保健食品安全性毒理学检验及评价课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,,*,,,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,,,*,保健食品,安全性毒理学检验及评价,,保健食品安全性毒理学检验及评价,第一部分,中国保健食品简介,第一部分中国保健食品简介,保健食品定义,,保健食品（,Functional Food,）系指具有调节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治疗为目的的一类食品保健食品定义 保健食品（Functional Food,特 点,,具有特定的保健功能；,无毒副作用，食用安全；,有别于食品和药品；,增强体质、预防疾病为主；,适用于特定人群特 点 具有特定的保健功能；,特 定 功 能,,由国家管理部门指定,允许申报的功能目前有,27,种,,27,种以外的功能，生产企业在获得足够的技术资料后（包括评价方案，试验数据及结果）向有关管理部门提出受理申请，接受评审特 定 功 能 由国家管理部门指定,特 定 人 群,正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳母、青少年、中老年、特殊工种的工作者以及常见病病人,对于营养保健有特殊的需要,,膳食结构的不同,营养素需求的不同,特 定 人 群正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳母、青少年、,保健食品的发展历程,第一代保健食品,：在,《,保健食品的管理方法,》,颁布以前市场上已有的保健食品。

第二代保健食品,：经动物和人体实验证实具有某种生理调节功能的食品第三代保健食品,：不仅需要经人体及动物实验证实具有某种功能，而且需要研究提供该功能因子、含量及其作用机理保健食品的发展历程第一代保健食品：在《保健食品的管理方法》颁,发 展 趋 势,根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能,根据新的养生保健概念，开发新的保健功能,根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分,根据中医药理论，开发中药类有效成分,根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素,,,发 展 趋 势根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功,保健食品开发中的注意点,中草药,新资源,野生动植物及其产品,核酸类,真菌类,益生菌类,酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发酵的,,保健食品开发中的注意点中草药,中草药类,,中草药作为原料应注意,：,1.,不能采用有明显毒副作用的中药材、 获国家药政管理部门批准的中成药、 受国家中药保护的中药成方,2.,用量应控制在临床用量的,50%,以下,中草药类 中草药作为原料应注意：,新资源类,,新资源作为原料时必须具备的有关资料,：,名称及国内外研究利用情况；,名称、配方及生产工艺；,产品成分（包括营养物质、有生物效应物质及有毒有害物质等）的分析报告；,安全性毒理学评价报告或有关文献资料；,个别地区有食用习惯的应提供有关食用历史的证明资料；,质量标准。

新资源类 新资源作为原料时必须具备的有关资料：,野生动植物及其产品,类,,以野生动植物及其产品为原料的有关限制,：,受保护的野生动物禁止使用自然的、人工驯养繁殖或人工栽培的国家一级和自然的二级保护野生动植物及其产品人工驯养繁殖或人工栽培的国家二级保护野生动植物及其产品，国家保护的有益的或者有重要经济、科学研究价值的陆生野生动物及其产品应提供省级以上农业（渔业）、林业行政主管部门的批准文件野生动植物及其产品类 以野生动植物及其产品为原料的有关限制：,以野生动植物及其产品为原料的有关限制,：,中华人民共和国林业植物新品种保护名录中植物及其产品，如果该种植物已获,“,品种权,”,，应提供该种植物品种权所有人许可使用的证明；如该种植物尚未取得品种权，应提供国务院林业主管部门出具的该种品种尚未取得品种权的证明进口保健食品中使用,《,濒危野生动植物种国际贸易公约,》,名录中动植物及其产品的，应提供国务院农业（渔业）、林业行政主管部门批准文件、进出口许可证及海关的证明文件野生动植物及其产品,类,以野生动植物及其产品为原料的有关限制：野生动植物及其产品类,核酸类,核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料,：,具体成份名称、来源、含量；,与所申报功能直接相关的科学文献依据；,企业标准中标出核酸各成份的含量、纯度和相应的定性、定量检测方法以及质量标准；,详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；,核酸原料纯度的检测报告。

