谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书微量法100管48.pdf

谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书 微量法 100 管/48 样 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定 测定意义 GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨 基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用此外，哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高，当肝细胞 坏死，GPT 释放到血液中，血清 GPT 活性显著增高因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝 功能损害最敏感的检测指标 测定原理 GPT 催化丙氨酸和 α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入 2,4-二硝基苯 肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件 下呈红棕色，可以在 505nm读取吸光值并计算酶活力 试验中所需的仪器和用品 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、 研钵、冰和蒸馏水 试剂的组成和配制 提取液：60mL×1 瓶，4℃保存 试剂一：液体 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂二：液体 2.5 mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂三：液体 25 mL×1 瓶，4℃保存； 样品测定的准备 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个） ：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液） ， 超声波破碎细菌或细胞 （冰浴， 功率 20％或 200W， 超声 3s， 间隔 10s， 重复 30 次） ； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g） ：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液） ，进行冰浴匀浆8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测 2、血清（浆）样品：直接检测 测定步骤 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水调零 2、 在 EP 管或在 96 孔板中加入下列试剂 试剂名称（μL） 测定管 对照管 待测样本 10 试剂一 25 25 混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热 30min 试剂二 25 25 待测样本 10 混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确反应 20min 试剂三 240 240 混匀，室温（25℃）放置 10min，在 505nm波长处测各管吸光度每个测定管需设一个对照管 计算 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、以相对吸光值（A 测定管-A 对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标作 标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482 2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392） 。

χ 为 A 测定管-A 对照管 3、微生物、细胞或组织中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀 浆蛋白浓度（g/L） χ 为 A 测定管-A 对照管 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 1、以相对吸光值（A 测定管-A 对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标作 标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.964 2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392） χ 为 A 测定管-A 对照管 3、微生物、细胞或组织中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.964×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀 浆蛋白浓度（g/L） χ 为 A 测定管-A 对照管。