乙酰肝素酶、血管内皮生长因子及核因子-kB在原发性膜性肾病患者肾小球内表达变化及意义.doc

乙酰肝素酶、血管内皮生长因子及核因子-kB在原发性膜性肾病患者肾小球内表达变化及意义【摘 要】目的：探讨乙酰肝素酶(Heparanase,Hpa)、血 管内皮生长因子(VEGF)和核因子-kB (NF-kB)在原发性膜 性肾病(idiopa thic membranous nephropa thy, I MN)患者 肾小球中的表达及与蛋白尿、血肌酊的关系方法：用免疫 组化法检测36例IMN患者与6例正常对照者肾小球内Hpa、 NF-kB和VEGF的表达情况结果：Hpa、VEGF和NF-kB在对 照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞仅有少 量表达IMN组肾小球内Hpa、VEGF、NF-kB表达较对照组均 明显增强(pO. 05) o肾小球内VEGF表达差异有显著性(p0. 05) (表 2)2. 2.2 VEGF表达情况VEGF在对照组正常肾组织的肾小 球基底膜及肾小管上皮细胞有少量表达IMN组肾小球内 VEGF表达较对照组明显增强(pO. 05)2. 3免疫组化指标与临床指标相关性分析Hpa与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，一0. 54,pO. 05, 无统计学意义，在I期I MN VEG F与24小时尿蛋白定量呈正 相关关系，r=0. 38,p<0. 05,有统计学意义；NF-kB与24小时 尿蛋白定量呈正相关关系，r=0. 50,p<0. 05,有统计学意义。

三者与血肌酉干均无相关性2.4免疫组化指标相关性分析Hpa与VEGF之间无明显 相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，r=0. 39,p<0. 05, 有统计学意义Hpa与NF-kB之间正相关关系， r=0.40,p<0. 05,有统计学意义NF-kB与VEGF之间无明显 相关性，但在I期IMN二者呈正相关关系，尸0.49, P<0. 01, 有统计学意义3讨论IMN的病因及发病机理并不十分清楚可能涉及到基因 多态、自身免疫、炎症反应、矫枉失衡等多方面的问题IMN 病变主要位于肾小球滤过膜，以肾小球脏层上皮细胞下嗜复 红物质广泛沉积、GBM空泡变、僵硬、增厚、“钉突”形成、 链环变等为特征肾小球滤过膜主要包括有孔的内皮细胞、肾小球基底膜 (GBM)和上皮细胞IV型胶原形成GBM的基本骨架，其间 还填充着许多物质，包括层粘连蛋白、纤维连接蛋白、巢蛋 白、HSPG等以上成份的改变均可能影响肾小球的滤过功能 而出现蛋白尿HSPG由一个核心蛋白、硫酸乙酰肝素(Heparin sulfate, Hs)及GAGs侧链组成HSPG是ECM中非结构蛋白的重要组 份，其通过与ECM及细胞的结合发挥生物学功能。

HSPG的作 用主要是为肾小球滤过膜的电荷屏障提供阴电荷，也可作为 足细胞、内皮细胞和壁层上皮细胞的附着点Hs为IISPG带 阴离子的侧链Hpa于D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡萄糖糖昔键 裂解长链Hs,释放Hs相连的致炎因子，破坏HSPG,从而调 节细胞表面和ECM与HSPG结合的各种活性因子的生物学作 用，同时还可使HSPG 结合的负电荷减少，使GBM的电荷 屏障受损HSPG的减少可导致GBM的选择通透性改变以及肾 小球上皮细胞和内皮细胞锚连位点的丧失，同时释放与HSPG 结合的多种生长因子，包括成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)、 血管内皮生长因子(VEGF)等相关生长因子的释放可修复 GBM,如不能修复则使GBM形成瘢痕［9］Hpa可诱导炎症基 因表达，并可激活内皮细胞产生直接的血管源性反应Hpa 的活性与免疫细胞穿透ECM屏障有关，Hpa抑制剂具有抗炎 活性本实验结果表明：Hpa在对照组正常肾小球内仅少量 表达，而在IMN组肾小球内的表达I期与II期均明显高于 对照组，且与24小时尿蛋白定量呈正相关关系提示Hpa 参与IMN蛋白尿的形成此研究有别于Holt等的结果［12］ 与Vicki等的动物实验结果一致［3］。

