還少丹抗老化實驗.pdf

還少丹於減緩老化之應用研究 王銘富 1 戴維成2 李宗勳3 黃克2 1靜宜大學食品營養研究所 2靜宜大學應用化學研究所 台中，台灣 3正和製藥有限公司 台南，台灣 (2005 年1 月24 日受理，2005 年3 月21 日接受刊載) 還少丹為補益良藥，具有補腎養心，益陰壯陽的作用本研究在探討長期餵食不同濃度還 少丹對 2 月齡及 6 月齡老化促進小白鼠（senescence-accelerated mouse prone-8；SAM-P8）減緩 老化之影響，並比較不同年齡間之差異實驗結果顯示，雄性 2 月及 6 月齡小鼠餵食添加 0.50% 與 1.00% 還少丹組可以減緩老化的進行，且均達統計上之差異（p 0.05）；但在雌性 2 月及 6 月齡小鼠則沒有顯著的差異 關鍵詞：還少丹，老化指數，老化促進小白鼠（senescence-accelerated mouse prone-8； SAM-P8），減緩老化 前 言 近年來，臺灣在經濟及醫療等各方面之進步，生活水準提高，國人之平均壽命不斷延長，根據民國八 十九年底行政院內政部之人口統計 1，老年人口約佔總人口之百分八點五七，表示臺灣已邁入高齡化社會， 根據行政院經濟建設委員會 2的推估，依賴人口比率將從2004 的9.4% 增至2014 年11.6%，2051 年35.5%。

相對的高齡化社會中普遍存在的老年性失智症（senile dementia）或早老年性失智症（presenile dementia） 的患者，在臺灣社會中亦有逐年上升的趨勢 3，其主要的特徵為記憶力及其他它智能的逐漸減退 古代醫藥典籍已記載許多抗老延年的中藥與方劑，如「本草綱目」與「千金要方」等，近代的藥理研 究均證實補腎健脾藥之「六味地黃丸」4具有抗衰老作用1999 年中國醫藥學院校長謝明村教授 5之研究更 進一步證實「六味地黃丸」具有增強記憶之特殊療效，引起國內一陣搶購風潮1998 吳榮燦教授等 6嘗試由 不同的角度來探討中醫書籍上所記載之抗老化中藥的活性及作用機制；2001，2003 年楊淑齡 7利用人體纖維 聯絡人：黃克，靜宜大學應用化學研究所，電話：04-26328001 ext. 15206，傳真：04-26327554 J Chin Med 16(1): 35-46, 2005 35 還少丹於減緩老化之應用研究 36 母細胞進行中藥減緩老化之篩選研究可見中草藥中含有豐富的化學物質，是一個新藥開發的寶庫因此， 延緩老化或抗衰老藥物之開發已成為近代醫藥學家重視及努力之目標8-16 還少丹（Huan-Shao-Dan）17為補益劑由 15 種藥材組成，分別是山藥、牛膝、茯苓、山茱萸、楮實、杜 仲、五味子、巴戢天、肉蓯蓉、遠志、小茴香、石菖蒲、熟地黃、枸杞子、大棗。