核酸类核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料：,核酸类,核酸类保健食品申报时的注意事项,：,不得以单一的,DNA,或,RNA,作为原料申报单一原料纯度应大于,80,％功能申报范围暂限定为免疫调节功能如申报其他功能，需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报核酸成份的每日推荐食用量为,0.6g-1.2g,不得以,“,核酸,”,命名说明书及标签中的,“,不适宜人群,”,除按保健食品相关规定标注外，应明确标注出,“,痛风患者,”,核酸类核酸类保健食品申报时的注意事项：,真菌类,真菌类保健食品的部分规定,：,生产企业应建立有关的档案资料生产企业应具备相应的生产条件对生产菌种及工艺变更的相应规定冠名规定发酵过程中，除培养基外，不得加入具有功效成分的动植物及其它物质不能使用经过基因修饰的菌种真菌类真菌类保健食品的部分规定 ：,益生菌类,益生菌类保健食品的部分规定,：,生产用菌种应满足一定的条件生产企业应具备的一定条件菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报不提倡以液态形式生产活菌产品在保存期内活菌数目不得少于,106cfu/mL(g),益生菌类益生菌类保健食品的部分规定：,益生菌类,益生菌类保健食品的部分规定,：,如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示,所用菌种在其发酵过程中，除培养基外，不得加入具有功效成分的动植物及其物质,不能使用经过基因修饰的菌种,益生菌类益生菌类保健食品的部分规定：,其他类别,对酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发酵为原料限制的部分规定,：,未列入,《,食品添加剂使用卫生标准,》,或卫生部公告名单中的食品添加剂新品种的酶制剂不得用于保健食品的生产。

不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品其他类别对酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发,其他类别,使用微生物发酵直接生产保健食品的，需提供的特殊资料,：,菌种来源及菌种检定报告,菌种的毒力试验报告及安全性评价报告,国内外该菌种使用于食品生产的文献资料,发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）,,其他类别使用微生物发酵直接生产保健食品的，需提供的特殊资料：,其他类别,使用氨基酸螯合物生产保健食品的，需提供的特殊资料,：,提供明确的化学结构式、理化性质，配体与金属离子之比、游离元素和总元素之比提供定性、定量的检测方法及验证报告急性毒性试验加做停食,16,小时后空腹一次灌胃试验和,30,天喂养试验的组织病理报告国内外使用于食品生产的文献资料其他类别使用氨基酸螯合物生产保健食品的，需提供的特殊资料：,安全，无毒、副作用,功能，保健功效,,理化、微生物特性：,有害成分物质和污染物,毒理学特性：,剂量反应（效应）关系,保健食品质量控制,生物活性物质,功效成分,通过检验和评价，加以控制,安全，无毒、副作用功能，保健功效理化、微生物特性：保健食品质,第二部分,保健食品安全性毒理学检验及评价,第二部分保健食品安全性毒理学检验及评价,主 要 内 容,,检验评价依据,审评基本要求,选择毒理学试验的基本原则,实验动物的选择,样品的预处理原则,毒理学试验项目要点介绍,毒理学安全性评价时应考虑的问题,审评结论的判定,主 要 内 容 检验评价依据,毒性及功能检验评价依据,1996,年,3,月卫生部,《,保健食品的管理方法,》,,保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法,1996,年,7,月,GB15193《,食品安全性毒理学评价程序和方法,》,,卫生部,《,保健食品功能学评价程序和检验方法,》,,仅包含了,12,项功能检验及评价方法,2001,年,7,月 卫生部,《,保健食品功能学评价程序和检验方法,》,,可受理和评价的功能调整到,31,项,2003,年,2,月卫生部,《,保健食品检验与评价技术规范,》,,将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一,毒性及功能检验评价依据1996年3月卫生部《保健食品的管理方,审评的基本要求,1.,配方,原（辅）料、用量、理化性质,2.,剂量,食用方法及用量,3.,工艺,规格化产品 符合配方、工艺、质量标准,4.,批号,注意批号是否一致,,,益生菌、奶制品等保质期短的除外,审评的基本要求1. 配方,1.,毒理学评价的四个阶段,第一阶段：急性毒性试验,经口急性毒性试验：,LD50,，联合急性毒性，一次最大耐受量试验,第二阶段：遗传毒性试验，,30,天喂养试验，传统致畸试验,遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合,Ames,或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等,第三阶段：亚慢性毒性试验,,90,天喂养试验、繁殖试验、代谢试验,第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）,选择毒理学试验的基本原则,1. 毒理学评价的四个阶段选择毒理学试验的基本原则,2.,一般无需进行毒性试验的原料或成分,属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：,采用传统的工艺及食用方式,水提取物，常规服用量，无不安全性报道,来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂 或营养素补充剂,选择毒理学试验的基本原则,2.一般无需进行毒性试验的原料或成分选择毒理学试验的基本原则,3.,需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分,属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺生产的：,（,1,）服用量与常规用量相同,急性毒性、三项致突变试验,（,2,）服用量大于常规用量,还需加做,30,天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验,选择毒理学试验的基本原则,3. 需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分选择毒理学,4.,需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分,文献显示无危害，人群长期食用；,具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产 品质量规格与国外产品一致；,国外广泛食用且能提供安全性评价资料；,卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。

