生化——赖关朝生化检验的性能验证.ppt

生化检验方法的性能验证,广东省职业病防治院 赖关朝,检验程序的性能特征 测量正确度、 测量准确度、 测量精密度（含测量重复性和测量中间精密度）、 测量不确定度、 分析特异性（含干扰物）、 分析灵敏度、 检出限和定量限、 测量区间、 诊断特异性和诊断灵敏度5.5 检验过程 5.5.1.2 检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括正 确度、精密度和可报告范围 5.5.1.3 如果使用内部程序，如自建检测系统，应有程序评 估并确认正确度、精密度、可报告范围、生物参考区间等 分析性能符合预期用途 5.5.2生物参考区间评审内容应包括：参考区间来源、检测 系统一致性、参考人群适用性等，评审应有临床医生参加 CNAS-CL38(临床化学应用说明),对于生化检验方法，至少应进行以下3方面的确认 正确度 精密度和 可报告范围 对非配套或自建检测系统，还须对 生物参考区间等分析性能符合预期用途 生化检验方法的性能指标需确认的还有很多EP5-A 精密度 EP6-A 定量分析方法线性评价 EP7-A 临床化学干扰实验 EP9-A2 使用患者样本的方法学比对及偏倚评价 EP10-A2 定量临床实验方法的初步评价 EP12-A 定性实验性能评价 EP14-A 基质效应的评价 EP15-A 精密度和准确度性能的用户证实 EP17-A 检出限和定量检出限确定方案 C28-A2 如何定义和确定临床检验的参考区间批准 指南,CLSI(临床实验室标准化协会，前称NCCLS)系列标准或指南,CLSI EP指南文件为检验方法的性能确认提供理论和实践基础 1、正确度EP9 2、精密度EP5 3、分析灵敏度EP17 4、分析测量范围EP6 5、干扰性EP7 6、参考区间CLSI C28 7、基质效应EP14 8、性能初步评价(截距、斜率、交叉污染、非线性、漂移) EP10 9、测量不确定度(GUM),正确度评价EP9,测量正确度 正确度 • 无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度 • 注1. 测量正确度不是一个量，不能用数值表示。

• 注2. 测量正确度与系统测量误差有关，与随机测量误差无关 • 注3. “测量正确度”和“测量准确度”不可混用,正确度评价EP9,评价的指标： 偏倚、系统误差 评价方式： (1)测定有证标准物质含量 (2)参加 PT或能力验证活动，单次或全年累计的PT得分，也可作为评价方法 (3) 正确度验证物质 (4)和准确可靠的方法比较,正确度评价EP9,正确度评价--用患者样本进行方法比较 利用临床病人样本，比较两个测量程序间的结果的偏倚 • 确认和建立bias：EP9-Method comparison and bias estimation using patient samples. • 验证正确度：EP15-User verification of performance for trueness and precision. 准确的方法：参考方法、公认的可靠方法 • 特点：精密度好、正确度高 • 其他：特异性、分析测量范围、参考区间等 • 比对方法的选择 − 厂家说明书中的方法：厂家声称的标准 − 现有方法（欲改动、用到新仪器上时）,正确度评价EP9,使用EP9-A3评价偏倚 • 样本: 至少40份 • 比对方法：最好是参考方法；变异和偏倚已知，且足够小。

