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    酶联免疫吸附试验报告酶联免疫吸附试验报告精选八篇    酶联免疫吸附实验免疫酶技术是本世纪60年代末期发展起来的一种免疫检测方法，是目前最广泛应用的标记免疫技术19xx年Nakene和Pierce共同发表了《酶标抗体：制备和抗原定位中的应用》，首先提出了免疫酶技术的基本原理19xx年Engvall和Perlmann发表《酶联免疫吸附试验测定IgG含量》一文，使免疫酶技术成为一种实用的检测液体标本中微量物质的方法目前免疫酶技术已广泛用于免疫学、微生物学、寄生虫学等由于其具有灵敏度高、试剂稳定、设备简单、操作安全等优点，近几年也将其应用到食品领域中来检测某些食品中的生理活性物质一、基本概念1、免疫：笼统地概括起来，免疫就是人和动物机体防御、排除外来物质(异物)进人体内，同时识别和清除体内死亡、变性物质和平定体内叛乱分子突变细胞，以保护和稳定自身的防护机制2、抗原：抗原是指那些能够诱导机体的免疫系统发生免疫应答，产生抗体和致敏效应淋巴细胞，并在体内外与之特异性结合，发生免疫反应的物质3、抗体：是能与相应的抗原专一性结合的蛋白质分子，和机体其他生物大分子一样是细胞的产物，分泌到体液中或表现在细胞表面上。

4、抗原、抗体反应：抗原和抗体在体外的反应亦称血清学反应这类反应可借助免疫学方法进行检测二、抗体定量检测方法及其原理定量分析抗体的常用方法有扩散法、酶联免疫吸附法和火箭免疫电泳法等1、免疫扩散法1.1、单向免疫扩散法原理：将待检抗原滴加于含相应抗体的琼脂板小孔中，经一定时间扩散后形成乳白色的沉淀坏，在一定浓度范围内，抗原的含量与沉淀坏直径成正比可以先用己知不同浓度的标准抗原制成标准曲线，再根据测试样品沉淀环直径的大小，从标准曲线上查出样品中抗原的相应含量1.2双向免疫扩散法原理：可溶性抗原与已知可溶性抗体分别加入相邻的琼脂糖凝胶板上的小孔内，在电解质存在下让它们相互向对方扩散当两者在最适当比例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线根据最大稀释度与已知标准品最大稀释度之比，可计算出抗体含量…… …… 余下全文篇二 ：酶联免疫吸附实验(ELISA)基本原理基本原理19xx年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得19xx年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度 方法类型和操作步骤ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法一）双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下：（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。

洗涤除去其他未结合的物质3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合彻底洗涤未结合的酶标抗体此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量…… …… 余下全文篇三 ：实验二_酶联免疫吸附实验(ELISA)华南农业大学 200930220121 龙志 09制药一班实验二 酶联免疫吸附实验（ELISA）一、实验目的熟练掌握ELISA 技术二、实验原理酶联免疫吸附实验（ELISA）是目前应用最多的免疫酶技术，它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从而简化了分离步骤，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体实验方法包括间接法、夹心法及竞争法为了检测抗原可用夹心法将特异性抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯制成的小管、小盘或小孔）上，然后加被测溶液，倘样品中有相应抗原，则与抗体在载体表面形成复合物洗涤后加入酶标记的特异性抗体，后者通过抗原也结合到载体的表面洗去过剩的标记抗体，加入酶的底物，在一定时间内经酶催化产生的有色产物的量与溶液中抗原含量成正比，可用肉眼观察或分光光度计测定。

