脂肪酸的β一氧化作用—酮体的生成及测定.docx

脂肪酸的B—氧化作用一酮体的生成及测定徐云剑一、实验目的：1. 了解脂肪酸的0 —氧化作用2 . 过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量；3. 掌握测定0 一氧化作用的方法及其原理二、实验原理：在肝脏内脂肪酸经0 一氧化的作用生成乙酰辅酶A,两分子的乙酰辅酶A 可缩合生成乙酰乙酸乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成 0一羟丁酸乙 酰乙酸, 0 一羟丁酸和丙酮总称为酮体肝脏不能利用酮体,必须经血液运至肝 外组织特别是肌肉和肾脏,再转变为乙酰辅酶 A 而被氧化利用酮体作为有机 体代谢的中间产物,在正常的情况下,其产量甚微,患糖尿病或食用高脂肪膳食 时,血中酮体含量增高,尿中也能出现酮体其反应历程如下：CH31CH3|CH2|CH| ——2H-^||——HOH >CH2CH|COOH|COOH（丁酸）（丁烯酸）CH3CH3|CHOH2H|C=O >+2 H|CH2CH2|COOH|COOH（0 -羟基酸）(乙酰乙酸）脱羧、fCH[COCH33（丙酮）2 乙酰辅酶 A本实验用新鲜肝糜与丁酸保温,生成的丙酮可用碘仿反应滴定在碱性条件 下,丙酮与碘生成碘仿反应式如下：2HaOH+I ===NaOI+NaI+H O22CH COCH +3NaOI===CHI +CH COONa+2NaOH3 3 3 3剩余的碘可用标准Na2S2O3滴定NaOI+NaI+2HCl===I +2NaCl+H O221 +2Na S O ===Na S O +2NaI2 2 2 3 24 6根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠溶液体积之差,可以计算由丁酸氧 化生成丙酮的量。

三、实验材料、试剂和仪器（一） 实验材料家兔（或鸡或大鼠）的新鲜肝脏（二） 实验仪器1、匀浆机2、剪刀、镊子、漏斗3、50 毫升锥形瓶 3个4、碘量瓶4个5、试管若干及试管架6、5 毫升微量滴定管7、玻璃皿8、恒温水浴锅9、电子天平（三） 实验试剂1．0.1%淀粉溶液（溶于饱和氯化钠溶液中）2．0.9%氯化钠溶液3．0.5mol/L 正丁酸溶液：取 4.5 毫升正丁酸，用 1N 氢氧化钠溶液中和至 pH=7.6, 并稀释至 100 毫 升4．15 氯乙酸溶液5．10%氢氧化钠溶液6．10%盐酸7．0.1mol/L 液：称取 12.7 克碘和约 25 克碘化钾溶于水中，稀释到 100 毫升，混匀，用 标准硫代硫酸钠溶液标定8. 0.1mol/L 碘酸钾溶液：准确称取碘酸钾3.249克，溶于水后，倒入lOOOmL容量瓶内，加蒸馏 水至刻度线9. 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液（PH=7.6）：1/15mol/L酸氢二钠86.8毫升与1/15mol/L磷酸二氢钠13.2毫升混合10. 标准0.04mol/L硫代硫酸钠溶液：称取无水硫代硫酸钠 24.82 克和无水硫酸钠 400 克，溶于 1000mL 刚煮 沸而冷却的蒸馏水中，配成0.2mol/L的溶液，用0.1mol/L碘酸钾标定。

硫代硫酸钠溶液的标定：吸取 0.1mol/L 碘酸钾 20 毫升于锥形瓶中，加入碘化钾 1 克及 12mol/L 硫酸溶液5mL,然后用上述0.2mol/L硫代硫酸钠溶液滴至浅黄色，再加入0.1% 淀粉溶液 3 滴作指示剂，此时溶液呈蓝色，继续滴定至蓝色消退为止，计算硫代 硫酸钠溶液的准确浓度临时将已标定的硫代硫酸钠溶液稀释成0.04mol/L 四、实验操作步骤（一）肝匀浆的制备将鸡颈部放血处死，取出肝脏用0.9%NaCl溶液洗去表面的污血后，用滤 纸吸去表面溶液，称取肝组织 5g 置于玻璃皿上，倒入匀浆机中，搅碎成肝匀浆 再加入0.9%NaCl溶液，使肝匀浆总体积达10ml二）酮体的生成1．取锥形瓶 3只，按下表编号后，分别加入各试剂""""编号^ 试剂（mL） """"""123肝匀浆——2.02.0预先煮沸的肝匀浆————1/15mol/L 磷酸缓冲液（pH=7.6）4.04.04・00.5mol/L正丁酸溶液2.02.0——蒸馏水————2.043 °C水溶液中保温40min15%三氯乙酸溶液3.03.03・00.5mol/L正丁酸溶液————2.0蒸馏水2.02.0——放置5min后，过滤，滤液分别收集于试管中三）酮体的测定1．取碘量瓶 4 只，按下表编号后加入有关试剂。

试剂（mL） 瓶号 f滤液1号管滤液2号管滤液3号管蒸馏水0.1mol/L碘液10%氢氧化钠1号瓶5.0——————3.03.02号瓶——5.0————3.03.03号瓶————5.0——3.03.04号瓶——————3.03.03.0加完试剂后摇匀，放置10min再向各碘量瓶中滴加10%HCl溶液2—5ml,使各瓶溶液中和至中性或微酸性然后用 0.02mol/L Na2S2O3 滴定至碘量瓶中溶液呈浅黄色时，往瓶中滴加数滴0.1%淀粉溶液2-3滴作为指示剂，使 瓶中溶液呈蓝色并用 0.04mol/L Na2S2O3 继续滴定至碘量瓶中溶液的蓝 色恰好刚刚消褪为止记下滴定时所用去的 Na2S2O3 溶液的毫升数，按下 式计算样品中丙酮的生成量四）理论计算实验中所用肝匀浆中生成的丙酮量（mmol）=（A—B） XCX1/6 式中：A为滴1号样品所消耗的0.04mol/L Na2S2O3溶液的毫升数； B为滴定2号样品所消耗的0.04mol/L Na2S2O3溶液的毫升数； C 为 Na2S2O3 的浓度（mol/L）五、注意事项1、 在低温下制备新鲜的肝糜，以保证酶的活性2、 加HCl溶液后即有I2析出，I2会升华，所以要尽快进行滴定，滴定的速 度是前快后慢，当溶液变浅黄色后，加入指示剂就要慢慢一滴一滴的滴。

3、 滴定时淀粉指示剂不能太早加入，只有当被滴定液变浅黄色时加入最好， 否则将影响终点的观察和滴点结果六、实验报告保留实验的有效数据，计算结果并分析讨论七、思考题1. 为什幺说做好本实验的关键是制备新鲜的肝糜？2. 什幺叫酮体？为什么正常代谢时产生的酮体量很少？在什幺情况下血中 酮体含量增高，而尿中也能出现酮体？3. 为什么测定碘仿反应中剩余的碘可以计算出样品中丙酮的含量？4. 实验中三氯乙酸起什幺作用？。