凝集反应.ppt

第二章第二章 抗原抗体反应抗原抗体反应实验二实验二 免疫凝集试验免疫凝集试验凝集反应（agglutination）•是指是指颗粒性抗原颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒致敏颗粒后，与相应的抗体（或抗原）在适量的后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象聚成肉眼可见的凝集现象凝集反应的特点凝集反应的特点•颗粒性抗原颗粒性抗原•致敏颗粒致敏颗粒（可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合）（可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合）•电解质的存在电解质的存在•肉眼可见的凝集现象肉眼可见的凝集现象凝集反应的发生分两阶段：①抗原抗体的特异结合抗原抗体的特异结合②出现可见的颗粒凝集出现可见的颗粒凝集凝集反应的类型直接凝集试验直接凝集试验玻片凝集试验：玻片凝集试验：ABO血型血型试管凝集试验：外斐试验，肥达试验试管凝集试验：外斐试验，肥达试验间接凝集试验间接凝集试验正向间接凝集试验正向间接凝集试验反向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集抑制试验间接凝集抑制试验协同凝集试验协同凝集试验间接血凝试验间接血凝试验胶乳凝集试验胶乳凝集试验明胶凝集试验明胶凝集试验•根据凝集反应中抗原的性质，根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式分为：反应的方式分为：①直接凝集反应直接凝集反应②间接凝集反应间接凝集反应直接凝集反应（direct agglutination） 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为与相应抗体结合出现凝集，称为直直接凝集反应。

接凝集反应参加反应的颗粒性抗参加反应的颗粒性抗原称为原称为凝集原凝集原（（agglutinogen）），抗体，抗体称为称为凝集素凝集素（（agglutinin）） 玻片法：（定性）玻片法：（定性）–细菌鉴定细菌鉴定–ABO血型的鉴定血型的鉴定试管法：试管法： （半定量）（半定量）–肥达试验（肥达试验（Widal test））---伤寒伤寒–外斐试验（外斐试验（Weil-Felix test））---立克立克次体次体–交叉配血试验交叉配血试验间接凝集反应（indirect agglutination）•将将可溶性抗原可溶性抗原（或抗体）先吸附或偶联与（或抗体）先吸附或偶联与免疫无关大小适当的免疫无关大小适当的颗粒性载体颗粒性载体的表面，的表面，使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗体使之成为致敏载体颗粒，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜的电解质存在的（或抗原）作用，在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象，称条件下，出现特异性凝集现象，称间接凝间接凝集反应集反应（（indirect agglutination）或）或被被动凝集反应动凝集反应（（passive agglutination）。

其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应常用载体：ØRBCØ聚苯乙烯胶乳（聚苯乙烯胶乳（polystyrene latex））Ø明胶颗粒明胶颗粒Ø活性炭活性炭Ø皂土（皂土（bentonite）） Ø火棉胶火棉胶 间接凝集反应分类依据•根据致敏载体用的是抗原（正向）或抗根据致敏载体用的是抗原（正向）或抗体（反向）体（反向）•根据载体（根据载体（RBC，胶乳，明胶），胶乳，明胶）•根据凝集反应的方式（间接凝集试验，根据凝集反应的方式（间接凝集试验，间接凝集抑制试验，协同凝集试验）间接凝集抑制试验，协同凝集试验）间接反应的常见类型–间接凝集试验间接凝集试验–间接血凝试验间接血凝试验–胶乳凝集试验胶乳凝集试验 –明胶凝集试验明胶凝集试验–间接凝集反应的应用间接凝集反应的应用1、（正向）间接凝集试验2 反向间接凝集试验3、间接凝集抑制试验本次实验内容•一、第一次加强免疫一、第一次加强免疫•二、二、ABO血型鉴定血型鉴定目的与要求•掌握凝集反应的原理与类型•掌握玻片凝集法操作与结果判断•熟悉ABO血型鉴定的原理与操作玻片凝集法-ABO血型鉴定•试验目的 通过标准血清抗体鉴定红细胞上ABO血型系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型系统正定型的基本操作方法和结果判断。

实验原理•根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特异性抗原结合能够出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红细胞在盐水介质中反应（室温），若出现凝集想象，表明被检红细胞膜上有与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型实验材料与方法•试剂：抗试剂：抗A血清，抗血清，抗B血清血清•材料：玻片，采血针，消毒干棉球，酒材料：玻片，采血针，消毒干棉球，酒精棉球等精棉球等实验方法与步骤1、标记玻片：取玻片一张，一分为二，分别标记为抗、标记玻片：取玻片一张，一分为二，分别标记为抗A，抗，抗B2、采血：用酒精棉球消毒被检者左手无名指或中指内侧，、采血：用酒精棉球消毒被检者左手无名指或中指内侧，用采血针刺破皮肤，用干棉球擦去第一滴血，稍加挤用采血针刺破皮肤，用干棉球擦去第一滴血，稍加挤压，使其流出第二滴血，装入盐水试管，摇匀，即成压，使其流出第二滴血，装入盐水试管，摇匀，即成血细胞悬液血细胞悬液3、加抗血清：滴加抗、加抗血清：滴加抗A，抗，抗B血清于玻片标记处、血清于玻片标记处、4、加、加RBC：在抗：在抗A，抗，抗B血清中滴加血清中滴加RBC各一滴5、混匀：前后左右摇动，观察有无血细胞凝集出现。

混匀：前后左右摇动，观察有无血细胞凝集出现6、结果：记录受检者红细胞凝集情况及血型鉴定结果结果：记录受检者红细胞凝集情况及血型鉴定结果ABO血型结果判断抗B抗A血型-++-++--试管凝集试验试管凝集试验•多用于半定量试验，原则上是用定量抗多用于半定量试验，原则上是用定量抗原悬液与一系列倍比稀释的受检血清混原悬液与一系列倍比稀释的受检血清混合，在保温静置后观察结果，以判定受合，在保温静置后观察结果，以判定受检血清中有无相应抗体及其效价检血清中有无相应抗体及其效价•常有肥达试验，外常有肥达试验，外-斐试验，交叉配血试斐试验，交叉配血试验等思考题思考题•凝集试验有哪些？可用于检测的原理是凝集试验有哪些？可用于检测的原理是什么？什么？。