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黄芪甲苷的含量测定研究进展摘要摘要 黄芪甲苷是中药黄芪的主要有效成分，含量测定方法较多，其测定方法主 要有高效液相色谱法、薄层扫描法、荧光法等关键词关键词 黄芪甲苷 含量测定 研究进展黄芪为常用中药,性温,味甘,具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功 能,用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泄脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气 虚水肿、久溃不敛、慢性肾炎、蛋白尿、糖尿病等症[1]现代药理研究表明,黄 芪具有器官保护、免疫调节、强心、降糖、抗衰老、抗炎抗病毒等作用[2]近 年来，对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多，本文就几种常用方法进行介绍1.高效液相色谱法(HPLC 法)HPLC 法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷 所产生的的含量测定、稳定性、药理和临床研究中1.1 HPLC-UV 法：黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收λmax=200.08nm,紫外检测灵敏度低，干扰因素多[3]，目前 HPLC 法是最常用的检测器是紫外检测器,闵庆璐等[4]采用 HPLC-UV 法测定丹黄祛瘀片中黄芪甲苷的 含量，色谱柱为 Kromasil C18 柱（250mm×4.6mm）,流动相乙腈-水(32:68)，流 速 1.0ml/min,检测波长 203nm。

结果线性范围 0.066~0.330mg/ml(r=0.9993)回收 率为 95.0%~105.0%,平均回收率 100.1%（RSD=2.0%，n=9） 1.2HPLC-示差折光检测法： 由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂 噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂池玉梅等[5]应用 HPLC-示差折光检 测法测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为 Hypersil ODS 2（4.6mm×200mm,5μm）,流动相为甲醇-水（67:33） ，结果线性范围1~5μg/ml,回收率为 98.1%，RSD 为 2.02%该方法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确可靠1.3 RP-HPLC 法：翟海云等[6]采用 RP-HPLC 法测定复方补气养血口服液中黄芪甲 苷的含量，色谱柱 Agilent C18（150mm×4.6mm,5μm）,流动相乙腈-水 （60:40） ，流速 1.0ml/min，检测波长 203nm结果黄芪甲苷的线性范围为0.34~3.40μg（r=0.9999）,平均加样回收率为 100.8%（n=6）,RSD 为 1.47%该方法简便可行，重复性好，可用于复方补气养血口服液中黄芪甲苷的含量测定。

贺福元等[7]采用反向高效液相色谱法对大鼠血浆补阳还五汤中黄芪甲苷的含量进行了测定，并进行了药动学研究采用 C18 柱（4.6mm×250mm,5μm） ，检 测波长：203nm,流动相：乙腈-水（35:65） ，结果血浆样品中黄芪甲苷的线性范 围为 2.4~12μg,r=0.9996,回收率为 100.2%，RSD 为 1.100%该法快速、简便、 准确1.4 HPLC-ELSD 法：HPLC-ELSD 法的原理是恒定流速的洗脱液进入检测器后，首 先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室，流动相及低沸点的组分被 蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射 光被光电管接收形成电信号，散射光由光电倍增管收集得到响应响应大小决 定由被分析物质的颗粒的数量和大小，而不受流动相溶剂的干扰；不要求被检 测组分有特定的化学结构[8]金平等[9]采用 HPLC-ELSD 法测定黄芪泡腾片中黄芪 甲苷的含量采用十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6mm×250mm,5μm） ，流动相： 水：乙腈（68:32） ，漂移管温度 80℃，流速 2.7L/min结果 黄芪甲苷为1.112~6.672μg 时呈良好的线性关系，平均回收率为 99.56%（RSD=1.67%）3 批样品每片含黄芪甲苷均在 2.00mg 以上。

