第五章试管苗的继代增殖培养.ppt

第五章 试管苗的继代增殖培养 第一节 试管苗的繁殖一、试管苗快速繁殖的类型二、提高增殖率的方法第二节 继代增殖培养应注意的问题一、分化再生能力衰退现象二、驯化现象三、玻璃化现象… 第一节 试管苗的繁殖o一、试管苗快速繁殖的类型o（一）无菌短枝型：将待繁殖的材料剪成带一叶的单芽茎段，转入成苗培养基，一定时间后可成苗，再剪成带一叶的单芽茎段，继代又可成苗o（二）丛生芽增殖型：从芽到芽o（三）器官发生型：分为直接和间接两种形式，直接的器官发生是指较少发生或不发生愈伤组织而直接从外植体表面再生不定芽 （四）胚状体发生型o从植物叶片、子房、花药、未成熟胚等诱导体细胞发生o其发生和成苗过程类似合子胚或种子这种胚状体具有数量多、结构完整、易成苗和繁殖速度快的特点，是植物离体无性繁殖最快的方法，o是人工种子和细胞工程的前提，受到国内外的普遍重视 （五）原球茎型o原球茎是一种类胚组织，培养兰花类的茎尖或腋芽可直接产生原球茎，可以分化成植株 二、提高增殖率的方法o（一）选用最佳的培养基o1、促进腋芽形成与生长调节物质o促进芽丛生长的培养基：加入0.1～10.0 mg·L-1的细胞分裂素，偶然也用较高浓度。

应用最多的是6-苄基氨基嘌呤（BA），其次是激动素（6-糠基腺嘌呤，KT）和2-异戊烯基腺嘌呤（2ip），玉米素（ZT）用的较少； o除细胞分裂素以外，培养基中还经常加入低浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但要防止愈伤组织化常用和生长素是NAA（萘乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IAA（吲哚乙酸），浓度在0.1∽1.0mg.L-1 o培养基中还经常加入低浓度的生长素，以促进腋芽的生长，但要防止愈伤组织化常用的生长素是NAA、IBA、IAA，浓度在0.1∽1.0mg.L-1o有时还加入低浓度的GA3（赤霉素），以促进腋芽的伸长 2、诱导不定芽的形成与生长调节物质 o诱导外植体形成不定芽时，一般使用细胞分裂素的浓度高于生长素浓度的配比，但也经常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近于1的配比o常用的细胞分裂素是BA、KT和玉米素，浓度在0.1∽10.0 mg.L-1有的还加入低浓度的2，4-D才能诱导不定芽的产生 3、促进胚状体的形成和增殖与生长调节物质 o由体细胞形成的胚状体叫体细胞胚（Somatic embryo）o生长素在体细胞胚胎发生中起着重要作用一般是在含有丰富还原氮的培养基上，加有生长素，特别是2，4-D以诱导胚状体的发生，然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基上使其成熟、萌发和生长。

（二）改善培养环境条件： 1、温度大多数植物最适的培养温度在23～32℃之间,常用25℃±2℃的温度一般低于15℃培养的组织生长出现停顿，而高于35℃对生长也不利 2、光照一般认为1 000～5 000Lx即可满足其需要，3、湿度一般要求70%∽80%的相对湿度，过低应洒水，过高应通风除湿 第二节 继代增殖培养应注意的问题一、分化再生能力衰退现象 1、经多次继代后，会逐渐减少或丧失愈伤组织中含有从外植体启动分裂时就包括进来的成器官中心（分生组织），导致维管束难以形成，只能保持无组织的细胞团o也有人认为在继代过程中，逐渐消耗了母体中原有与器官形成有关的特殊物质 o2、衰退可能也与内源生长调节物质的减少或丧失有关o3、可能是细胞不正常染色体聚集导致形态发生能力的丧失 o4、植物材料 o5、培养基及培养条件o6、继代培养次数o7、季节： 二、驯化现象o在植物组织培养中，发现一些植物组织经长期继代培养，发生了一些变化开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长、这种现象称为“驯化”（acclimation） 三、玻璃化现象o（一）玻璃苗的特征和发生的因素o离体繁殖中出现的玻璃化芽苗，过度含水化，叶片肿胀，呈透明或半透明，水浸状，失绿，脆弱易碎；o玻璃化可能是培养基渗透势不当所致。

o有人发现琼脂和蔗糖浓度与玻璃化成负相关.o培养基中的植物激素也和玻璃化程度有关o玻璃苗是培养瓶内气体与外界交换不畅造成的，（二）控制和克服玻璃苗的措施o1、适当提高培养基中蔗糖含量或加入渗透剂，降低培养基中的渗透势；o2、适当降低培养基中的细胞分裂素和赤霉素的浓度；o3、增加自然光照；o4、改善培养器皿的气体交换状况； o5、在培养基中加入间苯三、多效唑、矮壮素、活性炭、对防止产生玻璃化有良好作用。