促凋亡基因bax在骨巨细胞瘤中的表达及意义.doc

1促凋亡基因 bax 在骨巨细胞瘤中的表达及意义关键词：促凋亡基因 bax 骨巨细胞瘤表达 摘要　目的：研究促凋亡基因 bax 在骨巨细胞瘤中的表达及其与 Jaffe 分级和预后的关系方法：采用兔抗人 Bax 多克隆抗体及免疫组织化学 SABC 法结果：73 例骨巨细胞瘤中，Bax 阳性47 例(64.4 ％)；其中 Jaffe 病理分级Ⅰ级 27 例中，阳性 22 例(81.5％) ， Ⅱ级 38 例中阳性 23 例(60.5％ )，Ⅲ级 8 例中 2 例阳性(25.0％) ， P＜0.05在不同预后分组中 Bax 阳性率间无显著差异0.05)结论：促凋亡基因在骨巨细胞瘤中不同程度的表达可能参与骨巨细胞瘤凋亡的调节，并与肿瘤分化程度有关单一 Bax 表达不能反应预后 关键词：凋亡 bax 骨巨细胞瘤免疫组织化学 众所周知，细胞凋亡调控失常会导致肿瘤的发生bax 是目前白细胞基因文库中发现的一种新基因，其转录产物 Bax 可与bcl－2 蛋白形成异源二聚体，具有抑制 bcl－2 功能，促进细胞凋亡的作用[1] 2骨巨细胞瘤是最常见的原发性骨肿瘤之一，国人发生率是欧美的三倍[2,3]该肿瘤介于良恶性之间，但局部侵袭性强，部分良性骨巨细胞瘤可发生远处转移[4]。

常规手术治疗复发率高因此，对骨巨细胞瘤凋亡调控的研究对了解其生物学特性具有重要意义本文应用免疫组织化学方法，对 Bax 在骨巨细胞瘤中细胞定位及在不同病理分级和不同预后的瘤组织中的阳性表达率进行了观察 1　材料与方法 1.1　 标本 73 例骨巨细胞瘤标本均来自我科的手术标本，其中胫骨上端29 例，股骨下端 26 例，股骨上端 6 例，肱骨上端 7 例，桡骨远端3 例，胫骨远端 1 例，髌骨 1 例病人皆随访 4 年以上，手术方式均为病灶刮除＋50％氯化锌烧灼瘤腔壁＋植骨其中治愈 41 例，复发 26 例，转移 6 例按 Jaffe 病理分级标准，Ⅰ级 27 例，Ⅱ级38 例，Ⅲ级 8 例标本经 10％福尔马林固定，石蜡包埋，5μm 连续切片，贴于经 APES 处理的载玻片上，进行免疫组化染色 1.2　 染色方法 将切片行 HE 染色，另一套切片行免疫组织化学染色，采用链霉亲和素－生物素－过氧化物酶法促凋亡基因 bax 在骨巨细胞瘤中的表达及意义(SABC 法) 兔抗人 Bax 多克隆抗体购自SantaCruzaBiotechnology,Inc,SABCKit 购自武汉博士德公司按说明书方法染色，Bax 稀释度为 1:150，标本不经抗原修复，设空白对照及正常兔血清（1:50）替代一抗的替代对照。