结论该方法准确可靠、重现性好、可用 于黄芪泡腾片中黄芪甲苷的含量测定王鹏等[10]采用高效液相色谱-蒸发光散射 测定蒙古黄芪中黄芪甲苷的含量，以黄芪甲苷的含量为指标，采用正交设计法 选取影响提取的因素如超声时间、溶剂总用量、甲醇和氨水的比例及提取次数 进行考察，对醇-氨提取方法进行了优选色谱柱为 Diamonsil C18（4.6mm×250mm,5μm）,流动相：A 相为乙腈，B 相为水，梯度洗脱A 相随时间的变化为：5%（0~5min） ，6%~25%（5~15min,线性）, 26%~30%（15~20min,线性） ，31%~40%（20~40min,线性） ；流速：1.0ml/min;柱 温 25℃；ELSD 检测器漂移管温度:60℃，气流速为 2.0ml/min结果黄芪甲苷在7.5~750μg/ml 范围内线性关系良好（r=0.9985）,平均回收率为 98.0%~102.0%该方法适用于黄芪中黄芪甲苷的含量测定1.5 柱前衍生化 HPLC 法：黄芪甲苷在黄芪中含量较低 ,使采用直接 HPLC 法在 203 nm 处测定黄芪甲苷的含量干扰多而准确度低 ,给定量分析带来一定困难。

姚美村等[11]采用柱前衍生化 HPLC 法 ,对黄芪甲苷分子的羟基进行苯甲酰化反 应 ,使最大吸收波长移至 230 nm 处 ,提高了分离选择性和检测灵敏度 ,实现了 对样品中干扰物质的分离和黄芪甲苷的定量分析以吡啶 - 苯甲酰氯 ( 2. 5∶1)为 衍生化试剂 ,对黄芪甲苷分子中的羟基进行苯甲酰化色谱柱：Spherisorb ODS C18 柱 ( 4. 4× 250 mm , 5μm)，以甲醇 -四氢呋喃-水 ( 90：4：6, 0. 2% 三乙胺 )为 流动相 ，检测波长 230 nm结果黄芪甲苷在 0. 004～ 0. 080mg/mL 范围内呈 线性 (r= 0. 9999),平均回收率为 94. 7% 该法衍生化反应条件温和 ,产物稳定 ,样 品进样前处理简单 ,内标物选择适当 ,是一个较好的黄芪质量控制方法该法准 确 ,灵敏度高 ,重现性好 ,为中药黄芪质量评价提供了现代化的科学依据1.6 HPLC-MS 法：高效液相一质谱（HPLC-MS）联用仪是当前天然药物的成分、 药理与临床研究中最重要的联用仪器，能解决复杂成分样品的定性、定量问题 王锐等[12]采用 HPLC-MS-MS 测定兔血浆中黄芪甲苷的含量，采用 Agilent SB-C18 柱（4.3mm×150mm,5μm)；流动相为甲醇-5.0mmol/L 乙酸水（75:25） ；流速 为 0.8ml/min;柱后 2:1 分流，三分之一流出液进行质朴检测。

采用离子阱质谱多 级反应模式，黄芪甲苷选择 m/z807.4→627.2 为离子对，内标法测定含量结 果表明血浆中黄芪甲苷的检测限为 0.1ng/ml线性范围为 0.5~50.0μg/mL，平 均方法回收率在 96.3%~104.7%范围内该方法具有灵敏度高、稳定性好和快速 的特点,符合生物样品的分析要求,有望用于黄芪甲苷的药代动力学和组织分布研 究2.薄层扫描法（TLCS 法）薄层扫描法是指用一定波长的光照射在经薄层层析后的层析板上，对具有吸收 或能产生荧光的层析斑点进行扫描，用反射法或透射法测定吸收的强度，以检 测层析谱对于中成药复方制剂，亦可用相应的原药材按需要组合作阴、阳对 照，然后比较其薄层扫描图谱加以鉴别[13]张丽等[14]用双波长薄层色谱扫描法 测定复方黄芪胶囊中黄芪甲苷的含量采用硅胶 G 板，以氯仿：甲醇：水 （7:3:1）混合液放置过夜的下层液为展开剂，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇 溶液后 105℃加热显色至斑点显色清晰采用双波长扫描λS=530nm,λR=700nm;反射线性扫描，结果薄层色谱斑点清晰，黄芪甲苷在1.000~7.000μg/ml 范围内线性关系良好，加样回收率97.31%，RSD=1.85%（n=6） 。

