第七章各类显微镜简介课件.ppt

荧光显微镜荧光显微镜 荧光显微镜和普通显微镜的区别：荧光显微镜和普通显微镜的区别：     1.照照明明方方式式通通常常为为落落射射式式，，即即光光源源通通过过物物镜投射于样品上镜投射于样品上    2.光光源源为为紫紫外外光光，，波波长长较较短短，，分分辨辨力力高高于于普通显微镜普通显微镜     3.有两个特殊的滤光片有两个特殊的滤光片      激激发发滤滤光光片片：：位位于于光光源源前前，，滤滤除除可可见见光光，，透过紫外光透过紫外光      吸吸收收滤滤光光片片：：位位于于目目镜镜和和物物镜镜之之间间，，滤滤除紫外线，用以保护人的眼睛除紫外线，用以保护人的眼睛 落射式荧光显微镜落射式荧光显微镜微管呈绿色、微丝呈红色、细胞核呈兰色微管呈绿色、微丝呈红色、细胞核呈兰色荧光显微照片荧光显微照片偏光显微镜（偏光显微镜（polarizing microscope）） 用用于于检检测测具具有有双双折折射射性性的的物物质质，，如如纤纤维维丝丝、、纺纺锤锤体体、、胶原、染色体等等胶原、染色体等等 和普通显微镜不同的是：和普通显微镜不同的是： 1.1.光光源源前前有有偏偏振振片片（（起起偏偏器器）），，使使进进入入显显微微镜镜的的光光线为偏振光。

线为偏振光 2.2.镜镜筒筒中中有有检检偏偏器器（（一一个个偏偏振振方方向向与与起起偏偏器器垂垂直直的的的检偏器）的检偏器） 3.3.载载物物台台是是可可以以旋旋转转的的，，当当载载物物台台上上放放入入单单折折射射的的物物质质时时，，无无论论如如何何旋旋转转载载物物台台，，由由于于两两个个偏偏振振片片是是垂垂直直的的，，显显微微镜镜里里看看不不到到光光线线，，而而放放入入双双折折射射性性物物质质时时，，由由于于光光线线通通过过这这类类物物质质时时发发生生偏偏转转，，因因此此旋旋转转载载物物台台便能检测到这种物体便能检测到这种物体偏偏光光显显微微镜镜的的光光路路图图偏光显微镜偏光显微镜偏光显微镜下的碎屑岩组分偏光显微镜下的碎屑岩组分相差显微镜（相差显微镜（phasecontrast microscope）） 观察未经染色的标本和活细胞观察未经染色的标本和活细胞       结构特点构特点：：     1.环环形形光光阑阑（（annular  diaphragm）） 位位于于光光源源与与聚聚光光器器之之间间，，使使透透过过聚聚光光器器的的光光线线形形成成空空心心光光锥锥，，焦聚到标本上。

焦聚到标本上      2.相相位位板板（（annular phaseplate））在在物物镜镜中中加加了了涂涂有有氟氟化化镁镁的的相相位位板板，，可可将将直直射射光光或或衍衍射射光光的的相相位位推推迟迟1/4λ分分为为两两种种：：A+相相板板：：将将直直射射光光推推迟迟1/4λ，，两两组组光光波波合合轴轴后后光光波波相相加加，，振振幅幅加加大大，，标标本本结结构构比比周周围围介介质质更更加加明明亮亮，，形形成成亮亮反反差差（（或或称称负负反反差差）） B+相相板板：：将将衍衍射射光光推推迟迟1/4λ，，两两组组光光线线合合轴轴后后光光波波相相减减，，振振幅幅变变小小，，形形成成暗暗反反差差（（或或称正反差），结构比周围介质更加变暗称正反差），结构比周围介质更加变暗 相差显微镜相差显微镜相差显微镜的工作原理相差显微镜的工作原理相差显微镜显微照片相差显微镜显微照片倒置显微镜倒置显微镜 物物镜镜在在载载物物台台之之下下，，照照明明系系统统在在载载物物台台之之上上，，用用于于观观察察培培养养的的活活细细胞胞，，具具有有相相差差物镜 微分干涉差显微镜微分干涉差显微镜（（ differential interference contrast microscope））简称简称DIC显微镜。

