中药红曲米鉴别方法、特征图谱检测方法、检查方法、浸出物测定方法、含量测定方法.pdf

T/SDTCMA- 5 - 规范性规范性附录附录 A A 红曲米鉴别方法红曲米鉴别方法 A.1 显微鉴别 取本品粉末，过四号筛，挑取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液、水合氯醛试液或其他适宜的试液，盖上盖玻片，加热透化，置显微镜下观察显微特征：粉末红色或紫红色糊化淀粉粒较多，多聚集成团，或单个散在；淀粉粒多为单粒，类圆形、长圆形或不规则多角形；菌丝细长弯曲，有分枝，直径 13m A.2 薄层鉴别 取本品粉末 0.5g，加 75%乙醇 5ml，超声处理 20 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液另取红曲对照药材 0.5g，同法制成对照药材溶液再取洛伐他汀对照品，加 75%乙醇制成每1ml 含 1mg 的溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法（中国药典 2020 年版通则 0502）试验，吸取供试品溶液 510l，对照药材溶液 10l，对照品溶液 2l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以二氯甲烷-丙酮（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液，在 105加热至斑点显色清晰供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点 T/SDTCMA- 6 - 规范性规范性附录附录 B B 红曲米特征图谱检测方法红曲米特征图谱检测方法 B.1 供试品溶液的制备 取本品粉末 0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75%乙醇 15ml，称定重量，超声处理（功率 500W，频率 40kHz）30 分钟，取出，放冷再称定重量，用 75%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

B.2 参照物溶液的制备 同含量测定项下对照品溶液的制备 B.3 测定 B.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相 A ，以 0.02% 磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为 1.0ml/min；检测波长为 237nm理论板数按洛伐他汀峰计算应不低于 10 000 时间（分钟） 流动相 A（%） 流动相 B（%） 020 3550 6550 2025 5055 5045 2550 55 45 5070 5580 4520 B.3.2 测定 分别吸取参照物溶液和供试品溶液各 10l，注入高效液相色谱仪，以相对保留时间对色谱峰进行定性 B.3.3 结果判定 供试品色谱中应呈现 4 个特征峰，以参照物峰相对应的峰为 S 峰，计算其他各特征峰与 S 峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的10%之内规定值为 0.70（峰 1） 、0.77（峰 2） 、1.00（S 峰） 、1.57（峰 4） 对照特征图谱 峰 1:开环洛伐他汀 峰 3（S）洛伐他汀 T/SDTCMA- 7 - 规范性规范性附录附录 C C 红曲米检查方法红曲米检查方法 C.1. 水分 取样品，粉碎成细粉，取 25g，置干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，开启瓶盖在 105干燥 5 小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷 30 分钟，精密称定，再在上述温度干燥 1 小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过 5mg 为止。

根据减失的重量，按下式： 水分（%） =1 + 2 100%W1:称量瓶重，g ； W:取样量，g； W2:干燥后重量，g； 计算含水百分数，照上述方法做一个平行样，测定中要求称量准确度为 0.0001g，最后求其平均值即为含水量，以%表示，含水量应不得过 15.0%两份试样测定结果 RSD2.0%，否则重新测定 C.2 重金属及有害元素（原子吸收分光光度法或电感耦合等离子体质谱法任选其一） C.2.1 原子吸收分光光度法 C.2.1.1 铅的测定（石墨炉法） C.2.1.1.1 测定条件 参考条件：波长 283.3nm，干燥温度 100120，持续 20 秒；灰化温度 400750，持续2025 秒；原子化温度 17002100，持续 45 秒 C.2.1.1.2 铅标准贮备液的制备 精密量取铅单元素标准溶液适量，用 2%硝酸溶液稀释，制成每 1ml 含铅（Pb）1g 的溶液，即得（05贮存） C.2.1.1.3 标准曲线的制备 分别精密量取铅标准贮备液适量，用 2%硝酸溶液制成每 1ml 分别含铅 0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng 的溶液分别精密量取 1ml，精密加含 1%磷酸二氢铵和 0.2%硝酸镁的溶液 0.5ml，混匀，精密吸取 20l 注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

C.2.1.1.4 供试品溶液的制备 法 取供试品粗粉 0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸 35ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解（按仪器规定的消解程序操作） 消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续缓缓浓缩至 23ml，放冷，用水转入 25ml 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得同法同时制备试剂空白溶液 法 取供试品粗粉 1g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4：1）混合溶液 510ml，混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜置电热板上加热消解，保持微沸，若变棕黑色，再加硝酸-高氯酸（4：1）混合溶液适量，持续加热至溶液澄明后升高温度，继续加热至冒浓烟，直至白烟散尽，消解液呈无色透明或略带黄色，放冷，转入 50ml 量瓶中，用 2%硝酸溶液洗涤容器，洗液T/SDTCMA- 8 - 合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得同法同时制备试剂空白溶液 法 取供试品粗粉 0.5g，精密称定，置瓷坩埚中，于电热板上先低温炭化至无烟，移入高温炉中，于 500灰化 56 小时（若个别灰化不完全，加硝酸适量，于电热板上低温加热，反复多次直至灰化完全） ，取出冷却，加 10%硝酸溶液 5ml 使溶解，转入 25ml 量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