选择毒理学试验的基本原则,4.需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分选择毒理学试验的基本,5.,需进行一至三阶段毒性试验的情况：,一、二阶段试验结果与国外产品不一致的,国外少数国家或地区食用的原料或成分,水提取物，大于常规服用量,用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量,选择毒理学试验的基本原则,5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：选择毒理学试验的基本原则,6.,需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分,,国内外均无食用先例,,7.,敏感指标及敏感试验的保健食品,,不同食用人群和（或）不同功能的保健食品,选择毒理学试验的基本原则,6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分选择毒理学试验的基本,8.,保健食品新原料,保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料选择毒理学试验的基本原则,8.保健食品新原料选择毒理学试验的基本原则,,在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：,未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；,尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；,卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。

选择毒理学试验的基本原则,在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食,新原料安全性毒理学试验项目的选择,①无食用史 需做四阶段试验,②局部地区有食用史 需做三阶段试验,,其中 ，,100,倍,<,摄入量,<300,倍 需做第四阶段试验,③ 有食用史 需做二阶段试验,,经评价后 下一阶段试验,④ 广泛食用的原料 二阶段试验,（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）,选择毒理学试验的基本原则,新原料安全性毒理学试验项目的选择选择毒理学试验的基本原则,新原料安全性毒理学试验项目的选择,⑤ 已知化学物,:,,⑤-1,可只做二阶段实验的包括,已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价,有资料证明所用原料与其一致,,⑤,-2,如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验,⑥ 有新原料的保健食品,:,根据试验结果综合分析选择毒理学试验的基本原则,新原料安全性毒理学试验项目的选择选择毒理学试验的基本原则,对受试保健食品的要求,,单一已知化学成分，应提供物理和化学性质,多种原料的配方产品，应提供配方,配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的,物理和化学性质及其检测报告,提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。

使,用说明书等有关资料,受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品,对受试保健食品的要求 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质,实验动物的选择及给样量,1.,根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物,,常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系2.,动物应符合,《,实验动物管理条例,》,,清洁级或清洁级以上,动物合格证号及动物实验室合格证号,3.,灌胃量,,大鼠：,10 ml/kg,•,BW,（若以水为溶剂，推荐,20 ml/kg,•,BW,）,小鼠：,20ml/kg,•,BW,实验动物的选择及给样量1.根据各项实验的具体要求，合理选择实,样品的预处理原则,1.,介质的选择,,应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等2.,液体类,,受试物浓缩倍数应符合试验要求浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有,60℃,～,70℃,减压或常压蒸发、冷冻干燥按工艺要求样品的预处理原则1.介质的选择,样品的预处理原则,3.,袋泡茶类,,处理方法与产品推荐饮用方法相同,推荐用：,80℃--90℃,常压用水浸泡,30min,,水量为受试物的,10,倍，提取,2,次，,2,次提取液合并浓缩至所需浓度,标明该浓缩液与受试物的比例,,样品的预处理原则3.袋泡茶类,样品的预处理原则,4.,含乙醇类,（,1,）不需浓缩的受试物,乙醇浓度,<15,％ 直接进行试验,乙醇浓度,>15,％ 乙醇浓度应调至,15,％,（,2,）需浓缩的受试物,乙醇浓度,<15,％ 浓缩后调至原乙醇浓度,乙醇浓度,>15,％ 浓缩后调至,15,％乙醇浓度,在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基,样品的预处理原则4.含乙醇类,样品的预处理原则,5.,膨胀系数较高的受试物,选择可溶性介质,给受试物的方法：灌胃,其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的,100,倍，按实际达到的倍数,标明受试物的膨胀系数,样品的预处理原则5.膨胀系数较高的受试物,样品的预处理原则,6.,益生菌等微生物类保健食品,在进行,Ames,试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。

