环境微生物课件(实训部分)—培养基的配制及玻璃器皿的包扎.ppt

实训二实训二 培养基的配置及玻璃器皿的包扎培养基的配置及玻璃器皿的包扎一、目的一、目的一、目的一、目的 1 1、掌握培养基的制备方法掌握培养基的制备方法2 2、掌握高压蒸气灭菌技术掌握高压蒸气灭菌技术3 3、熟悉玻璃器皿的包扎方法熟悉玻璃器皿的包扎方法4 4、掌握干热灭菌法灭菌技术掌握干热灭菌法灭菌技术二、仪器和材料二、仪器和材料二、仪器和材料二、仪器和材料1 1、溶液或试剂、溶液或试剂、溶液或试剂、溶液或试剂 10%HCl10%HCl、10%NaOH10%NaOH、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH1mol/L NaOH、1mol/L HCl1mol/L HCl、KNO3KNO3、NaClNaCl、K2HPO4K2HPO4 3H2O3H2O、MgSO4MgSO4 7H2O7H2O、FeSO4FeSO4 7H2O7H2O2 2、仪器或其他用具、仪器或其他用具、仪器或其他用具、仪器或其他用具 pHpH试纸、培养基分装器、高压蒸气灭菌锅、玻璃棒、天平、牛角试纸、培养基分装器、高压蒸气灭菌锅、玻璃棒、天平、牛角匙、记号笔。

试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）、电烤匙、记号笔试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）、电烤箱三、方法与步骤三、方法与步骤（一）培养基的配置（一）培养基的配置（一）培养基的配置（一）培养基的配置1 1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制、牛肉膏蛋白胨培养基的配制、牛肉膏蛋白胨培养基的配制、牛肉膏蛋白胨培养基的配制 其配方法如下：牛肉膏其配方法如下：牛肉膏3g3g，蛋白胨，蛋白胨10g10g，NaCl 5gNaCl 5g，琼脂，琼脂 1520g1520g，水，水1000mL1000mL，pH7.47.6pH7.47.61 1）称量和溶解）称量和溶解）称量和溶解）称量和溶解 按培养基配方逐一称取牛肉膏、蛋白胨等营养成分依次按培养基配方逐一称取牛肉膏、蛋白胨等营养成分依次加入烧杯中，再加定量无菌水，用玻棒搅匀，加热溶解，沸加入烧杯中，再加定量无菌水，用玻棒搅匀，加热溶解，沸腾情况下保持腾情况下保持25-3025-30民，待全部溶解后，加水补足因加热蒸发民，待全部溶解后，加水补足因加热蒸发的水量注意：在加热融化时要不断搅拌，避免琼脂糊底烧的水量注意：在加热融化时要不断搅拌，避免琼脂糊底烧焦。

焦2 2）调节）调节）调节）调节pH pH 用精密用精密pHpH试纸测培养基的试纸测培养基的pHpH，按，按pHpH的要求用质量浓度的要求用质量浓度100g/L NaOH100g/L NaOH或体积百分数或体积百分数10%HCl10%HCl调整至所需调整至所需pHpH，边加边搅，边加边搅拌，并随时用拌，并随时用pHpH试纸测试其试纸测试其pHpH值3 3）补水至刻度）补水至刻度（4 4）过滤）过滤 趁热用纱布过滤即可如果培养基杂质很少或趁热用纱布过滤即可如果培养基杂质很少或实验要求不高，可不过滤实验要求不高，可不过滤5 5）分装、包扎）分装、包扎 玻棒引流于锥形瓶内，塞上棉塞，用报纸包扎玻棒引流于锥形瓶内，塞上棉塞，用报纸包扎注意：在玻棒引流时，避免瓶口沾上培养基而引起杂菌注意：在玻棒引流时，避免瓶口沾上培养基而引起杂菌 感染感染2、伊红美蓝培养基配制方法同于牛肉膏蛋白胨培养基方法同于牛肉膏蛋白胨培养基3 3 3 3、高压蒸气灭菌的操作过程、高压蒸气灭菌的操作过程、高压蒸气灭菌的操作过程、高压蒸气灭菌的操作过程（1 1）加水）加水 立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1/31/3处。

