围发生变化时，使用新的流动相10、检测器没有设定在最大吸收10、将波长调整至最大吸收波长波长处处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空 气1、流动相脱气冲洗系统以除去 检测器或泵中的空气2、漏液图2、见第三部分检查管路接头是 否松动，泵是否漏液，是否有盐 析出和不正常的噪音如有必要， 更换泵密封3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热父换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪， 检查干扰是否来自于外部，加以 更正6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、 基线噪音（不规则的）原因解决方法1、 漏液图1、见第三部分检查接头是否松 动，泵是否漏液，是否有盐析出 和不正常的噪音如有必要，更 换密封检查流通池是否漏液2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子兀件的问题4、断开检测器和记录仪的电源， 检杳并更正5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污 染物也会产生噪音。

7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动 相不走梯度时，建议不使用泵的 混合装置O、 宽峰原因解决方法1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）3、见section 3检查接头是否松 动、泵是否漏液、是否有盐析出 以及不正常的噪音如果必要更 换密封4、检测器设定不正确4、调整设定。