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色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 平板色谱平板色谱 - - 薄层色谱薄层色谱 、纸色谱、纸色谱、薄层电泳、薄层电泳 气相色谱气相色谱 - - 气固色谱气固色谱 、气液色谱气液色谱 液相色谱液相色谱 - - 正相色谱正相色谱 、反相色谱反相色谱 、超临界、超临界流色谱流色谱 、逆流色谱、电色谱、逆流色谱、电色谱 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 平板色谱平板色谱1.平板色谱一般分离过程 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动 纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用比移值比移值（R R ) )：溶质移动距离与流动相移动距离之比：溶质移动距离与流动相移动距离之比溶质原点前沿吸附剂或载体的选吸附剂或载体的选择及薄层的制备择及薄层的制备薄层的预处理薄层的预处理点点 样样样品的制备样品的制备色谱前衍生化色谱前衍生化薄层板预平衡薄层板预平衡展展 开开定定 位位定性定性定量定量平板色谱法操作流程图平板色谱法操作流程图色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 平板色谱平板色谱2)2)薄层色谱薄层色谱 薄层薄层 分离机制分离机制 主要应用范围主要应用范围氧化铝板氧化铝板 吸附吸附 脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物 硅胶板硅胶板 吸附吸附 碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类改性硅胶改性硅胶 C C2 2,C,C8 8,C,C1818RP RP 正相、反相正相、反相 非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质CNCN板板 正相、反相正相、反相 农药、酚类、甾类农药、酚类、甾类NHNH2 2板板 正相、反相、正相、反相、 核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、 阴离子交换阴离子交换 维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物纤维素纤维素 分配分配 氨基酸、梭酸氨基酸、梭酸乙酰纤维素乙酰纤维素 正相、反相正相、反相 蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂离子交换剂 阴、阳离子交换阴、阳离子交换 氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺聚酰胺 分配分配 黄酮类、酚类黄酮类、酚类葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 凝胶过滤凝胶过滤 蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱2.2.薄层色谱操作技术薄层色谱操作技术1)1)薄层板薄层板(1)(1)载体：载体： 硅胶：表面带有硅醇基，硅胶：表面带有硅醇基，pH = 4.5pH = 4.5，经，经150150活化脱水活化脱水 后，后，4646个硅醇基个硅醇基/nm/nm2 2(2)(2)薄层参数：薄层参数： 厚度：厚度： 普通薄层普通薄层 高效薄层高效薄层 制备薄层制备薄层 0.25mm 0.2mm 0.52mm 0.25mm 0.2mm 0.52mm 活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示, ,它随含水量的增它随含水量的增加而减弱加而减弱色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱活度活度级别级别级别级别含水量含水量吸附力吸附力硅胶硅胶氧化氧化铝铝铝铝增增强强硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱(3)(3)粘合剂与添加剂粘合剂与添加剂 粘合剂a.煅石膏（CaSO42H2O)：120140烘烤24h,过200目筛，密闭备用。

b.梭甲基纤维素钠（-a)：0.21.0% 添加剂a.荧光指示剂 ZnSO4:Mn 254nm ZnSCdS:Ag 366nmb.酸、碱或缓冲液c.硝酸银溶液：饱合化合物 炔烃 反式烯烃 顺式烯烃色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱(4)(4)薄层的制备方法薄层的制备方法 手工制板手工制板 a. a.软板软板 b. b.硬板硬板( (含粘合剂含粘合剂) ) 匀浆匀浆涂布涂布凉干凉干活化活化预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板 a. a.普通薄层普通薄层预制板预制板-硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板板 b. b.高效高效薄层预制板薄层预制板-氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝- -纤维纤维素、纤维素素、纤维素- -硅胶、硅藻土硅胶、硅藻土- -硅胶等）硅胶等）色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱(5)(5)薄层板的活化薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质剂的保留能力也较高，被保留物质R R 值就小。