31.3　 结果评定 标本无阳性细胞、阳性细胞率＜10％或背景同空白对照者为阴性；标本阳性细胞呈淡棕黄色或阳性细胞率介于 10％～50 ％为弱阳性(＋) ；标本阳性细胞呈深棕黄色且阳性细胞率＞50％为强阳性(＋＋) HE 染色切片均经两位有经验的病理医生行 Jaffe 分级标准分级 1.4　 统计学方法 按 Jaffe 病理分级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，分别统计阳性率按不同预后分组随访 4 年以上无复发或转移者为治愈组，有复发无转移者为复发组，伴转移者为转移组，分组统计阳性率率的比较用 χ2检验，P＜0.05 为统计学有意义 2　结果 bax 阳性物质呈棕黄色颗粒状，主要位于骨巨细胞瘤中多核巨细胞和单核基质细胞的胞浆中（附图） 73 例骨巨细胞瘤标本中bax 阳性共 47 例，阳性率 64.4％按 Jaffe 病理分级，Ⅰ级 27 例中 22 例阳性，其中，＋＋16 例，＋6 例，阳性率 81.5％；Ⅱ级 38例中 23 例阳性，其中，＋＋9 例，＋14 例，阳性率占 60.5％；Ⅲ级 8 例中 2 例阳性，均为＋，占 25.0％三组阳性率有显著差异(P＜ 0.05)按治疗效果分组治愈组 41 例中 26 例阳性(63.4 ％)，复发组 26 例中 17 例阳性(65.4 ％)，转移组 6 例中 4 例阳性(66.7％)，三组间阳性率无显著差异(P＞0.05) 。

3　讨论 4bax 基因于 1993 年克隆成功，其编码蛋白是 21kb 的 baxα和 24kb 的 baxβ，与 bcl－2 蛋白有 21％的氨基酸序列同源Bax可与 bcl－2 蛋白结合形成异源二聚体，抑制 bcl－2 的功能，促进细胞凋亡[1]在 73 例骨巨细胞瘤中，47 例(64.4％)Bax 呈阳性反应，阳性物质分布于骨巨细胞瘤单核基质细胞和多核巨细胞的胞浆中按 Jaffe 病理分级Ⅰ级阳性率为 81.5％； Ⅱ级为 60.5％；Ⅲ级为 25.0％，三组标本 bax 阳性率有显著差异(P＜0.05)而且Ⅰ级中以强阳性为主，Ⅲ级中则均为弱阳性，说明 bax 在骨巨细胞瘤高、中、低分化的瘤细胞凋亡调控中的作用不同Ⅰ级骨巨细胞瘤分化较好，bax 表达最高，而在低分化的Ⅲ级骨巨细胞瘤中，bax 表达低，说明 bax 的表达量与肿瘤的分化程度有关骨巨细胞瘤是介于良恶性之间的肿瘤，但其生物学行为特殊传统认为属于良性肿瘤的 JaffeⅠ级和Ⅱ级病例，4％的患者发生恶变，2％～3％的患者发生远隔转移[4,5]，因而其预后难以判断骨巨细胞瘤的预后受其治疗方式、肿瘤浸润范围、肿瘤分化程度、肿瘤的增生与凋亡多因素的影响。

本文 73 例中，治愈组、复发组、转移组组间阳性率无显著差异(P＞0.05) 本研究虽表明 bax 参与了部分骨巨细胞瘤的凋亡调控，与分化有关，但单一 bax 表达不能反映其预后，因而尚需结合其它相关基因及其增殖指标作进一步研究参考文献1 Oltivai AN, Milliman CL, Korsmeyer SJ. bcl－ 2 Heterodimerizes in vivo with a conserved hemology,Bax,that 5accelerates programmed cell death.Cell,1993;74(4):6092 Sung HW,Kuo DP,Shu WP, et al.Giant－ cell tumor of bone:Analysis of two hundred and eight cases in Chinese patients.J Bone Joint Surg(Am),1982;64:7553 Ortiz－ Cruz EJ,Quinn RH,Fanburg JC,et al.Late development of a malignant fibrous histocytoma at the site of a giant cell tumor. Clin Orthop,1995;318:1994 Ladanyi M,Traganos F,Huvos AG.Benign metastasizing giant cell tumors of bone:A DNA flow cytometric study.Cancer,1989;64(10):15215 Rock MG,Pritchard DJ,Unni KK.Metastases from histologically benign giant－ cell tumor of bone.J Bone Joint Surg(Am), 1984;66:269。