Hpa降解或破坏HSPG时可以释放VEGFVEGF可能具有 正反两方面的作用首先VEGF可能具有肾脏保护作用因 其有促进内皮细胞增殖、分化、存活、促进血管生长、建立 侧枝循环和改善血流动力学等生物学作用另有观点认为 VEGF对肾脏也有有害的一面VEGF能够减少GBM的阴离子 数目，VEGF分泌的异常增加可以导致肾小球滤过膜对血浆蛋 白通透性的增加，从而导致蛋白尿的形成本实验结果显示 VEGF在对照组正常肾小球有少量表达，而在IMN表达增加， 但随分期分组的不同其表达量不同，II期IMN患者肾小球内 VEGF的表达显著低于I期IMN患者，与24小时尿蛋白定量 无明显相关性，I期IMN患者肾小球内VEGF表达与24小时 尿蛋白定量呈正相关关系有别于Honkanen等的结果，此 现象可从不同角度理解：①VEGF并非IMN患者肾小球损害与 尿蛋白增加的主要参与者相反,VEGF可能以保护血管为主, 有利于IMN向好的方向转归，即VEGF高表达者病理损害轻, 低表达者病理损害重②也可理解为VEGF表达减少可能与 IMN进展、足细胞减少、分泌VEGF减少有关VEGF是与HSPG相连的生长因子，即HSPG是VEGF的储 存池，Hpa水解HSPG的同时释放VEGF,且内源性Hpa调控 VEGF的基因表达。

故VEGF随着Hpa的增多而增多另一方 面VEGF又可减少Hpa的释放［12］本实验结果显示：Hpa表 达与VEGF表达无明显相关性，但在I期IMN二者之间呈正 相关关系以上结果表明：Hpa、及VEGF两因子之间具有一 定的相关性核因子(NF-kB)是一种具有多向性调节作用的核转 录因子，具有有利和有害两方面的作用一方面参与某些细 胞生长调控；抗细胞凋亡作用［14］另一方面NF-kB在足细 胞内被激活，可参与免疫和炎症反应，与蛋白尿形成有关 ［15-16］ o本实验结果显示：NF-kB在正常对照组肾小球内仅 少量表达，在IMN组患者肾小球内表达明显增加，且与24 小时尿蛋白定量成正相关关系提示NF-kB参与IMN蛋白尿 的形成NF-kB调节Hpa的表达，阻断NF-kB信号转导途径下调 Hpa表达NF-kBp65活性与Hpa表达水平呈正相关关系本 实验结果显示：NF-kBp65活性与Hpa表达呈正相关关系提 示IMN肾小球内Hpa. NF-kB二者对IMN蛋白尿形成的影响 不是孤立的，二者之间可能有一定的协同作用但有实验发 现NF-kB抑制剂不影响Hpa释放［13］Hpa水解HSPG的同时 释放VEGF,且内源性Hpa调控VEGF的基因表达。

故VEGF随 着Hpa的增多而增多另一方面VEGF又可减少Hpa的释放 ［17］VEGF的表达由NF-kB调控，NF-kB表达增多，VEGF的 表达也随之增多，阻断NF-kB活性可抑制VEGF的活性［18］ 本实验结果显示：Hpa表达与VEGF表达无明显相关性，但在 I期IMN二者之间呈正相关关系NF-kB表达与VEGF表达无 明显相关性，但在I期IMN二者之间呈正相关关系也有实 验显示，用NF-kB反义核昔酸抑制肿瘤坏死因子-a (TNF-a ) 诱导的血管生成的同时，能下调TNF-a介导的bFGF和VEGF 的表达，从而提示NF-kB对VEGF的活性确有潜在的正向调 节作用以上结果表明：Hpa、NF-kB及VEGF三因子之间具 有一定的相关性，其中NF-kB起中心调节作用综上所述，本文探讨了 NF-kB、Hpa及VEGF在IMN患者 肾小球内的表达变化及意义实验结果提示肾小球内NF-kB. Hpa的异常表达对IMN的发展及蛋白尿的形成具有一定作用， 而适当水平的VEGF并非IMN患者肾损害的主要参与者，相 反其对肾小球滤过膜可能具有一定的保护作用通过对IMN 患者肾小球内NF-kB. Hpa及VEGF表达变化的认识，可以为 IMN的适当治疗提供依据。

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