具有補腎養心，益陰壯 陽之活性，廣泛使用於中醫處方中 最近幾年，我們嘗試利用具有自然老化與智能逐漸衰退特性之老化促進小白鼠（senescence-accelerated mouse prone-8；SAM-P8）18為實驗動物模型，希望由此角度切入延緩老化或抗衰老藥物方面之研究本研 究目的，在於探討給予不同劑量的還少丹，對學習記憶缺損的老化促進小白鼠（SAM-P8） ，其減緩老化之 關聯，並比較不同月齡間之差異，期望藉由持續的研究對中草藥之科學化有所助益 材料與方法 一、還少丹 (一)來源：本實驗所用的還少丹乃由正和製藥股份有限公司所提供每 10.5 克還少丹中含有生藥浸膏（6.5 gm）和澱粉（4.0 gm） (二)組成成分：山藥（3.0 gm） 、牛膝（3.0 gm） 、茯苓（2.0 gm） 、山茱萸（2.0 gm）楮實（2.0 gm） 、杜仲 （2.0 gm） 、五味子（2.0 gm） 、巴戢天（2.0 gm） 、肉蓯蓉（2.0 gm） 、遠志（2.0 gm） 、小茴 香（2.0 gm） 、石菖蒲（1.0 gm） 、熟地黃（1.0 gm） 、枸杞子（1.0 gm） 、大棗（1.0 gm）將 以上生藥製成浸膏 （6.0 gm） （生藥與浸膏比例：28：6 = 4.67：1） 還少丹分別以0%、0.25%、 0.50%、1.00% 及2.00%（w/w）之劑量做成實驗飼料。

二、實驗動物與飼料 本實驗以自行繁殖飼養的老化促進小白鼠（senescence-accelerated mouse prone-8；SAM-P8）為實驗動 物模型 19,20此老化促進品系之老鼠18,21-24係由日本京都大學所研發出來的，平均壽命約 299 日（10 個月） ， 早期即會產生停止體重增加、毛髮呈現脫落、類澱粉蛋白沉積增加與免疫系統較差等現象；它的腦部病理 特徵與老化相關之形態變化，包括神經元細胞喪失、皮質萎縮、脂褐質、、腦幹網狀組織的海綿樣變性等特 徵迄目前為止，SAM-P8 是一種非常適合老化相關研究之實驗動物 動物飼養在 30（長）× 20（寬）× 10（高）cm 之透明塑膠籠中動物房為一無塵自動控制室，溫度維 持在 25 ± 2 °C、相對濕度 65 ± 5% 之條件，並以自動定時器控制光照週期為 07：00~19：00 屬於黑暗期 （light period） ，19：00~翌日07：00 屬於光照期（dark period） 小白鼠離乳後，以一般固型飼料飼養至 2 月齡（低月齡組）及 6 月齡（高月齡組）為對象，每組雄性 及雌性小白鼠隻數各為 10 隻；同時在實驗初體重等各項條件也盡量相似，以求實驗誤差減至最小。

實驗設 計是將小白鼠分為控制組及不同劑量的實驗組，分別以投食的方式給予混有不同濃度還少丹的實驗飼料， 王銘富 戴維成 李宗勳 黃克 37 實驗飼料組成如（表1）所示，其調配以20% 酪蛋白為主，混合1% vitamin mixture、5% mineral mixture、 2% cellulose powder、5% corn oil，實驗組再分別添加 0.25%、0.50%、1.00% 及 2.00% 的還少丹；其餘部 分為玉米澱粉及蔗糖以2：1 之比例組合 四、實驗流程與方法 19,20 實驗流程如圖 1 所示實驗進行前動物先經 3-5 天之適應期，餵飼一般固型飼料，實驗開始以 20% 酪 蛋白（casein）為對照組，以 20% 酪蛋白（casein）分別添加 0.25%、0.50%、1.00% 及 2.00% 不同濃度還 少丹為實驗組，全程為期 16 週實驗期間，小白鼠的飼料及飲水採自由攝取，每兩天給予飼料一次並記錄 小白鼠之體重及攝食量 五、老化指數評估 21 於餵食 16 週後進行老化指數評估，所評估的項目包括行為方面：觀察小鼠 30 秒的探索反應及捏頸背 皮的逃避反應；外觀方面：觀察毛髮的光澤度、粗糙度、毛髮脫落的情形及皮膚潰瘍的狀況；眼睛方面： 觀察眼瞼的水腫情形；以及觸摸脊柱前後彎曲的變化。

