手足口病标本采集技术方案.doc
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手足口病标本采集技术方案一、采集标本的种类、保存和运输（一）粪便标本 采集病人发病 3 日内的粪便标本，用于病原检测粪便标本采集量 5-8g/份，采集后立即放入无菌采便管内，外表贴上带有唯一识别号码的标签，4℃暂存 12 小时内送达实验室，-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱二）咽拭子标本 采集病人发病 3 日内的咽拭子标本，用于病原检测用专用采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有 3-5ml 保存液（含 5%牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液）15ml 外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签4℃暂存在 12 小时内送达实验室，-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱三）血清标本 各省（区、市）在手足口病流行年份中均应采集 EV71 和 CVA16感染的手足口病患儿的双份血清采集急性期（发病 0-7d）和恢复期（发病 14-30d）双份配对血清用于阐明和分析 EV71 和 CVA16 感染后 IgG 和 IgM 抗体的动态变化，评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特异性。
静脉采集 3-5ml 全血，于真空无菌采血管中，自凝后，分离血清，将血清移到 2ml 外螺旋的血清保存管中，外表贴上带有唯一识别号码的标签将血清于-20℃以下冰箱中冷冻保存四）疱疹液 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液中分离到病毒即可确诊该病毒为病因，可同时采集多个疱疹作为一份标本先用 75%的酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒，然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内装有 3-5ml 保存液（含 5%牛血清维持液或生理盐水，推荐使用维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签所采集标本 4℃暂存立即（12h 内）送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱五）肛拭子标本 采集病人发病 3 日内的肛拭子标本，用于病原检测用专用采样棉签，从患儿肛门轻轻插入，适度用力弧型左右擦拭数下，拔出后,迅速将棉签放入装有 3－5ml 保存液（含 5%牛血清细胞维持液） 15ml的外螺旋的采样管中，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖，并密封，以防干燥六）尸检标本 采集脑、肺和肠淋巴结等重要组织标本，每一采集部位分别使用单独的消毒器械。
每种组织应多部位取材，每部位应取 2-3 份约 5-10g的组织，淋巴结 2 个，分别于 15ml-50ml 无菌的有外螺旋盖的冻存管中，采样管外表贴上带有唯一识别号码的标签七）脑脊液标本 出现神经系统症状的病例，可采集脑脊液标本，进行病毒分离或核酸检测采集时间为出现神经系统症状后 3 天内，采集量为1.0-2.0ml采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中，4℃暂存立即(12h 内)送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于－70℃冰箱但 EV71 感染神经系统时，很难在脑脊液中检测到EV71 病原 临床标本在运输和贮存过程中要避免反复冻融标本采集后要全程冷藏或冷冻保存和运输，12 小时内送达实验室依照《人间传染的病原微生物名录》肠道病毒或潜在含有肠道病毒的标本按 B 类包装，于冷藏保存盒内运输，尽量缩短运输时间可采用陆路或航空等多种运输方式，但在运输过程中应采取保护措施，避免强烈震动、重力挤压等现象在送到省、地、市级 CDC 实验室时，包装盒内应带冰且包装完整在上送标本的同时，需附带相关的《手足口病病例临床标本采样登记表》二、标本采集注意事项 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离到病毒即可诊断该病毒为病因。
用于采集咽拭子的无菌拭子要放在标本保存液中，如含 5%牛血清维持液用于分子生物学诊断的标本采集与病毒分离标本的采集方法一样为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发病后尽早采集，尽快检测不能立即检测的标本应冷冻保存对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，恢复期血清在发病两周后采集标本保存液的配比见下表： 保存液Eagle`s 液(MEM) 80.5ml3%L-谷氨酰胺 200mM 1.0ml胎牛血清 5.0ml7.5%NaHCO3 溶液 3.5ml青、链霉素 10ml（各 10000U/ml） 2014.6.13中心医院流感样本采集流程联系方式：杨丽萍13514778954 83672321、20份/月2、预防保健科-医生采集-预防保健科-市CDC3、呼吸、门诊、儿科采集咽拭子4、用生物安全箱配专车送市疾控中心2014版《全国手足口病监测方案》。