• 测定：单次或者重复多次测定；实验方法和比对分别进行； • 天数：视实验目的而定（校准、试剂批号、人员等） • 数据处理：偏差图（差值图），散点图； X轴：x，x-y；,正确度评价EP9,差值图-恒定偏差,正确度评价EP9,差值图-恒定百分偏差,正确度评价EP9,标本选择有问题,正确度评价EP9,混合差值型,正确度评价EP9,差值图-偏倚随浓度变化,正确度评价EP9,散点图,正确度评价EP9,回归分析 • OLR(普通最小二乘法）：比较方法为参考方法；标准差恒 定,正确度评价EP9,Passing Bablok回归：混合变异（低值标准差恒定，高值 CV恒定）,正确度评价EP9,• WLR(加权最小二乘法）：变异系数恒定,正确度评价EP9,Deming 回归：比对方法有随机误差正确度评价EP9,结果判断,正确度评价EP9,正确度评价EP9,正确度评价EP9,正确度评价EP9,• 95% CI, α=0.05（双侧）；t=2.861 • 99% CI, α=0.01（双侧）；t=2.093 • 𝑏的CI： • 99%𝐶𝐼: 𝑏 ± 2.861. 𝑆𝑏 / 𝑛=[-0.27, 5.27]mg/dL • 95%𝐶𝐼: 𝑏 ± 2.093. 𝑆𝑏 / 𝑛=[0.47, 4.53]mg/dL • b%的CI: • 99%𝐶𝐼: 𝑏% ± 2.861. 𝑆𝑏%/ 20=[-0.37, 5.09]% • 95%𝐶𝐼: 𝑏% ± 2.093. 𝑆𝑏%/ 20=[ 0.36, 4.36]%,𝑏 =2.5mg/dL 𝑆𝑏 = 4.33mg/dL; n = 20,𝑏% =2.36% 𝑆𝑏% = 4.36; n = 20,判断  如果偏倚小于厂家指标（实验室指标），验证通过；  如果偏倚大于厂家指标，但是在验证限的范围内，验证通过。

 用户可增加10-20样本，用所有样本的结果来进行统计，以增加统计效能  如果偏移不在验证限范围内，验证不通过，联系厂家以求协助精密度评价EP5,精密度: • 在规定条件下获得的独立测量结果之间的接近程度 • 重复性(repeatability) • 期间精密度(intermediate precision) • 重现性(reproducibility) 不精密度（imprecision): • 在规定条件下获得的独立测量结果之间的离散程度 期间精密度(intermediate precision)：在期间精密度条件下的精密度  期间精密度条件：  三个相同：方法、检测项目、机构；  四个变化：时间、校准、操作者、设备  四个包括：批间、天间、设备内、实验室内,精密度评价EP5, 重复性： 在相同检测条件下，对同一被测量连续测定结果间的一致程度  重复性条件： 七个相同：方法、检测项目、机构、时间、校准、操作者、设备  重现性 在不同测试条件下，对同一检测项目进行检测所得结果的接近程度  再现性条件： 两个相同：方法、检测项目 五个不同：实验室、操作者、设备、（时间、校准）,精密度评价EP5,分析（批）： 检测系统正确度和精密度稳定、不发生变化的时 间区间，通常不大于24小时，也不可小于仪器 规定的最小范围。

精密度评价EP5,精密度的确认 最低条件-At least 20个实验日 每个实验日：两个（实验）批 每个（实验）批：两个浓度水平、每个浓度水平两个测试 （样本）、一个室内质控样本（尽量使用实验室常规的IQC SOP） 如果仪器没有明显“批”（如干化学，分光光度计）： 每个实验室日：每个浓度水平4个样本，分为两对（pairs）， 两样本/对，分别在不同的时间，在重复条件下，进行测定精密度评价EP5,总体思路 • 前五天：方案熟悉期； • 接下来15天，继续试验； • 每五天汇总一次室内质控，重新计算质控限；检查数据可 接受性，如果在此阶段发现离群点，不要轻易舍去 • 如果数据呈现趋势性变化，应舍去方案熟悉期（前五天） 的数，另外补充5天的实验数据精密度评价EP5,方案熟悉期  目的：熟悉仪器设备，特别是对新设备；  时间：熟练操作仪器，5天；  数据：可用，前提是质控数据可接受；  质控程序：常规IQC SOP，质控数据统计，其精密度结 果应和厂家规定的一致；  其他性能评估：排除线性、正确度等问题?  初步评价：2个以上浓度水平的样本，分成20份，计算标 准差或者CV，其结果应在预期范围内。