该方法简单、有效、专属性强,精密度和回收率较 高,能够准确地测定黄芪甲苷的含量3.荧光法3.1 大茴香酸-硫酸体系荧光法：杨连梅等[15]利用大茴香酸在硫酸介质中与黄芪 甲苷反应产生强烈荧光的特性进行测定黄芪中黄芪甲苷含量结果黄芪甲苷与 茴香酸的反应产物的最大激发波长为 Ex=320nm,最大发射波长 Em=387nm. 黄芪 甲苷在 1.0～8.0μg/ml 其浓度与荧光强度呈良好的线性关系平均回收率为 97.22%，RSD=2.31%（n=5） 该方法灵敏度高,选择性好,结果无干扰,可广泛应用 于黄芪药材的质量控制游文玮等[16]采用荧光分光光度法，针对大鼠血清中内 源性杂质干扰严重的特点，用固相萃取净化和富集血样，再用化学衍生荧光分 光光度法测定黄芪甲苷的含量最大激发波长 Ex=310nm,最大发射波长 Em=376nm, 黄芪甲苷在 1~10μg/ml(r=0.9999)浓度范围内与荧光强度呈线性关 系平均回收率为 97.1%，RSD=2.6%(n=5)此方法灵敏准确选择性好，可用于测 定大鼠血清中黄芪甲苷3.2 香草醛-磷酸体系荧光法：韩素琴等[17]利用黄芪甲苷与香草醛在一定条件下 反应产生较强的荧光建立了香草醛-磷酸体系荧光分光光度法测定黄芪甲苷的方 法。

结果黄芪甲苷与香草醛的反应产物的最大激发波长为 Ex=365nm,最大发射 波长 Em=430nm黄芪甲苷在 1.0~20mg/L 范围内荧光强度与浓度呈线性关系， 检测限为 0.106μg/ml,回收率为 95.97%~102.1%该法具有灵敏度高、检出限低、 直接测定、无干扰等优点对黄芪口服液中黄芪甲甙含量的测定,结果理想3.3 香草醛-硫酸体系荧光法：邴建生等[18]利用在硫酸条件下香草醛与黄芪甲甙 的荧光反应测定黄芪口服液中的黄芪甲苷结果黄芪甲苷在 0.0~30.0mg/L 范围 内呈良好的线性关系，最低检测限为 0.3μg/ml黄芪甲苷与香草醛反应产物的 最大激发波长为 Ex=368nm,最大发射波长 Em=435nm回收率为 96.72%~103.30%综上所述，对黄芪甲苷的分析方法很多，但大多数制剂由于成分复杂，干扰 严重，HPLC 法和 TLCS 法因操作简单、快速、灵敏度高、重现性好而优于其他 方法近年来，随着新型检测器如 ELSD 等的不断出现，使原本无紫外吸收的黄 芪甲苷也得以很好的分离；而将色谱与质谱联用（如 HPLC-MS） ，化学衍生化 与荧光相结合，则各取所长，能同时对成分复杂的样品进行定性定量分析，尤 其在药理、临床研究中是新型有效的方法。

质谱法以气态离子为检测对象,检测 灵敏度仅与检测对象的离子化程度密切相关,而不受其紫外光吸收性质的限制,在 紫外末端吸收物质的测定方面具有独特的优势[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:中国医药科技出版社, 2010:283-284.[2]牛嵩山.黄芪甲苷的药理研究进展[J].国医论坛,2012,27(4):53:54.[3]张莲珠.HPLC 测定黄芪甲苷概况[J].中成药,2005,27(5):587-589[4]闵庆路,张世轩,陈晓明.HPLC-UV 法测定丹黄祛瘀片中黄芪甲苷的含量[J].中华 中医药学刊，2011,29(7):1678-1680.[5]池玉梅,姜海英.HPLC 示差折光检测测定黄芪精口服液中黄芪甲苷的含量[J].中 国药学杂志,2001,36（1）：114.[6]翟海云,吴燕红,黄庆华,等.RP-HPLC 法测定复方补气养血口服液中黄芪甲苷的 含量[J].中药新药与临床药理,2009,20（2）:156-158.[7]贺福元,彭关富.补阳还五汤总苷类成分部位黄芪皂苷的含量测定[J].湖南中医 学院学报,2000,7(3):131.[8]欧阳春华.黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较[J].中国现代药物应用, 2009,3(15):139-141[9]金。