需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）7.,以食品为载体的受试物,,（,1,）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明2,）大豆蛋白、乳清蛋白,如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验样品的预处理原则6.益生菌等微生物类保健食品,毒理学试验项目要点介绍,,急性经口毒性试验,鼠伤寒沙门氏菌（,Ames,）试验,骨髓细胞微核试验,哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验,小鼠精子畸形试验,小鼠睾丸染色体畸变试验,,30,天喂养试验,毒理学试验项目要点介绍 急性经口毒性试验,急性经口毒性试验,目的：,测定,LD,50,，毒性分级了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据原理：,急性毒性：经口一次性、,24h,内多次给予，短时间内的毒性反应致死剂量通常用半数致死剂量,LD,50,表示急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用急性经口毒性试验目的：测定LD50，毒性分级了解毒性强度、,急性经口毒性试验,时间周期,：一般为,3,周,,3-5,天，大、小鼠适应期,,7-14,天，染毒及实验观察期,发生动物死亡时，应进行大体解剖,观察和评价指标,：,毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化,死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。

大体尸检结果：如果发生死亡动物,急性经口毒性试验时间周期：一般为3周,急性毒性（,LD,50,）剂量分级表,级 别,,,大鼠口服,LD,50,，,mg/kg,,,相当于人的致死量,,,mg/kg,,,g/,人,,,极毒,,,<1,,,稍尝,,,0.05,,,剧毒,,,1-50,,,500-4000,,,0.5,,,中等毒,,,51-500,,,4000-30000,,,5,,,低毒,,,501-5000,,,30000-250000,,,50,,,实际无毒,,,5001-15000,,,250000-500000,,,500,,,无毒,,,>15000,,,>500000,,,2500,,,,急性毒性（LD50）剂量分级表级 别大鼠口服LD50，,急性经口毒性试验,试验结果的判定：,1. LD50,＜,人可能摄入量的,100,倍，放弃；反之继续下一步试验2. LD50,≥,10g/kgbw,或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验急性经口毒性试验试验结果的判定：,鼠伤寒沙门氏菌（,Ames,）试验,目的：,检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。

时间周期：,一般为,2,周,,第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备,第二周，染毒，培养,48h,，读平板，菌落计数,剂量设计：,决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度最低剂量为,0.2ug/,皿；最高剂量为,5mg/,皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量可设五个剂量组，组间距不超过,5,倍同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验目的：检测受试物的诱变性，预测,鼠伤寒沙门氏菌（,Ames,）试验,观察及评价指标：,各受试物组及三个对照组的四种菌株（,TA97a,，,TA98,，,TA100,和,TA102,）分别在加和不加,S9,情况下的菌落计数结果评价（掺入法）：,受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数≥,2×,未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验观察及评价指标：,骨髓细胞微核试验,目的,：,检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性原理,：,微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片 。

