实验二酶的底物专一性课件.ppt

实验二实验二 酶的底物专一性实验目的l理解酶的专一性理解酶的专一性l掌握检查酶专一性的原理和方法掌握检查酶专一性的原理和方法l学会排除干扰因素，设计酶学实验学会排除干扰因素，设计酶学实验实验内容实验内容 本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用酶的专一性物起催化作用，对其他底物无催化作用酶的专一性程度分为：程度分为：l键专一性：键专一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求如脂酶、核酶团无严格要求如脂酶、核酶l基团专一性：基团专一性：对键两端或一端的基团要求严格，如对键两端或一端的基团要求严格，如α-α-、、β-β-葡萄糖苷酶，转移酶葡萄糖苷酶，转移酶l绝对专一性：绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶只作用于一种底物，如某些核酸工具酶l立体异构专一性：立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性旋光异构专一性和几何异构专一性实验原理实验原理------酶的专一性淀淀 粉粉直链淀粉直链淀粉: 由由200-300个个α-葡萄糖以葡萄糖以α-1，，4糖苷糖苷键相连成一直链键相连成一直链支链淀粉支链淀粉:有有α-1，，4糖苷键和糖苷键和α-1，，6糖苷键，糖苷键，在直链淀粉的基础上形成分支在直链淀粉的基础上形成分支 直直链链淀淀粉粉的的相相对对分分子子质质量量比比支支链链淀淀粉粉小小，，直直链链淀淀粉粉的的分分子子是是由由许许多多α-D-α-D-葡葡萄萄糖糖经经过过α-1α-1，，4-4-苷苷键键反反复复连连接接而而成成的线状聚合物。

的线状聚合物直链淀粉直链淀粉 直直链链淀淀粉粉的的形形状状并并不不是是伸伸展展状状态态的的直直链链，，而而是是有有规规律律的的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有 6 6个葡萄糖结构单位个葡萄糖结构单位 直直链链淀淀粉粉遇遇碘碘液液显显蓝蓝色色，，加加热热煮煮沸沸时时颜颜色色消消失失，，冷冷却却后后又又重重新新显显色色这这个个反反应应很很灵灵敏敏，，常常用用来来检检验验淀淀粉粉或或碘的存在碘的存在 支支链链淀淀粉粉比比直直链链淀淀粉粉由由更更多多的的D-D-葡葡萄萄糖糖组组成成，，其其连连接接方方式式也也有有所所不不同同支支链链淀淀粉粉中中D-D-葡葡萄萄糖糖之之间间以以α-1α-1，，4 4苷苷键键连连接接成成主主链链，，每每隔隔2020－－2525个个葡葡萄萄糖糖单单位位便便分分枝枝出出1 1个个支支链链，，支支链链上上还还有有分分枝枝，，而而支支链的连接点即分枝处为链的连接点即分枝处为α-lα-l，，6 6糖苷键支链淀粉支链淀粉半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧——α-D-葡萄糖；半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧——β-D-葡萄糖。

 由α-葡萄糖和β-果糖以α-1，2糖苷键相连而成的双糖蔗蔗 糖糖Benedict反应反应 lBenedictBenedict试剂试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀l淀粉淀粉和蔗糖蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用试试 剂剂淀粉酶溶液：淀粉酶溶液：唾液唾液2mL 2mL 倒入倒入10mL10mL量筒中（不包括量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到泡沫），用蒸馏水稀释到5mL5mL，静置，静置1010分钟后，去分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀掉上层泡沫和下层的沉淀自制）（自制）0.5%0.5%淀粉溶液（含淀粉溶液（含0.3%NaCl0.3%NaCl）） （取前摇匀）（取前摇匀）2%2%蔗糖溶液蔗糖溶液BenedictBenedict试剂试剂试试 剂剂蔗糖酶溶液：蔗糖酶溶液：蔗糖酶溶液：蔗糖酶溶液：干酵母干酵母1 1 1 1g g置研钵中，加半勺石英沙置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约及蒸馏水少许（约4mL4mL），用力研磨），用力研磨1010分钟，转移分钟，转移到到50mL50mL离心管中，另用离心管中，另用30mL30mL蒸馏水洗涤研钵，并蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5 5分钟，分钟，离心离心( ( ( (离心前对称放置的两只离心管要等重配平，离心前对称放置的两只离心管要等重配平，离心前对称放置的两只离心管要等重配平，离心前对称放置的两只离心管要等重配平，精确到精确到精确到精确到0.01g)0.01g)0.01g)0.01g)，小心取出上清液（含蔗糖酶）备，小心取出上清液（含蔗糖酶）备用。

用 （自制）（自制）Benedict试剂l 在在600mL600mL蒸馏水中溶解蒸馏水中溶解173g173g柠檬酸钠柠檬酸钠和和100g100g无水无水碳酸钠碳酸钠，冷却后稀释到，冷却后稀释到850mL850mLl在在100mL热蒸馏水中溶解热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜无水硫酸铜冷却后稀释到后稀释到150mL把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠－碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀要－碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀要过滤，班氏试剂配制后能长期使用如存放较久过滤，班氏试剂配制后能长期使用如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配试管试管1 1试管试管2 2试管试管3 30.5%0.5%淀粉溶液淀粉溶液/mL/mL3 32%2%蔗糖溶液蔗糖溶液/mL/mL3 3蒸馏水蒸馏水/mL/mL3 3BenedictBenedict试剂试剂/mL/mL2 22 22 2摇匀，沸水煮摇匀，沸水煮2 2分钟分钟观察记录结果观察记录结果原因原因实验步骤实验步骤---检查试剂检查试剂试管试管4试管试管5试管试管6稀释的唾液淀粉酶稀释的唾液淀粉酶/mL1110.5%淀粉溶液淀粉溶液/ mL32%蔗糖溶液蔗糖溶液/ mL3蒸馏水蒸馏水/ mL3摇匀，摇匀，37℃保温保温45分钟分钟Benedict试剂试剂/ mL222 摇匀，沸水煮沸摇匀，沸水煮沸2分钟分钟观察记录结果观察记录结果原因原因实验步骤实验步骤---淀粉酶的专一性淀粉酶的专一性实验步骤实验步骤---蔗糖酶的专一性蔗糖酶的专一性试管试管7试管试管8试管试管9蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液/ mL1110.5%淀粉溶液淀粉溶液/ mL32%蔗糖溶液蔗糖溶液/ mL3蒸馏水蒸馏水/ mL3摇匀，摇匀，37℃保温保温15分钟分钟Benedict试剂试剂/ mL222摇匀，沸水煮摇匀，沸水煮2分钟分钟观察记录结果观察记录结果原因原因思考题思考题• 观察酶的专一性为什么要设计这观察酶的专一性为什么要设计这观察酶的专一性为什么要设计这观察酶的专一性为什么要设计这3 3组实验？组实验？组实验？组实验？• 每组各有什么意义？每组各有什么意义？每组各有什么意义？每组各有什么意义？• 每组中蒸馏水分别起什么作用？每组中蒸馏水分别起什么作用？每组中蒸馏水分别起什么作用？每组中蒸馏水分别起什么作用？• 将酶煮沸将酶煮沸将酶煮沸将酶煮沸1010分钟，重做可能会有什么结果？分钟，重做可能会有什么结果？分钟，重做可能会有什么结果？分钟，重做可能会有什么结果？。