显微镜 显显示示结结构构的的三三维维立立体体投投影影影影像像，，适适合合于于显显微微操操作作像像基基因因注注入入、、核核移移植植、、转转基基因因等的显微操作常在这种显微镜下进行等的显微操作常在这种显微镜下进行 DICDIC利利用用的的是是偏偏振振光光，，有有四四个个特特殊殊的的光光学学组组件件：：偏偏振振器器（（polarizerpolarizer））、、DICDIC棱棱镜镜、、DICDIC滑行器和检偏器（滑行器和检偏器（analyzeranalyzer） 微微 分分 干干 涉涉差差 显显 微微 镜镜的的 光光 学学 原原理理微分干涉差显微镜下的硅藻微分干涉差显微镜下的硅藻暗视野显微镜（暗视野显微镜（dark field microscope）） 特特点点：：聚聚光光镜镜中中央央有有挡挡光光片片，，使使照照明明光光线线不不直直接接进进入入物物镜镜，，只只允允许许被被标标本本反反射射和和衍衍射射的的光光线线进进入入物物镜镜因因而而视视野野的的背背景景是是黑的，物体的边缘是亮的黑的，物体的边缘是亮的    利利用用这这种种显显微微镜镜能能看看到到小小至至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。

倍 暗视野显微镜的光学原理暗视野显微镜的光学原理暗暗视野显微镜下的莱姆病毒视野显微镜下的莱姆病毒激激光光扫扫描描共共聚聚焦焦显显微微镜镜（（Laser Laser scanning scanning ConfocalConfocal Microscopy Microscopy ，，简称简称LSCMLSCM）） 在在荧荧光光显显微微镜镜成成像像的的基基础础上上加加装装激激光光扫扫描描装装置置，，使使用用紫紫外外光光或或可可见见光光激激发发荧荧光光探探针针，，利利用用计计算算机机进进行行图图像像处处理理，，从从而而得得到到细细胞胞或或组织内部微细结构的荧光图象组织内部微细结构的荧光图象    由由于于物物镜镜和和会会聚聚透透镜镜的的焦焦点点在在同同一一光光轴轴上上，，因因而而称称这这种种方方式式成成像像的的显显微微镜镜为为共共聚聚焦焦显微镜显微镜 §激光扫描共聚焦显微镜成像原理激光扫描共聚焦显微镜成像原理     激激光光器器发发出出的的激激光光束束经经过过扩扩束束透透镜镜和和光光束束整整形形镜镜，，变变成成一一束束直直径径较较大大的的平平行行光光束束，，长长通通分分色色反反射射镜镜使使光光束束偏偏转转90度度，，经经过过物物镜镜会会聚聚在在物物镜镜的的焦焦点点上上，，样样品品中中的的荧荧光光物物质质在在激激光光的的激激发发下下发发射射沿沿各各个个方方向向的的荧荧光光，，一一部部分分荧荧光光经经过过物物镜镜、、长长通通分分色色反反射射镜镜、、聚聚焦焦透透镜镜会会聚聚在在聚聚焦焦透透镜镜的的焦焦点点处处，，再再通通过过焦焦点点处处的的针针孔孔，，由由检检测测器器接接收收。

再再利利用用计计算算机机的的图图像像处处理理及及三三维维重重建建软软件件，，可可以以得得到到高高清清晰晰度度的的图片     激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜绿色为微管，兰色为细胞核绿色为微管，兰色为细胞核扫扫 描描 电电 子子 显显 微微 镜镜 （（ scanning  electron microscope，，SEM）） 观察标本的表面结构观察标本的表面结构 工工作作原原理理：：用用一一束束极极细细的的电电子子束束扫扫描描样样品品，，在在样样品品表表面面激激发发出出次次级级电电子子，，次次级级电电子子由由探探测测器器收收集集，，并并被被闪闪烁烁器器转转变变为为光光信信号号，，再再经经光光电电倍倍增增管管和和放放大大器器转转变变为为电电信信号号来来控控制制荧荧光光屏屏上上电电子子束束的的强强度度，，显显示示出出与与电电子子束束同同步步的扫描图像的扫描图像扫描电子显微镜扫描电子显微镜 小麦籽粒中的淀粉粒小麦籽粒中的淀粉粒胡桃叶表皮透射电子显微镜透射电子显微镜 用用电子束作光源，用电磁场作透镜电子束作光源，用电磁场作透镜 电电子子显显微微镜镜的的放放大大倍倍数数最最高高可可达达近近百百万万倍倍，，由由电电子子照照明明系系统统、、电电磁磁透透镜镜成成像像系系统统、、真真空空系系统统、、记记录录系系统统、、电电源源系系统统等等5部部分分构构成。

成 透射电子显微镜透射电子显微镜玉米叶肉细胞透射电镜照片玉米叶肉细胞透射电镜照片。