末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核骨髓细胞微核试验目的：,骨髓细胞微核试验,时间周期,：一般为,2,周,,3-5,天适应期,小鼠经口染毒，,30h,给受试物法,取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检,剂量设计,：至少设置,3,个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和,/,或个别动物出现死亡的剂量低剂量组应不出现毒性反应一般取,LD50,的,1/2,、,1/4,、,1/8,作为三个剂量当受试物的,LD50≥10g/kg.bw,时，最高剂量通常采用,10g/kg.bw,同时设阳性对照组和溶剂对照组骨髓细胞微核试验时间周期：一般为2周,骨髓细胞微核试验,观察及评价指标,：,每只动物计数,1000,个嗜多染红细胞 ，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例结果评价,：,受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性骨髓细胞微核试验观察及评价指标：,哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验,目的,：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性原理,：当受试物作用于细胞周期,G1,期和,S,期时，可诱发染色体型畸变，而作用于,G2,期时则诱发染色体单体型畸变。

给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰在显微镜下便可观察染色体数目和形态哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的：检测受试物对整体动物骨髓,哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验,时间周期,：一般为,3,周,,3-5,天适应期,小鼠或大鼠经口染毒,2-4,次，每次间隔,24h,，在末次染毒,18-24h,进行取材（取材前,2-4h,，腹腔注射秋水仙素）取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检,剂量设计,：同骨髓细胞微核试验,哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期：一般为3周,哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验,观察及评价指标,：,每只动物分析,100,个中期相细胞 ，每个剂量组不少于,1000,个记录染色体数目及结构的改变结果评价,：,受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标：,小鼠精子畸形试验,目的,：,检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用原理,：,小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及,X,、,Y,性染色体基因决定精子形态。

精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变小鼠精子畸形试验目的：,小鼠精子畸形试验,时间周期,：一般为,7,周,,3-5,天适应期,小鼠经口连续染毒,5,天，于首次给样后的,35,天处死动物,取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检,剂量设计,：同骨髓细胞微核试验,,小鼠精子畸形试验时间周期：一般为7周,小鼠精子畸形试验,观察及评价指标,：,每只动物检查,1000,个精子 ，记录精子畸形数目及类型结果评价,：,受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性小鼠精子畸形试验观察及评价指标：,小鼠睾丸染色体畸变试验,目的,：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性原理,：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过,DNA,复制期，故在前细线期处理第,12,～,14d,采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应小鼠睾丸染色体畸变试验目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率,小鼠睾丸染色体畸变试验,时间周期,：一般为,7,周,,3-5,天适应期,小鼠经口连续染毒,5,天，与首次给样后的,12-14,天处死动物取材，（取材前,6h,，腹腔注 射秋水仙素）。

取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检,剂量设计,：同骨髓细胞微核试验,小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期：一般为7周,小鼠睾丸染色体畸变试验,观察及评价指标,：,每只动物分析,100,个中期相细胞 ，记录染色体数目及结构的改变（包括断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）结果评价,：,受试物组与对照组的断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标：,遗传毒性试验组合,试验结果的判定,：,如三项致突变试验（,Ames,试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，一般应放弃该受试物用于保健食品如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步的毒性试验遗传毒性试验组合试验结果的判定：,30,天喂养试验,目的,：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解毒性作用，特别是观察对生长发育的影响，并可初步估计最大观察到的无作用剂量，估计亚慢性摄入的危害性原理,： 以不同剂量受试物每日经口给予各组实验动物，连续,30,天染毒期间每日密切观察动物的毒性反应，染毒结束后进行大体解剖、血生化及病理检查，以此观察重复喂食不同剂量的受试物对动物引起的有害作用。

30天喂养试验目的：急性毒性试验的基础上，此试验可进一步了解,30,天喂养试验,时间周期,：在获得了急性毒性数据后，一般为,2,月,,3-5,天，大鼠适应期,,30,天，染毒及实验观察期,再进行大体解剖、血液、生化、器官病,理检查30天喂养试验时间周期：在获得了急性毒性数据后，一般为2月,30,天喂养试验,剂量设计,：至少设三个剂量组和一个对照组高剂量应能引起动物明显毒效应但不造成动物死亡低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组对于能获得,LD50,的受试物,：最高剂量为,10,％～,25,％的,LD50,，最低剂量组至少为人可能摄入量的,3,倍对于不能获得,LD50,的受试物,：最高剂量为人可能摄入量的,100,倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量30天喂养试验剂量设计：至少设三个剂量组和一个对照组高剂量,30,天喂养试验,观察及评价指标,：,一般情况观察,：每日的表现、行为、中毒和死亡情况每周,1,次体重及,2,次食物摄入量，计算食物利用率血液学指标,：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标生化学指标,：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。