每各項目約有 5 個等級，分別為 0、1、2、3 及 4， Table 1. Compositions of the experimental diets *Group Ingredients ( g / kg diet )ABCDE Casein1217.0217.0217.0217.0217.0 α-starch2435.3433.7432.0428.7422.0 Sucrose2217.7216.8216.0214.3211.0 Huan-Shao-Dan02.55.010.020.0 Vitamin mixture310.010.010.010.010.0 Mineral mixture450.050.050.050.050.0 Cellulose20.020.020.020.020.0 Corn oil50.050.050.050.050.0 1Casein (92% crude protein) was purchased from Oriental Yeast Co. (Tokyo, Japan). 2α-starch: sucrose, 2:1 ratio. 3Obtained from Oriental Yeast Co. (Tokyo, Japan). The composition was as follow (g/kg): thiamin HCl, 12; riboflavin, 40; pyridoxine HCl, 8; vitamin B12, 50; ascorbic acid, 300; D-biotin, 0.2; folic acid, 2; calcium pantothenate, 50; p-aminobenzoic acid, 50; niacin, 60; inositol, 60; choline chloride, 2000; all-rac-α-tocopheryl acetate, 50; menadione, 52; retinyl acetate, 0.025; ergocalciferol, 10. 4Obtained from Oriental Yeast Co. (Tokyo, Japan). The composition was as follow (g/kg): CaHPO 4·2H2O, 14.56; KH2PO4, 25.72; NaH2PO4, 9.35; NaCl, 4.66; Ca-lactate, 35.09; Fe-citrate, 3.19; MgSO4, 7.17; Zn CO3, 0.11; MnSO4·4-5H2O, 0.12; CuSO4·5H2O, 0.03; KI, 0.01. *A = Control B = Huan-Shao-Dan (HSD) 0.25% C = Huan-Shao-Dan (HSD) 0.50% D = Huan-Sha-Dan (HSD) 1.00% E = Huan-Shao-Dan (HSD) 2.00% 還少丹於減緩老化之應用研究 38 各項目等級及定義（如表2）所示。

分數越高者，表示老化現象越嚴重 統計分析 本實驗所得之資料以 SPSS 套裝軟體進行統計分析，實驗結果數值皆以平均值 ± 平均標準誤差（mean ± S.E.M.）表示老化指數評估利用單因子變異數分析（one-way analysis of variance；one-way ANOVA） ， 以檢定餵食不同飼料各組間之差異，當 p 0.05 或p 0.01 或p 0.001 表示具有顯著性差異 結果與討論 2 月及 6 月齡雄性與雌性 SAM-P8 小鼠經餵食添加不同濃度還少丹實驗飼料 16 週後，各組間的體重及 攝食效率之變化結果如表3 和表4 所示 2 月及 6 月齡雄性與雌性小鼠經餵食 16 週之後，6 月齡小鼠的體重均比 2 月齡重，表示其 SAM-P8 小 鼠在 6~10 月齡時，體重還是會再成長，是否為餵食還少丹之效果，因無統計上之明顯差異，尚待進一步探 討但是經過 16 週後 6 月齡小鼠其體重的增加量並無 2 月齡多，體重之增加量在同月齡間並無差異；且 每日攝食量方面同月齡各組間亦無明顯差異同時，不同月齡各組間也無明顯差異；其攝食效率在各組間 亦無明顯差異，但其攝食效率 2 月齡均比 6 月齡高。

這樣的結果亦證實 6 月齡的小鼠其體重變化空間本來 就較小，所以體重的增加量並無2 月齡組的多，且其攝取效率亦較低 2 月齡及6 月齡雄性SAM-P8 系小鼠，經餵食16 週後，老化指數評估結果如表5 和表 6 所示在 2 月 齡雄性小鼠方面，毛髮光澤度（glossiness） ：控制組和添加 0.50%（p 0.01） 、1.00%（p 0.001）及 2.00% （p 0.001）還少丹組有明顯之差異；毛髮粗糙度（coarseness） ：控制組和添加 0.25%、0.50% 及 2.00% 23 2 Fax: 04-26。