值就小 活化：活化：105120105120干燥干燥 0.51h 0.51h 级级 活度的标定：活度的标定： a. a.氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取偶氮苯偶氮苯30mg30mg和和对对- -甲氧基偶甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对- -氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各20mg20mg溶于四溶于四氯化碳氯化碳50ml50ml中，摇匀备用中，摇匀备用 标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液20l20l点于待测板上，用四点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的R R ，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板的花度级别的花度级别 色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱染料染料活度活度级别级别级别级别 （ R R 值值值值）偶氮苯偶氮苯0.590.590.740.740.850.850.950.95对对对对- -甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯0.160.160.490.490.690.690.890.89苏苏苏苏丹黄丹黄0.010.010.250.250.570.570.780.78苏苏苏苏丹丹红红红红0.000.000.100.100.330.330.560.56对对对对- -氨基偶氮苯氨基偶氮苯0.000.000.030.030.080.080.190.19氧化铝薄层的花度级别氧化铝薄层的花度级别色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱b.b.薄层活度的标定薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对- -二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹、苏丹红（苏丹 ）各）各20mg20mg溶于溶于1ml1ml氯仿中，摇匀备氯仿中，摇匀备用。

用 标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷- -乙乙酸乙酯（酸乙酯（9 9：1 1）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对- -二甲氨基二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述级氧化铝的活度相当级氧化铝的活度相当色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱（6 6）薄层板的预处理）薄层板的预处理 常用方法：常用方法：用氯仿用氯仿- -甲醇甲醇(1:1)(1:1)或所用展开剂先展或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在110110干燥干燥0.510.51h h，干燥器中保存备用干燥器中保存备用 除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱（7 7）烧结）烧结薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层 机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用2 2）点样：点样：（1 1）样品溶液的制备样品溶液的制备 纯品的溶解纯品的溶解 样品的提取与净化样品的提取与净化 a. a.溶剂提取法溶剂提取法 b. b.液液萃取法液液萃取法 c. c.液固萃取法液固萃取法-亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱溶剂的选择溶剂的选择 a. a.溶剂溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；样环形色谱效应； b. b.溶剂的溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样； c. c.溶剂的沸点要适中。

溶剂的沸点要适中2)(2)点样点样 样品浓度样品浓度 0.011.00%0.011.00% 点样体积点样体积 经典薄层经典薄层 15 15 l l 高效薄层高效薄层 0.10.5 0.10.5 l l 点样过多会造成原点点样过多会造成原点“超载超载”，展开剂产生，展开剂产生“绕行绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离 点样直径点样直径 经典薄层经典薄层 5mm ( 5mm (一般一般3mm)3mm) 高效薄层高效薄层 12mm 12mm 点样间距点样间距 经典薄层经典薄层 1 12cm 2cm 高效薄层高效薄层 0.5 0.5gg 荧光荧光 0.01ng 0.01ng（2 2）蒸气检出法）蒸气检出法（3 3）试剂显色法）试剂显色法 显色方法显色方法 a. a.喷雾显色喷雾显色b.b.浸渍显色浸渍显色c.c.超压衍生化超压衍生化d.d.展层展层- -显色法显色法 显色试剂显色试剂色谱技术简介色谱技术简介 Brief introduction Brief introduction 薄层色谱薄层色谱a. a.通用显色剂通用显色剂 a) a)硫酸硫酸 组成：硫酸组成：硫酸- -水（水（1:11:1），硫酸），硫酸- -甲醇或乙醇（甲醇或乙醇（1:11:1），），1.5M1.5M硫酸与硫酸与0.50.51.5M1.5M铵硫酸。

铵硫酸 方法：喷后方法：喷后110110烤烤15min,15min,不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜 色 b)0.5% b)0.5%碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液 c) c)中性中性0.05%0.05%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 易还原化合物在淡红背景下显黄斑易还原化合物在淡红背景下显黄斑 d)5% d)5%磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液方法：喷后方法：喷后120120烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气熏，则背景变无色气熏，则背景变无色b.b.专属显色剂专属显色剂色谱技术简介色谱技术简介 Brief intr。