病理检查,：大体解剖、脏器称重、组织病理学检查30天喂养试验观察及评价指标：,30,天喂养试验,试验结果的判定,：,对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量≥人可能摄入量的,100,倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价最小观察到有害作用剂量≤人可能摄入量的,100,倍，或观察到毒性反应的最小剂量组其受试物在饲料中比例≤,10,％，放弃在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验30天喂养试验试验结果的判定：,其它试验结果判断,,传统致畸试验,：,需大于或等于人摄入量的,100,倍在,50,倍至,100,倍之间需进行安全性评价，小于,50,倍需放弃90,天喂养试验、繁殖试验,：,1.,仅在国外少数国家或国内局部地区有食用历史的原料或成分，需大于或等于人摄入量的,100,倍2.,国内外均无食用历史的原料或成分时，需大于或等于人摄入量的,300,倍在,100,倍至,300,倍之间需进行慢性毒性试验，小于,100,倍需放弃其它试验结果判断 传统致畸试验：,其它试验结果判断,,慢性毒性试验,：,以,LD50,或,30,天喂养试验的最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。

致癌试验阳性判定依据,：,肿瘤只发生在实验组动物，对照组中无肿瘤发生实验组和对照组均发生肿瘤，但实验组发生率高实验组和对照组肿瘤发生率无明显差异，但实验组发生时间较早符合以上三项中的情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性其它试验结果判断 慢性毒性试验：,安全性评价的科学性和艺术性,安全性评价的艺术性,：,1.,动物实验结果外推到人必须考虑动物与人的种属差异；,2.,安全性标准与社会经济基础、技术能力的相符性；,3.,安全性标准与社会和公众利益之间的平衡性结论,：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验的局限性，社会经济状况，人们的生活习惯等因素，对评价结果作出一个合理的分析，为卫生标准的制定提供具有实际指导意义的依据安全性评价的科学性和艺术性安全性评价的艺术性：,应综合考虑的问题,1.,试验指标的统计学意义和生物学意义,在分析试验组与对照组指标统计学的显著性时，应根据其有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则,,,来综合考虑指标差异有无生物学意义2.,生理作用与毒性作用,对实验中某些指标的异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物的毒性作用。

应综合考虑的问题1.试验指标的统计学意义和生物学意义,应综合考虑的问题,3.,时间,-,毒性效应关系,对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间的变化情况4.,特殊人群和敏感人群,对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性应综合考虑的问题3.时间-毒性效应关系,应综合考虑的问题,5.,人的可能摄入量较大的保健食品,应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作用所致6.,含乙醇的保健食品,对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用应综合考虑的问题5.人的可能摄入量较大的保健食品,应综合考虑的问题,7.,动物年龄对试验结果的影响,,对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年龄选择不当所致8.,安全系数,,鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通常为,100,应综合考虑的问题7.动物年龄对试验结果的影响,应综合考虑的问题,9.,人体资料,,在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物后反应的资料。

10.,综合评价,,在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确保其对人体健康的安全性应综合考虑的问题9.人体资料,应综合考虑的问题,11.,保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评价可 能因为当时科学水平和技术条件的限制，现已不适用需重新评价12.,若受试物掺入饲料的最大加入量（,10,％）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人的可能摄入量的规定倍数时，如何综合其它的毒性试验结果进行安全性评价应综合考虑的问题11.保健食品安全性的重新评价：很早的毒性评,审评结论的判定,1.,认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明受试物的安全性2.,属以下几种情况之一，补充资料后建议批准：,（,1,）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告2,）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释3,）未提供某些试验数据，需要补充提供审评结论的判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试,审评结论的判定,3.,重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：,（,1,）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安全性，需要做除,30,天,/90,天喂养试验以外的毒理学试验；,（,2,）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。