为了检测抗体可用间接法使抗原吸附于载体上，然后加入被测血清，如有抗体，则与抗原在载体上形成复合物洗涤后加酶标记的抗球蛋白（抗抗体）与之反应洗涤后加底物显色，有色产物的量与抗体的量成正比本实验使用的乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒是采用双抗原夹心法检测抗-HBs，即采用纯化HBsAg 包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs 时，该抗-HBs 与包被HBsAg 结合并与酶结合物形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP 复合物，加入TMB 底物产生显色反应，反之则无显色反应三、实验仪器和试剂1、仪器设备：微量移液器、恒温箱2、试剂和材料（1）蒸馏水 （2）人血清样品 （3）乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒四、实验步骤和注意事项1、实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30 分钟，同时将浓缩洗涤液作1：20 稀释…… …… 余下全文篇四 ：酶联免疫吸附试验实验二 酶联免疫吸附试验1.实验目的①了解ELISA反应原理、类型及特点②掌握直接ELISA操作步骤③通过实验认识抗体的双重性2.实验原理① 抗原或抗体能物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，吸附后的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

②酶可与抗体通过共价键连接而形成酶标记抗体，这种结合作用并不影响抗体的免疫学活性和酶的催化活性③酶标抗体中的酶可催化无色底物形成有色产物，酶标抗体与相应抗原或抗体结合后，可根据有无颜色反应来判定是否有免疫反应发生，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比，因此，可以按底物显色的程度来显示试验结果3.实验器材及试剂3.1器材微量移液器，酶标仪、洗板机、96孔酶标板、PHSJ-4A型pH计等3.2试剂显色剂（TMB）、兔抗鸡IgG-HRP、牛血清白蛋白（BSA）、 Tween-20、标准品鸡IgG3.3 各种缓冲液（1）包被液（0.05 M碳酸盐缓冲液， pH 9.6）0.lM Na2C03 1.59 g, 0.1M NaHCO3 2.93 g, 加DDH20（DDW） 至1 L，用精密pH计调整pH值到9．6；（2）封闭液3％BSA，3g BSA溶于100 mL PBS中,调整PH 7.4；（3）洗涤及稀释液PBST和PBS(PH 7.4)0.01mol/L PBS缓冲液NaCl 8.014 g， KCL 0.201 g，Na2HPO4?12H2O 3.581 g KH2PO4 0.272g 溶于1000mL蒸馏水，调整pH至7.2，高温高压灭菌。

1L PBS（pH 7.2）中加入0.5mL Tween-20配制成PBST4）封闭液称取0.1 g BSA溶于100 mL PBST中；（5）底物Buffer…… …… 余下全文篇五 ：酶联免疫吸附实验 ELISA酶联免疫吸附实验 ELISA一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。

辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；…… …… 余下全文篇六 ：酶联免疫吸附试验与胶体金免疫层析试验在乙型肝炎表面抗原检测中的应用比较龙源期刊网 .cn酶联免疫吸附试验与胶体金免疫层析试验在乙型肝炎表面抗原检测中的应用比较作者：叶永志来源：《维吾尔医药》20xx年第06期摘要：目的：探讨酶联免疫吸附试验与胶体金免疫层析试验在乙型肝炎表面抗原检测中的应用。

方法：将我中心门诊体检及检测HBsAg患者300例，分别采用ELISA法及胶体金免疫层析试验检测HBsAg，比较两种检测方法的灵敏度、特异性结果：ELISA与胶体金免疫层析法检测结果差异无统计学意义（P>0.05）ELISA法检测灵敏度显著高于胶体金免疫层析试验，差异有统计学意义（P关键词：酶联免疫吸附试验；胶体金免疫层析试验；乙型肝炎；表面抗原我国乙型肝炎发病率高，为严重危害人民身体健康的传染病之一乙型肝炎表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒感染的诊断标志物之一，HBsAg对于乙肝的预防及治疗意义重大[1]目前常用的实验室检测方法为ELISA及胶体金免疫层析试验ELISA法操作复杂，对相应仪器，检测时间等条件要求较高胶体金免疫层析操作方便，快速，结果易于观察[2]本研究对我中心20xx年12月～20xx年12月门诊体检及检测HBsAg患者300例，分别采用ELISA法及胶体金免疫层析试验检测，报道如下：1资料与方法1.1一般资料 静脉采集我中心20xx年12月～20xx年12月门诊体检者及门诊患者血液标本2ml，其中男180例，女120例；年龄23～55岁，平均年龄（38.6±5.0）岁。

以3000r/min离心10分钟后，分离。