同法同时制备试剂空白溶液 C.2.1.1.5 测定法 精密量取空白溶液与供试品溶液各 1ml，精密加含 1%磷酸二氢铵和 0.2%硝酸镁的溶液 0.5ml，混匀，精密吸取 1020l，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中铅（Pb）的含量，计算，即得 C.2.1.2 镉的测定（石墨炉法） C.2.1.2.1 测定条件 参考条件：波长 228.8nm，干燥温度 100120，持续 20 秒；灰化温度 300500，持续2025 秒；原子化温度 15001900，持续 45 秒 C.2.1.2.2 镉标准贮备液的制备 精密量取镉单元素标准溶液适量，用 2%硝酸溶液稀释，制成每 1ml 含镉（Cd）1g 的溶液，即得（05贮存） C.2.1.2.3 标准曲线的制备 分别精密量取镉标准贮备液适量，用 2%硝酸溶液稀释制成每 1ml 分别含镉 0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng 的溶液分别精密吸取 10l，注入石墨炉原子化器，测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线 C.2.1.2.4 供试品溶液的制备 同铅测定项下供试品溶液的制备。

C.2.1.2.5 测定法 精密吸取空白溶液与供试品溶液各 10-20l，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度（若供试品有干扰，可分别精密量取标准溶液、空白溶液和供试品溶液各 1ml，精密加含 1%磷酸二氢铵和0.2%硝酸镁的溶液 0.5ml，混匀，依法测定） ，从标准曲线上读出供试品溶液中镉（Cd）的含量，计算，即得 C.2.1.3 砷的测定（氢化物法） C.2.1.3.1 测定条件 采用适宜的氢化物发生装置，以含 1%硼氢化钠和 0.3%氢氧化钠溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1100）为载液，氮气为载气，检测波长为 193.7nm C.2.1.3.2 砷标准贮备液的制备 精密量取砷单元素标准溶液适量，用 2%硝酸溶液稀释，制成每 1ml 含砷（As）1g 的溶液，即得（05贮存） T/SDTCMA- 9 - C.2.1.3.3 标准曲线的制备 分别精密量取砷标准贮备液适量，用 2%硝酸溶液稀释制成每 1ml 分别含砷 0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng 的溶液分别精密量取 10ml，置 25ml 量瓶中，加 25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml，摇匀，加 10%抗坏血酸溶液（临用前配制）1ml，摇匀，用盐酸溶液（20100）稀释至刻度，摇匀，密塞，置 80水浴中加热 3 分钟，取出，放冷。

取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线 C.2.1.3.4 供试品溶液的制备 同铅测定项下供试品溶液的制备中的 A 法或 B 法制备 C.2.1.3.5 测定法 精密吸取空白溶液与供试品溶液各 10ml，照标准曲线的制备项下，自“加 25%碘化钾溶液（临用前配制）1ml”起，依法测定从标准曲线上读出供试品溶液中砷（As）的含量，计算，即得 C.2.1.4 汞的测定（冷蒸气吸收法） C.2.1.4.1 测定条件 釆用适宜的氢化物发生装置，以含 0.5%硼氢化钠和 0.1%氢氧化钠的溶液（临用前配制）作为还原剂，盐酸溶液（1100）为载液，氮气为载气，检测波长为 253.6nm C.2.1.4.2 汞标准贮备液的制备 精密量取汞单元素标准溶液适量，用 2%硝酸溶液稀释，制成每 1ml 含汞（Hg）1g 的溶液，即得（05贮存） C.2.1.4.3 标准曲线的制备 分别精密量取汞标准贮备液 0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置 50ml 量瓶中，加20%硫酸溶液 10ml、5%高锰酸钾溶液 0.5ml，摇匀，滴加 5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，用水稀释至刻度，摇匀。

取适量，吸入氢化物发生装置，测定吸收值，以峰面积（或吸光度）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线 C.2.1.4.4 供试品溶液的制备 法 取供试品粗粉 0.5g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸 35ml，混匀，浸泡过夜，盖好内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内进行消解（按仪器规定的消解程序操作） 消解完全后，取消解内罐置电热板上，于 120缓缓加热至红棕色蒸气挥尽，并继续浓缩至 23ml，放冷，加 20%硫酸溶液 2ml、5%高锰酸钾溶液 0.5ml，摇匀，滴加 5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入 10ml 量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得同法同时制备试剂空白溶液 法 取供试品粗粉 1g，精密称定，置凯氏烧瓶中，加硝酸-高氯酸（4：1）混合溶液 510ml，混匀，瓶口加一小漏斗，浸泡过夜，置电热板上，于 120140加热消解 48 小时（必要时延长消解时间，至消解完全） ，放冷，加 20%硫酸溶液 5ml、5%高锰酸钾溶液 0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，转入 25ml 量瓶中，用水洗涤容器，洗液合并于量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，必要时离心，取上清液，即得。

同法同时制备试剂空白溶液 T/SDTCMA- 10 - C.2.1.4.5 测定法 精密吸取空白溶液与供试品溶液适量，照标准曲线制备项下的方法测定从标准曲线上读出供试品溶液中汞（Hg）的含量，计算，即得 C.2.1.5 铜的测定（火焰法） C.2.1.5.1 测定条件 检测波长为 324.7nm，采用空气-乙炔火焰，必要时进行背景校正 C.2.1.5.2 铜标准贮备液的制备 精密量取铜单元素标准溶液适量，用 2%硝酸溶液稀释，制成每 1ml 含铜（Cu）10g 的溶液，即得（05贮存） C.2.1.5.3 标准曲线的制备 分别精密量取铜标准贮备液适量，用 2%硝酸溶液制成每 1ml 分别含铜 0g、0.05g、0.2g、0.4g、0.6g、0.8g 的溶液依次喷入火焰，测定吸光度，以吸光。