审评结论的判定3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：,（,1,）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在安全性问题2,）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有,“,可用于保健食品的原料,”,名单以外的原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价3,）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验4.,对产品的安全性不予认可的情况如下（一）：,（1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒,（,4,）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致5,）未按规定提供安全性毒理学评价资料的6,）,30,天,/90,天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信4.,对产品的安全性不予认可的情况如下,(,二,),：,（4）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致,第三部分,保健食品安全性毒理学评价中存在的问题,第三部分保健食品安全性毒理学评价中存在的问题,存在的问题,,鉴于制订此程序的历史背景与目前情况有所不同，因此，对保健食品的安全性评价时，出现了选择毒理试验的项目、剂量、样品前处理等问题，现就上述问题一并提出供讨论。

存在的问题 鉴于制订此程序的历史背景与目前情况有所不同,存在的问题,,充分了解受试物,1.,要求提供规格化产品，至少是中试产品符合既定的配方，生产工艺和质量标准2.,仔细阅读配方以了解受试物的物理、化学性质（包括化学结构、纯度、稳定性等）3.,了解生产工艺4.,按产品说明书的最大人体推荐量进行剂量设计存在的问题 充分了解受试物,存在的问题,,动物年龄,主要指,30,天和,90,天喂养试验，,“,程序,”,中规定用离乳大鼠，而保健食品应视具体情况而异最典型的是人参、鹿茸、减肥产品，并非受试物本身有毒影响了动物的生长发育，而是因为这类产品的服用对象是成人，所用的动物是离乳大鼠存在的问题 动物年龄,存在的问题,实验项目的选择,配方中含有仅限局部地区人群食用而又不在,“,51,号,”,名单上的原料，只对产品进行了两阶段毒理试验，而未对原料本身按要求进行毒理学评价，有的进行了评价但给予动物受试物的方式与实际食用方式不一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物含,“,51,号,”,文附录二名单上原料的产品只做了,LD50,和三项致空变试验存在的问题实验项目的选择,存在的问题,实验项目的选择,药食同源产品经有机溶剂提取未做毒理试验，或只做,LD50,和微核试验。

从食品中提取某一成分的粗提物只做了,LD50,和三项致突变试验，如大豆异黄酮配方中仅有单一成分，如人参、西洋参、蜂王浆不必进行全部二阶段毒理试验存在的问题实验项目的选择,存在的问题,样品前处理,（一）液体类,（二）酒类,（三）固体类,（四）菌类,（五）以某些食品为载体的保健食品：如富含微量元素的鸡蛋、南瓜粉等,存在的问题样品前处理,存在的问题,LD,50,中存在的问题,,1.,经口,LD50,还用对照组2.,不写禁食时间3.,做到了,21.5g/KgBW,,结论是﹥,10g/KgBW,4.,将受试物掺入饲料吃,24,小时存在的问题LD50中存在的问题,存在的问题,Ames,实验,,1.,以油为载体的产品直接倒入平皿,,2.,工艺是低温提取或低温冷冻干燥的产品用,8,磅,15,分钟高压灭菌3.,有溶剂对照而无自发回变对照4.,菌落回变数随剂量的增加而增多已超过正常值而不是二倍而出具了合格的报告,存在的问题Ames实验,存在的问题,Ames,实验,,5.,有抑菌作用的产品不进行预试验找出抑菌剂量而出具了,5mg/,皿菌落回变数正常的报告6.,产品中明显含有组氨酸，而不进行除组氨酸的前处理7.,应该用,XAD-2,树脂对样品进行前处理,,8.,没有理解,5mg/,皿含义：系指有效成份，如某些产品含有,80%,的糖，没进行样品前处理或向送样方提出要求，直接用产品做,5mg/,皿，实际上是,1mg/,皿。