有加水口处有加水口者由加水口加入至止水线处者由加水口加入至止水线处2 2）装锅）装锅 把需灭菌的器物放入锅内（请注意：器物不要装得太把需灭菌的器物放入锅内（请注意：器物不要装得太满，否则灭菌不彻底），加盖时将盖上的排气软管插入内层满，否则灭菌不彻底），加盖时将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内关严锅盖（对角式均匀拧紧螺旋）锅的排气槽内关严锅盖（对角式均匀拧紧螺旋）3 3）加热）加热 用电源或煤气加热，同时打开排气阀，使水沸腾以排出用电源或煤气加热，同时打开排气阀，使水沸腾以排出锅内的冷空气待冷空气完全排出后关上排气阀让锅内温锅内的冷空气待冷空气完全排出后关上排气阀让锅内温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间时，控制热源，维持压力至所需时间4 4）中断热源）中断热源 达到灭菌时间要求后停止加热，任其自然降压，当指针回达到灭菌时间要求后停止加热，任其自然降压，当指针回到到0 0时，打开排气阀（请注意，排气阀不能过早打开，否则时，打开排气阀（请注意，排气阀不能过早打开，否则培养基因压力突降，内外压力不平衡而翻腾冲到棉塞处，既培养基因压力突降，内外压力不平衡而翻腾冲到棉塞处，既损失培养基又玷污了棉塞）。

损失培养基又玷污了棉塞）5 5）揭开锅盖，）揭开锅盖，取出器物，排掉锅内剩余水取出器物，排掉锅内剩余水灭菌需待培养基冷却后置于灭菌需待培养基冷却后置于37 oC37 oC恒温箱内培养恒温箱内培养2424小时，小时，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用二）玻璃器皿的包扎（二）玻璃器皿的包扎1.洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗涤干净培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干、备用2.2.2.2.包装包装包装包装（1 1 1 1）移液管包装）移液管包装）移液管包装）移液管包装 将干燥的移液管的吸端用细铁丝塞入少许棉花构成将干燥的移液管的吸端用细铁丝塞入少许棉花构成1 11.5cm1.5cm长的棉塞，以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹长的棉塞，以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉入管内棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内将塞好棉花的移液管的尖端，放在花滑入管内将塞好棉花的移液管的尖端，放在4 45cm5cm宽的宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成长纸条的一端，移液管与纸条约成3030夹角，折叠包装纸包夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端（实验图住移液管的尖端（实验图2-12-1），用左手将移液管压紧，在），用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头折叠打结。

包好的多个移液管可再用一张大的报纸包好折叠打结包好的多个移液管可再用一张大的报纸包好2）棉塞的制作（2 2）试管和三角瓶等的包装）试管和三角瓶等的包装 用棉塞或泡沫塑料塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住用棉塞或泡沫塑料塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住然后在棉塞与管口和瓶口的外面用两层报纸与细线（或用铝然后在棉塞与管口和瓶口的外面用两层报纸与细线（或用铝箔）包扎好，放在铁丝或铜丝篓内待灭菌箔）包扎好，放在铁丝或铜丝篓内待灭菌3 3）培养皿的包装）培养皿的包装 培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸将每套培养皿培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸将每套培养皿（皿底朝里，皿盖朝外，）包好如果将培养皿放金属筒内（皿底朝里，皿盖朝外，）包好如果将培养皿放金属筒内进行干热灭菌，则不必用纸包进行干热灭菌，则不必用纸包空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌，则要多用几层报纸空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔3 3、灭菌、灭菌干热灭菌法干热灭菌法 培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热灭菌。

先将已包装好的上述物品放入恒温箱中，将温灭菌先将已包装好的上述物品放入恒温箱中，将温度调至度调至160 oC160 oC后维持后维持2 2小时，把恒温箱的调节旋扭调小时，把恒温箱的调节旋扭调回零处，待温度降到回零处，待温度降到5050o oC C左右，才可将物品取出左右，才可将物品取出请注意：灭菌时温度不得超过请注意：灭菌时温度不得超过170 oC170 oC，以免包装，以免包装纸烧焦灭菌好的器皿应保存好，切勿弄破包装纸，纸烧焦灭菌好的器皿应保存好，切勿弄破包装纸，否则会染菌否则会染菌思考题思考题1.1.培养基根据什么原理配制成？肉膏蛋白胨琼脂培培养基根据什么原理配制成？肉膏蛋白胨琼脂培养基中不同成分各起什么作用？养基中不同成分各起什么作用？2.2.在制备培养基的过程中应注意些什么问题？在制备培养基的过程中应注意些什么问题？3.3.在使用高压蒸汽灭菌锅时，怎样杜绝一切不安全在使用高压蒸汽灭菌锅时，怎样杜绝一切不安全的因素？的因素？4.4.干热电烤箱灭菌法灭菌过程中要注意什么？干热电烤箱灭菌法灭菌过程中要注意什么？。