精密度评价EP5,正式试验期  精密度的种类 重复性、批间精密度、日内精密度、日间精密度、实验室内精密度  目标精密度 实验室的某一设备或者方法的重复性、实验室内精密度；  试剂和校准物 可以使用单一批号，但在结果中应予以说明；这种情况下，可能低估长期的实验室内不精密度多个批号会更具代表性精密度评价EP5, 实验材料  基质：和临床样本尽量接近；首选冰冻混合样本；次选稳定、蛋白质基质的商品  浓度：推荐2个浓度水平；每个浓度分别评价，如果其SD或者CV相同，则认为其精密度水平恒定；否则，可能需要测定更多浓度水平的样本 参考： 1）临床：测量区间范围有意义的（高低值）区间，第三个浓度水平可以考虑医学决定水平； 2）和厂商数据比较：参考说明书提供的浓度精密度评价EP5, 分析批、天数  每天：两个实验批；  每批：浓度水平分成两个样本；常规IQC；  每天或每批：改变样本和IQC的顺序；  可能时：每批至少分析10各临床病人样本，以模拟实 际操作情况；  每批间隔：两个小时以上精密度评价EP5,数据记录  EXCEL 表格；  质控程序  原则：至少一个质控样本；  数据统计：已有成熟的IQC SOP，按照SOP； 以前没有IQC SOP，±3S，警告；±4S,失控；  离群点检出  批内重复两点差值超过初步评价标准差的5.5倍（前提： 被测量浓度水平解决）；  调查原因，重新测定。

精密度评价EP5,不精密度计算  重复性,精密度评价EP5,1,4 批间标准偏差,3 日间标准偏差,室内精密度,2,5合成,精密度验证—实验室内精密度验证 Sl 厂家指标：  计算验证值 • 结论：实验结果虽然超过厂商指标，但是小于验证值，故 认为实验结果同厂商申明的实验室内精密度一致，验证通 过分析灵敏度EP17,灵敏度、分析灵敏度、检出限、检测限意思相同,分析灵敏度EP17,分析灵敏度EP17,扣除空白后,检出限,分析测量范围EP6,临床可报告范围 Clinically Reportable Range) • 可采用对标本的稀释、浓缩或者其他预处理用于扩展直接 分析测量下的分析物值的范围 可报告范围 Reportable Range • 实验室可建立或验证仪器或检测系统测量相应的准确实验 结果值的范围CLIA） 线性范围 Linear Range • 是指系统最终的输出值（浓度或活性）与被分析物的浓度 成正比的范围，此时的非线性误差应低于允许误差 分析测量范围 Analytical Measurement Range • 方法直接测量标本，而不需要任何的稀释、浓缩或者其它 预处理等过程下，测量结果总误差符合要求的分析物浓度 的范围。

CAP）  符合方法学性能，测量总误差满足方法规定的性能指标分析测量范围EP6,实验内容 • 浓度水平：5个（或以上）； • 材料：标准溶液、厂家或者PT机构提供的线性材料；混合患者样本、添加分析物； • 稀释液：水、生理盐水、牛蛋白或者血清白蛋白溶液、低浓度样本、空白血清 • 制备稀释物的程序：如前述，高低浓度样本比例混合；• 重复测定次数：3次 • 数据分析：绘图，手工绘制通过所有点的最佳直线，如果不能通过所有点，应首先通过较低浓度点；对于直线不通过的点，估算非线性的系统误差将系统误差与该浓度的预期随机误差（2s）之和与TEa相比较分析测量范围EP6,分析测量范围EP6,分析测量范围EP6,分析测量范围EP6,线性评价-EP6 • 设备熟悉期：在控、校准、样本准备等； • 注意生物安全防护； • 样本（浓度水平）数量： 验证：4-6个样本，覆盖线性范围，3-4次测定；建立：9-11个样本，超出20-30%预期线性范围，3-4次测定 多项回归分析 • 将上述数据进行多项回归分析，得出一级、二级与三级多项式，此步可采用统计学软件完成 阶数 多项式 回归自由度（Rdf。