存在的问题Ames实验,存在的问题,,微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验,,1.,微核试验：几份报告中都有阳性对照的数据，而这几份原始记录中皆无阳性对照2.,精子畸形试验：阳性对照组精子畸形率﹤,3.4%,，即判断阴性对照组与阳性对照组相比差异有显著性,P﹤0.05,正常畸形率为,0.8-3.4%,）3.,睾丸染色体畸变试验：阳性对照持续应用一年以上存在的问题 微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验,存在的问题,30,天或,90,天喂养实验,1.,雌性鼠的体重比雄性鼠还重或一样重,,148.33 ±8.38,172.28 ±10.93,194.82 ±10.92,215.46 ±14.68,231.50 ±15.15,189.83 ±14.66,239.52 ±17.56,288.33 ±16.92,324.14 ±19.80,357.24 ±22.72,6,7,8,9,10,14.03 ±2.03,30.68 ±3.22,47.61 ±5.35,79.52 ±6.70,118.53 ±7.12,14.44±2.07,30.62 ±4.56,49.02 ±6.19,86.86 ±8.98,137.72 ±11.69,1,2,3,4,5,雄（,n=30),雌（,n=30),雄（,n=30),雌（,n=30),体重,(g),,周龄,,（周）,体重,(g),周龄,,（周）,存在的问题 30天或90天喂养实验148.33 ±8.381,存在的问题,30,天或,90,天喂养实验,2.,食物利用率雌雄分不开，或为将雌、雄性大鼠食物利用率拉开差距，雌性和雄性大鼠的进食量基本一致。

3.,大鼠的进食量越来越高，雌性大鼠,700,多克、,4.,雄性大鼠,600,多克，而体重与食物利用率和以前的差不多5.,剂量设计：相当于推荐量（以,g/Kg BW,计）的,6.56,、,26,和,105,倍，这是先设计再做试验，还是先做试验再设计？,6.,受试物掺入饲料的量高达,18%,，袋泡茶掺入饲料给予动物存在的问题 30天或90天喂养实验,存在的问题,30,天或,90,天喂养实验,7.,动物摄入饲料的量在,30,天喂养试验以体重的,10%,计，,90,天喂养试验以体重的,8%,计，这是经过大量资料统计得出，但将受试物以,10-20%,的浓度饮水给予动物，又不计饮水量，与报告的剂量设计是否基本一致？有的按每,100gBw,给,10ml,含有受试物的水，饮毕再给饮用水？,8.,有的试验动物体重增长缓慢，解释是受试物不好吃9.,生化指标：不做,TG,、,AST,；,TC,高达,2.8mmol/L,；,BUN12.9mmol/L,存在的问题 30天或90天喂养实验,存在的问题,30,天或,90,天喂养实验,10.,以大鼠为试验动物测尿酸，大鼠的代谢与人不完全一样，可将尿酸转化为尿囊素排出。

11.,病理报告：心肝脾无毒性损伤，两个产品，两份报告来自同一检测单位；,A4,纸写了一大篇，详细描述了病理组织结构，没有一点异常，四个产品、四份报告来源同一检验单位；写一小段也比较详细的描述了病理组织结构，亦无任何异常三个产品、三份报告亦来源于同一检验单位存在的问题 30天或90天喂养实验,存在的问题,,传统致畸试验,其剂量设计比,30,天喂养还高，程序已明确以亚急性试验的最大无作用剂量为高剂量，目的是：找强致畸物，即具有致畸作用，但无母体毒性出现，这种受试物致畸作用往往较强,存在的问题 传统致畸试验,存在的问题,,其他典型问题,推荐量较大的产品，同一检测单位，,30,天喂养试验进行了样品前处理达到足够倍数，但,LD50,、三项致突变试验未进行样品前处理，相当于人推荐量的倍数很低；样品进行了前处理但折合到样品的量不一致；样品进行了前处理，但报告中写取一定量的样品用回旋蒸发仪浓缩至所需浓度，剂量设计写的是,25,、,50,、,100ml/KgBw,；有的报告要从字里行间为依据替检测单位计算出剂量设计是否正确；,Ames,试验的剂量以每皿,%,之多少计存在的问题 其他典型问题,谢 谢,谢 谢,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,保健食品安全性毒理学检验及评价课件,。